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牛干扰素诱导蛋白-10单克隆抗体的制备及其流式检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
徐正中
沈轩云
+3 位作者
朱兆成
夏爱鸿
陈祥
焦新安
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期959-964,共6页
为制备针对牛干扰素诱导蛋白-10(BoIP-10)的高亲和力单克隆抗体(MAb),并建立基于胞内染色技术的BoIP-10流式检测方法,本研究以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BoIP-10为免疫原,使用纯化的rGST-BoIP-10为筛选抗原,利用淋巴细胞杂交瘤技术制...
为制备针对牛干扰素诱导蛋白-10(BoIP-10)的高亲和力单克隆抗体(MAb),并建立基于胞内染色技术的BoIP-10流式检测方法,本研究以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BoIP-10为免疫原,使用纯化的rGST-BoIP-10为筛选抗原,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对BoIP-10的MAb,结果显示,筛选获得8株稳定分泌BoIP-10 MAb的细胞株,分别为3E11、2A5、1C6、3B12、3E12、2D5、2H8和3A12;通过间接ELISA鉴定MAbs与真核BoIP-10的反应性,结果显示2A5、2D5、2H8等3株MAb与毕赤酵母表达的BoIP-10有较好的反应性;进一步采用阻断ELISA方法评价MAbs是否结合血浆中的天然BoIP-10,结果表明MAb 2D5可以识别血浆中的天然BoIP-10。将MAbs进行荧光标记后建立BoIP-10流式检测方法,结果显示建立的BoIP-10流式检测方法最佳刺激剂为ConA,最优刺激浓度为20μg/mL,最佳MAb株为2D5,MAb的最优使用浓度为4μg/mL。采用该BoIP-10流式方法检测BCG诱导牛外周血单核细胞Bo IP-10的表达水平,结果显示BCG体外感染牛外周血单核细胞12 h时表达较高水平的Bo IP-10。本研究制备并筛选出针对天然Bo IP-10的特异性MAb 2D5,基于此建立的流式检测方法为进一步研究Bo IP-10在牛机体免疫应答评价、牛结核病等传染性动物疫病诊断中的应用提供新的技术手段。
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关键词
牛干扰素诱导蛋白-10
单克隆抗体
流式检测方法
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职称材料
题名
牛干扰素诱导蛋白-10单克隆抗体的制备及其流式检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
徐正中
沈轩云
朱兆成
夏爱鸿
陈祥
焦新安
机构
扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期959-964,共6页
基金
国家重点研发计划(2017YFD0500300、2018YFD0500500)
江苏省自然科学基金(BK20201432)
+2 种基金
扬州大学科技创新培育基金(2019CXJ158)
江苏“六大人才高峰”(SWYY-083)
优势学科建设工程项目(PAPD)联合资助
文摘
为制备针对牛干扰素诱导蛋白-10(BoIP-10)的高亲和力单克隆抗体(MAb),并建立基于胞内染色技术的BoIP-10流式检测方法,本研究以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BoIP-10为免疫原,使用纯化的rGST-BoIP-10为筛选抗原,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对BoIP-10的MAb,结果显示,筛选获得8株稳定分泌BoIP-10 MAb的细胞株,分别为3E11、2A5、1C6、3B12、3E12、2D5、2H8和3A12;通过间接ELISA鉴定MAbs与真核BoIP-10的反应性,结果显示2A5、2D5、2H8等3株MAb与毕赤酵母表达的BoIP-10有较好的反应性;进一步采用阻断ELISA方法评价MAbs是否结合血浆中的天然BoIP-10,结果表明MAb 2D5可以识别血浆中的天然BoIP-10。将MAbs进行荧光标记后建立BoIP-10流式检测方法,结果显示建立的BoIP-10流式检测方法最佳刺激剂为ConA,最优刺激浓度为20μg/mL,最佳MAb株为2D5,MAb的最优使用浓度为4μg/mL。采用该BoIP-10流式方法检测BCG诱导牛外周血单核细胞Bo IP-10的表达水平,结果显示BCG体外感染牛外周血单核细胞12 h时表达较高水平的Bo IP-10。本研究制备并筛选出针对天然Bo IP-10的特异性MAb 2D5,基于此建立的流式检测方法为进一步研究Bo IP-10在牛机体免疫应答评价、牛结核病等传染性动物疫病诊断中的应用提供新的技术手段。
关键词
牛干扰素诱导蛋白-10
单克隆抗体
流式检测方法
Keywords
bovine interferon-inducible protein-10
monoclonal antibody
flow cytometry
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛干扰素诱导蛋白-10单克隆抗体的制备及其流式检测方法的建立
徐正中
沈轩云
朱兆成
夏爱鸿
陈祥
焦新安
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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