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UQCRC1的高甲基化参与发育期小鼠七氟烷暴露所致的认知功能障碍
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作者 刘燕 陈彦娟 +5 位作者 张敏 龙宗泓 李钰 裴洁 王秋月 李洪 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第8期775-783,共9页
目的 探究泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)的甲基化异常是否与发育期小鼠七氟烷暴露所致的认知功能障碍相关。方法 SPF级健康C57小鼠94只,雌雄不限,6日龄,体质量4~6 g。采用随... 目的 探究泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)的甲基化异常是否与发育期小鼠七氟烷暴露所致的认知功能障碍相关。方法 SPF级健康C57小鼠94只,雌雄不限,6日龄,体质量4~6 g。采用随机数字表法分为7组:对照组(Con组,n=6),七氟烷-6 h组(Sev-6 h组,n=6),七氟烷-24 h组(Sev-24 h组,n=6),对照+DMSO组(Con+DMSO组,n=19),对照+甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-AZA)组(Con+5-AZA组,n=19),七氟烷+DMSO组(Sev+DMSO组,n=19),七氟烷+5-AZA组(Sev+5-AZA组,n=19)。出生后第6~8天Sev-6 h组和Sev-24 h组每天进行3%七氟烷暴露(吸入氧浓度100%,流量2 L/min,2 h/d);Con组进行100%的氧气暴露(流量2 L/min,2 h/d)。Con+5-AZA、Con+DMSO组每天行100%氧气暴露前30 min腹腔分别注射1 mg/kg5-AZA或等体积DMSO;Sev+5-AZA、Sev+DMSO组每天行3%七氟烷暴露前30 min腹腔分别注射1 mg/kg5-AZA或等体积DMSO。在最后1次七氟烷暴露后6 h和24 h时,Con、Sev-6 h、Sev-24 h组处死6只小鼠进行生化分析;在最后一次七氟烷暴露后24 h时,Con+DMSO、Con+5-AZA、Sev+DMSO、Sev+5-AZA组采用随机数字表法抽取6只小鼠处死进行生化分析,抽取3只小鼠处死进行形态学分析,于小鼠出生后第30~33天对每组剩余的10只小鼠进行行为学检测,在最后一次行为学测试后24 h处死小鼠。采用RTqPCR、Western blot检测小鼠海马组织UQCRC1、DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,Dnmts)和甲基CpG结合蛋白2(methyl CpG binding protein 2,Mecp2)表达水平,采用免疫荧光染色观察UQCRC1在小鼠海马的分布及表达,采用亚硫酸氢盐转化后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测UQCRC1启动子区甲基化水平,采用旷场、新物体和Y迷宫实验于小鼠出生后第30~33天评估小鼠认知功能。结果 与Con组相比,Sev-6 h组和Sev-24 h组UQCRC1 mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P<0.05),Dnmts mRNA表达显著上调(P<0.05);且Sev-24 h组UQCRC1启动子区甲基化水平显著增加(P<0.05)。与Sev+DMSO组相比,Sev+5-AZA组UQCRC1 mRNA和蛋白表达水平显著回升(P<0.05),小鼠的认知功能障碍明显好转(P<0.05)。结论 增加UQCRC1启动子区的甲基化水平而下调UQCRC1 mRNA和蛋白的表达,可能是新生小鼠发育期反复暴露于七氟烷后引起小鼠认知功能障碍的重要机制之一。 展开更多
关键词 DNA甲基化 七氟烷 泛醇-细胞色素c还原酶核心蛋白1 认知功能 发育期
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基于单细胞和转录物组测序筛选结直肠癌双硫死亡相关诊疗靶标
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作者 杨洋 马意轩 +5 位作者 樊欣悦 赵文雪 祁一鸣 高宁 赵菊梅 杜娟 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第10期1529-1540,共12页
双硫死亡状态与肿瘤患者炎症反应、免疫抑制和药物敏感性相关。然而,其在结直肠癌诊疗中的价值尚不清楚。基于此,研究使用单细胞测序数据和细胞特异性标记基因分析双硫死亡与不同结直肠癌细胞类型的相关性,发现结直肠癌高双硫死亡区域... 双硫死亡状态与肿瘤患者炎症反应、免疫抑制和药物敏感性相关。然而,其在结直肠癌诊疗中的价值尚不清楚。基于此,研究使用单细胞测序数据和细胞特异性标记基因分析双硫死亡与不同结直肠癌细胞类型的相关性,发现结直肠癌高双硫死亡区域集中于上皮类细胞中。结合程序性细胞死亡蛋白1抑制剂治疗结直肠癌患者的肿瘤组织差异基因表达数据,建立双硫死亡相关预后模型分析发现,高双硫死亡水平结直肠癌患者风险较低,免疫治疗敏感性高。结合空间转录物组学分析发现,双硫死亡相关基因泛醇细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ(ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1,UQCRC1)是潜在的结直肠癌诊疗靶点,其表达在上皮类结直肠癌细胞中较高,与结直肠癌免疫浸润区域存在共定位。进一步的生信分析和实验检测显示,UQCRC1在结直肠癌组织中低表达,过表达UQCRC1可抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移,是潜在的结直肠癌诊疗靶点。 展开更多
关键词 细胞色素c还原酶核心蛋白 双硫死亡 结直肠癌
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