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血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建
1
作者
赵海静
刘琪
+3 位作者
金蕊
程龙
刘昱圻
陈韵岱
《中华老年多器官疾病杂志》
2022年第5期361-365,共5页
目的构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段...
目的构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用。结果成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。
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关键词
泛素蛋白连接酶e3组分n-识别蛋白5
重组质粒
分子克隆
先天性角化不良1
蛋白
血管生成
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职称材料
题名
血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建
1
作者
赵海静
刘琪
金蕊
程龙
刘昱圻
陈韵岱
机构
解放军医学院
中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生物工程研究所
中国人民解放军总医院第六医学中心心血管病医学部
出处
《中华老年多器官疾病杂志》
2022年第5期361-365,共5页
基金
国家自然科学基金(82070434)
北京市科技新星计划(Z191100001119020)。
文摘
目的构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用。结果成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。
关键词
泛素蛋白连接酶e3组分n-识别蛋白5
重组质粒
分子克隆
先天性角化不良1
蛋白
血管生成
Keywords
UBR
5
prot
e
in
r
e
combinant plasmid
mol
e
cular cloning
dysk
e
ratosis cong
e
nita 1
angiog
e
n
e
sis
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建
赵海静
刘琪
金蕊
程龙
刘昱圻
陈韵岱
《中华老年多器官疾病杂志》
2022
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