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早期糖尿病肾病泛素-核糖体融合蛋白52和尿微量清蛋白关系研究 被引量:6
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作者 张艳 任荣 +1 位作者 梁新华 张蕾 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第26期3128-3130,共3页
目的探讨泛素-核糖体融合蛋白52(UBA52)在早期糖尿病肾病(DN)患者中的表达及其与尿微量清蛋白(MAU)的关系。方法选取2012年2月—2013年3月新疆医科大学第五附属医院收治的糖尿病患者20例(糖尿病组),DN患者59例(DN组)。另选取同期在本院... 目的探讨泛素-核糖体融合蛋白52(UBA52)在早期糖尿病肾病(DN)患者中的表达及其与尿微量清蛋白(MAU)的关系。方法选取2012年2月—2013年3月新疆医科大学第五附属医院收治的糖尿病患者20例(糖尿病组),DN患者59例(DN组)。另选取同期在本院体检健康者22例作为对照组。采用免疫透射比浊法检测3组受试者MAU,采用ELISA法检测血UBA52、尿UBA52。结果 3组性别、年龄、BMI比较,差异均无统计学意义(P>0.05);3组血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中DN组血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU均高于对照组和糖尿病组,糖尿病组尿蛋白定量、MAU均高于对照组(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示,MAU和糖化血红蛋白影响DN患者尿UBA52水平(P<0.05)。结论 DN患者血UBA52、尿UBA52水平升高,MAU是尿UBA52水平的影响因素。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 泛素-核糖体融合蛋白52 尿微量清蛋白
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酵母双杂交筛选与蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白--泛素-52氨基酸融合蛋白的鉴定 被引量:3
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作者 陈碧 骆艳婷 +1 位作者 刘新光 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期826-832,共7页
蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α... 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白的阳性候选克隆,筛选获得8个阳性克隆,其中1个与人泛素-52氨基酸融合蛋白基因(UBA52)的cDNA序列有高度同源性(100%).GST pull-down实验在细胞外进一步证实了CK2α′与UBA52之间存在相互作用.本实验证明,人泛素-52氨基酸(UBA52)融合蛋白是人CK2α′亚基的相互作用蛋白,它们之间的相互作用对精子发生机制的影响尚不清楚,进一步分子机制研究正在进行中. 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2α′ 酵母双杂交系统 睾丸 泛素-52氨基酸融合蛋白(UBA52) GST pull-down
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栗疫病菌泛素核糖体L40融合蛋白基因的克隆与分析 被引量:2
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作者 乔广行 李涛 王克荣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期758-762,共5页
用酿酒酵母(Saccharyomyces cerevisae)泛素融合蛋白基因从COGEME(Consortium for the functional ge-nomics of microbial eukaryotes)植物病原菌EST(Expressed sequence tag)库中BLAST(Basic local alignment searchtool)得到栗疫病... 用酿酒酵母(Saccharyomyces cerevisae)泛素融合蛋白基因从COGEME(Consortium for the functional ge-nomics of microbial eukaryotes)植物病原菌EST(Expressed sequence tag)库中BLAST(Basic local alignment searchtool)得到栗疫病菌的泛素融合蛋白EST,设计引物从栗疫病菌cDNA中克隆到该基因并测序,得到在进化上高度保守的基因,该基因开放阅读框为387 bp,编码128个氨基酸残基组成的泛素融合蛋白前体;由cDNA序列推定的氨基酸序列分析结果表明,泛素融合蛋白前体包括氮末端的泛素结构域(76个氨基酸残基)和碳末端的核糖体蛋白L40结构域(52个氨基酸残基)。该蛋白为高碱性蛋白,碳末端含有一个"锌指"模式结构。与19个物种比较的结果表明,栗疫病菌与真菌泛素融合蛋白氨基酸序列相似度较高,具有高度的保守性。 展开更多
关键词 栗疫病菌 泛素融合蛋白 碳端扩展区 核糖体蛋白
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重组融合蛋白大肠杆菌不对称合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸 被引量:3
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作者 朱益波 蒋卓越 +5 位作者 郭倩 郑青云 林容天 钱志浩 齐斌 王立梅 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期49-54,共6页
将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮... 将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。 展开更多
关键词 D-LDHY52V 甲酸脱氢酶 融合蛋白 D-3-苯基乳酸 辅酶再生
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核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响 被引量:2
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作者 宋鹍鹏 舒鹏 +2 位作者 马炬雷 王兵 陈博 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期175-182,共8页
目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在... 目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Westernblot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Westernblot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白V别藻青蛋白/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Westernblot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Westernblot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Westernblot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Westernblot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226CON与RPS9-shRNA感染病毒48h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白V阳性细胞比例分别为3.47±0.37和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.0008)。在增殖中,CON组与RPS9-shRNA组在72h时增殖指数差异有统计学意义(t=6.846,P=0.0024)。而在细胞周期中,CON与RPS9-shRNA组在感染病毒48h时,G2期细胞比例分别为(29.28±3.42)%和(10.43±1.43)%,CON组显著高于RPS9-shRNA组,差异有统计学意义(t=9.329,P=0.0007)。RPS9的表达在GSE19784数据集中与SENP1正相关,并与IκBα编码基因NFKBIA呈负相关,Westernblot进一步证实RPS9的敲低能够抑制SENP1的表达,并抑制NF-κB亚基P65、抑制因子IKBα的磷酸化,促进IKBα的表达,而SENP1的过表达不仅能够阻碍这一效应,也能够使RPS9诱导的凋亡减少。结论 RPS9在多发性骨髓瘤CD138+细胞中高表达,且与患者总体生存率、髓外浸润相关。RPS9的抑制能够促进骨髓瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。RPS9能够通过SENP1影响NF-κB通路的活化,并影响细胞的凋亡,提示SENP1可能为RPS9生物学效应的关键因素。 展开更多
关键词 核糖体蛋白S9 多发性骨髓瘤 核因子-ΚB信号通路 泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1
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淋巴因子和干扰素
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第1期85-85,共1页
910214 人干扰素基因在葡萄球菌激酶信号控制下在大肠杆菌和枯草杆菌的孢内表达和分泌表达[英]/Breitling,R.…//FoliaMicrobiol.-1989,34(5).-383~384[译自DBA,1990,9(12),90-06849] 金黄色葡萄球菌噬菌体42D的葡萄球菌激酶基因的表... 910214 人干扰素基因在葡萄球菌激酶信号控制下在大肠杆菌和枯草杆菌的孢内表达和分泌表达[英]/Breitling,R.…//FoliaMicrobiol.-1989,34(5).-383~384[译自DBA,1990,9(12),90-06849] 金黄色葡萄球菌噬菌体42D的葡萄球菌激酶基因的表达和分泌信号与人成熟干扰素-α-1基因融合,用融合蛋白的基因转化大肠杆菌产生的转化子能分泌100000000U/l生物活性干扰素α-1.有部分干扰素α-1分泌到周质内. 展开更多
关键词 干扰素-Α 转化子 基因融合 分泌表达 融合蛋白 干扰素Α 周质 核糖体结合位点 基因转化 顺反子
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