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基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
1
作者
范修齐
王志豪
+4 位作者
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期104-110,共7页
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,...
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测。因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用。结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
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关键词
衣康酸
沙门菌ripr
荧光报告基因
检测方法
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职称材料
题名
基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
1
作者
范修齐
王志豪
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
安徽农业大学
塔里木大学
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期104-110,共7页
基金
政府间国际科技创新合作重点项目(2018YFE0102200)
国家自然科学基金(32072829)。
文摘
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测。因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用。结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
关键词
衣康酸
沙门菌ripr
荧光报告基因
检测方法
Keywords
Itaconate
Salmonella
ripr
fluorescent reporter gene
detection
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
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1
基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
范修齐
王志豪
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
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