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法国梧桐花粉的部分纯化及其主要变应原免疫活性分析 被引量:1
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作者 李雅莉 孙秀珍 +2 位作者 李东繁 刘昀 冯向莉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期481-483,共3页
目的 对法国梧桐花粉变应原进行部分纯化并对其主要变应原免疫活性进行分析。方法 采用凝胶层析法分离纯化法国梧桐花粉变应原 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测收集到的主要峰段的蛋白质分子质量 ,并对 7例法国梧桐花粉过敏支气管哮喘... 目的 对法国梧桐花粉变应原进行部分纯化并对其主要变应原免疫活性进行分析。方法 采用凝胶层析法分离纯化法国梧桐花粉变应原 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测收集到的主要峰段的蛋白质分子质量 ,并对 7例法国梧桐花粉过敏支气管哮喘患者血清进行免疫印迹分析。结果 法国梧桐花粉变应原粗制液经SephadexG 10 0层析柱洗脱得两个洗脱峰 ,第一峰及第二峰升段富含蛋白 ;收集各段进行SDS PAGE电泳 ,第一峰升段、峰段、降段电泳图相似 ,主要含分子质量为 2 2~ 71ku之蛋白质 ,第二峰升段以分子质量为 14~ 16ku之蛋白质为主。电泳结果清晰显示 6条蛋白区带 ,分子质量分别为 71、5 0、35、39、2 2、16ku。免疫印迹分析可见 4条sIgG反应带 ,分子质量为 5 0、39、2 2、16ku。结论 法国梧桐花粉变应原含 6种主要蛋白成分 ,第一峰蛋白质含量高 ,为主要致敏组分 ;第二峰蛋白质含量少 ,为次要致敏组分。 展开更多
关键词 哮喘 法国梧桐花粉变应原 纯化 聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹分析
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重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响 被引量:1
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作者 乔笑芹 王进雅 +2 位作者 路康 曹倩 周国平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1143-1147,共5页
目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、... 目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。 展开更多
关键词 诱导型一氧化氮合酶(NOS2) 重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2) 启动子 哮喘
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重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)通过GATA3上调NIH3T3细胞ORMDL3表达 被引量:1
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作者 张慧文 庄丽丽 +2 位作者 金蕊 李楠楠 周国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期27-32,38,共7页
目的探索重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对小鼠NIH3T3细胞血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)表达的影响及相关调控机制。方法实时定量PCR和Western blot法分别检测rPla a2对NIH3T3细胞ORMDL3和GATA3 mRNA和蛋白水平的影响;通过干扰和过... 目的探索重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对小鼠NIH3T3细胞血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)表达的影响及相关调控机制。方法实时定量PCR和Western blot法分别检测rPla a2对NIH3T3细胞ORMDL3和GATA3 mRNA和蛋白水平的影响;通过干扰和过表达观察GATA结合蛋白3(GATA3)在rPla a2调节ORMDL3表达中的作用;通过双荧光素酶活性分析检测rPla a2和GATA3对ORMDL3基因启动子活性的影响。结果 rPla a2增强NIH3T3细胞ORMDL3基因启动子活性,并增加其mRNA水平和蛋白表达;同时增加GATA3 mRNA和蛋白表达。敲低GATA3抑制rPla a2对ORMDL3基因的诱导作用,过表达GATA3则可增强该诱导作用。结论 GATA3可介导rPla a2对NIH3T3细胞ORMDL3基因的转录调控。 展开更多
关键词 气传过敏原 法国梧桐花粉重组过敏原2(r PLA a2) 小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3) GATA结合蛋白3(GATA3) 转录调控
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法桐花粉主要过敏原基因Pla a1重组表达及鉴定 被引量:2
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作者 王贵佐 陶爱林 +4 位作者 孙秀珍 李满祥 刘昀 邹泽红 吴媛媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期535-539,共5页
目的:表达、纯化和鉴定法国梧桐花粉主要变应原基因Platanus acerifolia pollen allergen1(Pla a1)。方法:首先根据文献查找并在GenBank获取法国梧桐花粉主要变应原基因序列Pla a1,利用DNAStar软件进行密码子优化;合成全基因;将Pla a1... 目的:表达、纯化和鉴定法国梧桐花粉主要变应原基因Platanus acerifolia pollen allergen1(Pla a1)。方法:首先根据文献查找并在GenBank获取法国梧桐花粉主要变应原基因序列Pla a1,利用DNAStar软件进行密码子优化;合成全基因;将Pla a1与载体pET-44a连接后转入大肠杆菌Rosetta中进行诱导并优化目的蛋白表达;利用亲和层析法纯化该外源表达蛋白;应用Western blot,利用法桐花粉过敏患者血清鉴定纯化后的目的蛋白的抗原性。结果:成功构建了pET44a-Pla a1阳性质粒;获得了法桐花粉主要变应原重组蛋白Pla a1;对该重组蛋白进行了亲和层析纯化;免疫印记法表明重组蛋白具有一定的抗原性。结论:首次利用密码子优化的方法获得融合Strep TagⅡ的法桐花粉过敏原重组蛋白Pla a1,为制备高纯度变应原、重组低致敏过敏原及变应原核酸疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 法国梧桐花粉 主要过敏原 密码子优化 表达 纯化 鉴定
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Pla a 1的抗原表位分析
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作者 李冰峰 李鑫 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3435-3436,3738,共3页
[目的]预测Pla a 1抗原的免疫原性及B细胞表位。[方法]联合运用多种方法预测Pla a 1的二级结构并预测其表面特性,如亲水性、可塑性及抗原表位。[结果]该蛋白是一个分子量约19 kDa,pI值约8.7,主要为α-螺旋的结构紧凑的球形蛋白。预测其... [目的]预测Pla a 1抗原的免疫原性及B细胞表位。[方法]联合运用多种方法预测Pla a 1的二级结构并预测其表面特性,如亲水性、可塑性及抗原表位。[结果]该蛋白是一个分子量约19 kDa,pI值约8.7,主要为α-螺旋的结构紧凑的球形蛋白。预测其亲水性区域:32-42,55-59,76-78,88-89,92-98,110-112,118-127,140-151,157-163;预测其可塑性区域:28-40,49-57,76-80,87-98,109-114,121-125,137-139,144-151,154-162;预测其蛋白质抗原表位区域:29-42,49-60,75-78,86-100,107-114,116-130,134-152,156-164;预测其转角结构区域:39-42,51,55,88-89。[结论]Pla a 1抗原蛋白具有较强的免疫原性;其主要的抗原表位集中于29-42,49-60,86-100,而这些预测结果为进一步寻求梧桐花粉变态反应的防治方法提供了依据。 展开更多
关键词 B细胞表位 PLA a 1抗原 法国梧桐花粉 二级结构 表面特性
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