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一种新型耐盐碱基因Dhodh的筛选与功能初步鉴定
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作者 刘青朋 徐蓓蓓 +7 位作者 张宇可 朱曲辞 王永杰 韩露 曹宁 付若晗 徐海军 王艳红 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第2期82-89,共8页
借助基因文库与功能互补相结合的方法,应用Escherichia coli KNabc无法在含0.2 mol·L^(-1)的Na+环境下生存的特性,使用p UC18作为建库载体,成功从沉积物假海源杆菌(Pseudidiomarina sediminum)中筛选出提高缺陷菌株KNabc耐盐能力... 借助基因文库与功能互补相结合的方法,应用Escherichia coli KNabc无法在含0.2 mol·L^(-1)的Na+环境下生存的特性,使用p UC18作为建库载体,成功从沉积物假海源杆菌(Pseudidiomarina sediminum)中筛选出提高缺陷菌株KNabc耐盐能力的基因,生物信息学分析结果显示该基因编码二氢乳清酸脱氢酶(Dihydroorotate dehydrogenase,DHODH),将其命名为PsDhodh。使用pET28a质粒与Ps-Dhodh构建表达载体,并化转至E.coli BL21菌株,Western blot检测蛋白表达,结果表明PSDHODH蛋白分子量为34.03 kDa,酶联免疫(ELISA)法测定过表达菌株中酶活可达到325 IU·L^(-1),与对照组相比,具有差异显著性。研究的Ps-Dhodh是一种新型盐碱耐受基因,属于DHODH蛋白家族新成员,这一发现丰富了耐盐碱基因库,为构建耐盐菌株及其在工农业中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 沉积物假海源杆菌 Dhodh 大肠杆菌 酶联免疫
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