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沙地葡萄茎痘相关病毒RT-PCR检测 被引量:7
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作者 董雅凤 张尊平 +2 位作者 刘凤之 王宝亮 张少瑜 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期705-708,共4页
为建立快速、灵敏、可靠的沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)检测方法,以总RNA为模板,采用2组GRSPaV特异性引物对29个品种52株葡萄样品进行RT-PCR检测,并对扩增产物进行了测序和分析。结果表明,从20个品种25株葡萄样品中检测到GRSPaV,平均... 为建立快速、灵敏、可靠的沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)检测方法,以总RNA为模板,采用2组GRSPaV特异性引物对29个品种52株葡萄样品进行RT-PCR检测,并对扩增产物进行了测序和分析。结果表明,从20个品种25株葡萄样品中检测到GRSPaV,平均带毒株率为48.1%。外壳蛋白基因片段引物F1/R1从25个样品中扩增到905bp的特异片段,复制酶基因片段引物F2/R2从20个样品中扩增到498bp的特异片段,表明GRSPaV外壳蛋白基因比复制酶基因更加保守,RT-PCR检测时采用F1/R1则更为适宜。PCR产物测序结果与GenBank中登录的GRSPaV序列比较,同源性为97.90%~98.11%。 展开更多
关键词 沙地葡萄茎痘相关病毒 RT-PCR 检测
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山东省沙地葡萄茎痘相关病毒的检测 被引量:2
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作者 尚佑芬 王升吉 +5 位作者 赵玖华 张家魁 吕志华 路兴波 孙红炜 杨崇良 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期158-162,共5页
为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免... 为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测,在2a采集的298个样品中,125个样品为阳性反应,阳性率41.95%。125个阳性样品涉及43个品种,品种被侵染率74.14%。研究对检测的样品用RT-PCR法验证,有3对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340bp片段、外壳蛋白(CP)基因842bp片段和RNA聚合酶(RdRp)基因499bp片段。 展开更多
关键词 葡萄相关病毒 病原检测 ELISA RT-PCR
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沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 胡国君 张尊平 +4 位作者 范旭东 任芳 翟秀丽 时晓燕 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2022年第8期39-43,共5页
根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮... 根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。 展开更多
关键词 葡萄 沙地葡萄伴随病毒 巢式RT-PCR 双重巢式RT-PCR
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GPGV与GRSPaV病毒对“阳光玫瑰”葡萄植株生长及叶片营养元素含量的影响 被引量:1
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作者 黄宇 张向昆 +5 位作者 乔月莲 安德志 梁晨 王莉 师校欣 杜国强 《中国南方果树》 北大核心 2025年第1期150-154,共5页
本研究以经热处理结合茎尖培养获得的仅携带灰比诺葡萄病毒(grapevine pinot gris virus,GPGV)、仅携带沙地葡萄茎痘病毒(grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、携带GPGV+GRSPaV和不带病毒的“阳光玫瑰”葡萄苗... 本研究以经热处理结合茎尖培养获得的仅携带灰比诺葡萄病毒(grapevine pinot gris virus,GPGV)、仅携带沙地葡萄茎痘病毒(grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、携带GPGV+GRSPaV和不带病毒的“阳光玫瑰”葡萄苗为试材,探讨不同病毒对“阳光玫瑰”葡萄植株生长和叶片营养元素含量的影响。结果表明,除新梢节数外,带病毒试材的其他生长指标均显著低于脱毒苗。仅携带GRSPaV与仅携带GPGV植株的株高、节间长度无显著差异,但GRSPaV+GPGV复合感染后其株高与节间长度显著降低。仅携带GRSPaV的茎粗显著小于仅携带GPGV的植株,GRSPaV和GPGV复合感染后茎粗更小。仅携带GPGV、仅携带GRSPaV和携带GRSPaV+GPGV植株的总根长、根平均直径、根体积、根鲜质量和根干质量均显著低于脱毒苗,3种带病毒植株间无显著差异。3种带病毒植株叶片的Ca、Mn含量均较无病毒植株显著降低,且仅携带GPGV植株不显症叶片的Ca、Mn含量显著高于仅携带GRSPaV不显症叶片。3种带病毒植株叶片K、Zn、B的含量均显著高于脱毒苗;仅携带GPGV植株不显症叶片K含量显著高于仅携带GRSPaV植株不显症叶片,两者的Zn和B含量无显著差异。带病毒植株显症叶片的Mg、Fe、Cu含量均显著高于脱毒苗,而不显症叶片显著低于脱毒苗;仅携带GPGV植株不显症叶片的Mg、Fe含量显著低于仅携带GRSPaV植株不显症叶片,两者B含量无显著差异。GPGV或GRSPaV通过影响营养元素含量抑制植株枝条和根系生长,且这两种病毒复合感染加剧影响作用。 展开更多
关键词 “阳光玫瑰”葡萄 灰比诺葡萄病毒 沙地葡萄病毒 生长 营养元素
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葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究 被引量:5
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作者 牛建新 李西平 +2 位作者 张强 赵英 马兵钢 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期239-243,共5页
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与... 选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%。利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4 h,可获得较高灵敏度。 展开更多
关键词 葡萄伴随病毒 CDNA探针 检测
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世界主要葡萄病毒病研究现状 被引量:2
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作者 王艳红 韦石泉 李大伟 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第3期253-256,共4页
世界主要葡萄病毒病研究现状王艳红,韦石泉,李大伟(沈阳市科技情报研究所,沈阳110031)(沈阳农业大学植保系,沈阳110161)葡萄病毒病是危害葡萄生产发展的重要病害。随着植物病毒研究技术不断进步,世界各国对葡萄病... 世界主要葡萄病毒病研究现状王艳红,韦石泉,李大伟(沈阳市科技情报研究所,沈阳110031)(沈阳农业大学植保系,沈阳110161)葡萄病毒病是危害葡萄生产发展的重要病害。随着植物病毒研究技术不断进步,世界各国对葡萄病毒病的研究日渐深人。美国早在扣年代... 展开更多
关键词 葡萄 病毒 扇叶病 卷叶病 栓皮病
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葡萄GLRaV-3和GRSPaV病毒双重PCR方法建立及初步应用
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作者 李升 李玲玉 +2 位作者 乔光 龙天文 王嘉福 《中国南方果树》 北大核心 2019年第1期72-77,共6页
针对我国西南地区葡萄园中卷叶相关病毒3(grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)和茎痘相关病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)发生普遍的情况,在单一PCR检测的基础上,分别从引物浓度和退火温... 针对我国西南地区葡萄园中卷叶相关病毒3(grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)和茎痘相关病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)发生普遍的情况,在单一PCR检测的基础上,分别从引物浓度和退火温度对双重PCR体系进行优化,建立了同时检测GLRaV-3和GRSPaV的双重PCR技术。建立的双重PCR反应体系最适退火温度为56.1℃,20μL PCR反应体系中10μmol/L浓度的混合引物最适用量为0.1μL;该方法能够检测出GLRaV-3和GRSPaV的cDNA最低浓度分别为0.99pg/μL和99.43ng/μL,且特异性良好。应用该双重PCR方法检测了来自贵州凯里和遵义地区"南玉""温克""摩尔多瓦"葡萄品种疑似病株样品,GLRaV-3检出率为100%,部分样品检出GRSPaV。通过核苷酸序列克隆测序和对比发现,贵州检测出的GLRaV-3与美国分离株(AJ748523)相似度最高,为99.82%;贵州检测出的GRSPaV与巴西分离株(KT008370)相似度最高,为99.08%。 展开更多
关键词 葡萄卷叶相关病毒3 葡萄相关病毒 多重PCR
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葡萄病毒病的发生与防治 被引量:1
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作者 张卫峰 李涛 杜峰 《农村科技》 2009年第4期35-35,共1页
葡萄病毒病主要的有4种,即葡萄扇叶病、葡萄卷叶病、葡萄栓皮病、葡萄茎痘病。我区葡萄病毒病以扇叶病和卷叶病为主,发生重的也有扇叶病和卷叶病回合发生。葡萄扇叶病毒病严重发生时可减产20%-80%,甚至导致植株死亡。葡萄卷叶病毒... 葡萄病毒病主要的有4种,即葡萄扇叶病、葡萄卷叶病、葡萄栓皮病、葡萄茎痘病。我区葡萄病毒病以扇叶病和卷叶病为主,发生重的也有扇叶病和卷叶病回合发生。葡萄扇叶病毒病严重发生时可减产20%-80%,甚至导致植株死亡。葡萄卷叶病毒病一般减产20%左右,含糖度降低20%或更多。 展开更多
关键词 葡萄卷叶病 病毒 发生与防治 扇叶病 栓皮病 葡萄 减产
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