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基于生物信息学和动物实验筛选缺血性脑卒中血管新生关键基因与活血荣络方的干预作用 被引量:1
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作者 龚翠兰 马强 +2 位作者 杨仁义 颜思阳 周德生 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期3834-3842,共9页
目的基于生物信息学探索缺血性脑卒中血管新生的分子机制,并采用动物实验研究活血荣络方的干预机制。方法通过分析转录组数据,筛选缺血性脑卒中血管新生关键基因,验证基因表达差异并进行相关性分析,构建PPI网络。通过R语言clusterProfi... 目的基于生物信息学探索缺血性脑卒中血管新生的分子机制,并采用动物实验研究活血荣络方的干预机制。方法通过分析转录组数据,筛选缺血性脑卒中血管新生关键基因,验证基因表达差异并进行相关性分析,构建PPI网络。通过R语言clusterProfiler包进行GO、KEGG富集分析,通过Cytoscape 3.9.1软件构建“靶点-中药”对应关系。建立大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型,分为假手术组、模型组和活血荣络方低、中、高剂量组(5.85、11.7、23.4 g/kg),进行改良神经功能缺损评分,HE染色检测大鼠脑组织病理损伤情况,Nissl染色检测大鼠脑组织海马区神经元损伤情况,Western blot法检测大鼠脑组织CD44、MT2A、GPNMB、S100A6、VEGFA蛋白表达。结果共得到8个缺血性脑卒中血管新生关键基因,外部数据验证这些关键基因在缺血性脑卒中中的高表达,并发现它们之间存在显著正相关关系。活血荣络方能剂量依赖性地改善神经功能缺损症状,减轻神经元病理损伤,并增加尼式小体数目,升高CD44、MT2A、GPNMB、S100A6、VEGFA蛋白表达。结论活血荣络方通过多靶点机制促进缺血性脑卒中后血管新生,改善神经功能缺损症状,为中医药治疗缺血性脑卒中提供了新的依据和方向。 展开更多
关键词 活血荣络方 性脑卒中 管新生 关键基因 生物信息学
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活血荣络方对Aβ_(25-35)损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响 被引量:7
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作者 陈瑶 周德生 胡华 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第10期2438-2441,I0010-I0012,共7页
目的:旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法:分别将Aβ25-35损伤星形胶质细胞铺板,以(2.53)×104/孔的密度接种到96孔... 目的:旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法:分别将Aβ25-35损伤星形胶质细胞铺板,以(2.53)×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、s FRP组、空白组;待细胞的融合率为85%90%时,含药组分别给予相应的含药血清,s FRP组给予s FRP,空白组予以空白血清。取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h。分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、Ca MKⅡ的含量。结果:各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 h OD值明显高于12 h(P〈0.05),而空白组、s PRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P〉0.05);各给药组细胞活性均高于空白组(P〈0.05),其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞活性低于空白组(P〈0.05)。各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h(P〈0.05),s PRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P〉0.05);各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及s PRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞凋亡比例高于空白组(P〈0.05)。各给药组Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达均高于空白组(P〈0.05),其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组(P〈0.01),空白组明显高于s PRF组(P〈0.05);其它给药组间比较:2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组(P〈0.01),1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异(P〉0.05),此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组(P〈0.05)。结论:活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳。 展开更多
关键词 活血荣络方 阿尔茨海默病 Wnt5α Fz5 CaMKⅡ Aβ25-35损伤神经胶质细胞
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基于“TF-miRNA”反馈环探讨活血荣络方对脑梗死大鼠的保护作用及机制 被引量:3
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作者 杨仁义 颜思阳 +4 位作者 周德生 高晓峰 傅馨莹 龚翠兰 刘利娟 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1429-1437,共9页
目的基于活血荣络方对"转录因子(TF)-微小RNA(miRNA)"反馈环的影响,研究其对脑梗死大鼠的保护作用。方法通过GEO、TargetScans、starBase、TransmiR v2.0数据库,采用R语言构建"TF-miRNA"反馈环。将大鼠随机分为假... 目的基于活血荣络方对"转录因子(TF)-微小RNA(miRNA)"反馈环的影响,研究其对脑梗死大鼠的保护作用。方法通过GEO、TargetScans、starBase、TransmiR v2.0数据库,采用R语言构建"TF-miRNA"反馈环。将大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组及丁苯酞组,建立MCAO/R模型,灌胃给药7 d;采用mNSS(改良神经功能缺损评分)、HE(苏木素-伊红染色)、Nissl(尼氏染色)分别评价各组大鼠神经功能、病理及尼氏小体情况;RT-PCR法检测"TF-miRNA"反馈环中KLF4、KLF5、miR-206、miR-429及反馈环反向VEGF mRNA表达。结果生物信息学构建出"KLF4-miR-206""KLF4-miR-544""KLF4-miR-429""KLF5-miR-429""EBF1-miR-429"5个"TF-miRNA"反馈环。与假手术组比较,模型组mNSS,KLF4、KLF5、VEGF mRNA与miR-206、miR-429表达升高(P<0.01);与模型组比较,活血荣络方组与丁苯酞组mNSS 1 d无明显变化(P>0.05),3、7 d mNSS降低(P<0.01),KLF4表达升高,miR-206、miR-429表达降低(P<0.01);活血荣络方组KLF5、VEGF表达升高(P<0.05);丁苯酞组KLF5、VEGF表达升高(P<0.01);且药物均能改善脑梗死大鼠的病理损伤。结论活血荣络方能上调TFs(KLF4、KLF5)、下调miRNAs(miR-206、miR-429)的表达,打破脑梗死大鼠中存在的"TF-miRNA"反馈环,可能通过介导VEGF的表达促脑梗死后血管新生,起到神经保护作用。 展开更多
关键词 活血荣络方 脑梗死 TF-miRNA 反馈环
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基于miR-370-3p与JAK2/STAT3通路相关性探讨活血荣络方促缺血性脑卒中后血管新生的机制 被引量:14
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作者 龚翠兰 杨仁义 +3 位作者 周德生 凌佳 傅馨莹 李俊熙 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期297-304,共8页
目的基于miR-370-3p与JAK2/STAT3通路相关性探讨活血荣络方促缺血性脑卒中后血管新生的机制。方法将大鼠随机分为6组,MCAO/R法造模,灌胃给药7 d后免疫荧光染色观察脑组织CD31、vWF及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth facto... 目的基于miR-370-3p与JAK2/STAT3通路相关性探讨活血荣络方促缺血性脑卒中后血管新生的机制。方法将大鼠随机分为6组,MCAO/R法造模,灌胃给药7 d后免疫荧光染色观察脑组织CD31、vWF及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达;Western blot法检测脑组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达;Real-time PCR(RT-PCR)法检测脑组织JAK2、STAT3 mRNA及miR-370-3p的表达;Pearson相关性分析脑组织miR-370-3p与JAK2/STAT3通路的相关性;培养大鼠脑血管平滑肌细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA-H19和miR-370-3p表达;荧光素酶报告实验检测LncRNA-H19和miR-370-3p的靶向关系。结果活血荣络方能增加缺血区微血管密度及VEGF平均荧光强度,上调JAK2、STAT3 mRNA,下调miR-370-3p表达,促进JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达,且miR-370-3p分别与JAK2、STAT3 mRNA呈高度负相关,此过程能被STAT3 SH2结构域抑制剂Stattic逆转。结论活血荣络方可能通过下调miR-370-3p的表达、激活JAK2/STAT3通路、促进下游VEGF的表达而刺激缺血性脑卒中后血管新生,从而改善神经功能缺损症状。 展开更多
关键词 活血荣络方 丁苯酞 JAK2/STAT3通路 miR-370-3p 性脑卒中 管新生 Stattic
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昼夜环境紊乱对缺血性中风后血管新生的影响及活血荣络方的干预作用
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作者 曾富康 张宇星 +3 位作者 周德生 陈瑶 李中 刘利娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2177-2185,共9页
目的观察昼夜环境紊乱对缺血性中风后血管新生的影响及活血荣络方的干预作用。方法SD大鼠随机分假手术组、模型组(MCAO)、活血荣络方组(MCAO+HXRLF)、模型+生物节律紊乱组(MCAO-ECD)及模型+生物节律紊乱+活血荣络方组(MCAO-ECD+HXRLF),... 目的观察昼夜环境紊乱对缺血性中风后血管新生的影响及活血荣络方的干预作用。方法SD大鼠随机分假手术组、模型组(MCAO)、活血荣络方组(MCAO+HXRLF)、模型+生物节律紊乱组(MCAO-ECD)及模型+生物节律紊乱+活血荣络方组(MCAO-ECD+HXRLF),建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,给药10 d。采用神经功能缺损评分评价神经功能缺损;HE染色观察病理变化;免疫荧光观察海马及皮质CD34数;Western blot法检测血管新生及生物节律关键蛋白;ELISA法检测血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、褪黑素(melatonine,MT)及炎症因子。结果昼夜环境紊乱加重梗死后神经缺损(P<0.01),减少皮质及海马CD34阳性细胞数(P<0.05),降低脑内血管新生蛋白(P<0.05)及血清中VEGF(P<0.01)、MT(P<0.05)水平,升高血清IL-1β(P<0.01)与TNF-α(P<0.05)水平,活血荣络方改善昼夜环境紊乱加重的神经功能缺损(P<0.01),增加皮质及海马区CD34阳性细胞数表达(P<0.05),增加脑组织血管新生蛋白表达(P<0.05),升高血清中VEGF(P<0.01)、MT(P<0.05)水平,降低炎症因子水平(P<0.05)。结论昼夜环境紊乱加重脑梗死后神经功能损伤,抑制血管新生,活血荣络方可逆转该进程,促进血管新生,减轻炎症反应,改善神经功能缺损。 展开更多
关键词 性中风 昼夜环境紊乱 生物节律 活血荣络方 管新生 炎症反应
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