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一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选
1
作者
李青岭
冯涛
+1 位作者
郭进军
黄爱龙
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第4期125-129,共5页
目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标...
目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标记汉坦病毒易感细胞Vero E6和非允许细胞CHO的细胞膜蛋白。将在BL21裂解上清中有表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81-140)纯化后与含有生物素标记的Vero E6细胞膜裂解液进行孵育,同时以非允许细胞CHO和无关蛋白GST-TLM做为阴性对照,通过GST Pull-down分离与G2蛋白特异性结合的细胞膜蛋白。结果:一个约30kD的Vero E6细胞膜蛋白与G2N81～140片段之间存在着特异性的相互作用。结论:该30kD蛋白可能是汉坦病毒细胞膜候选受体或受体辅助分子之一,是病毒入侵细胞的一个相关分子。
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关键词
汉坦病毒受体
包膜糖蛋白G2
GST
Pull-down生物素膜标记
在线阅读
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职称材料
体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用
被引量：
1
2
作者
郭进军
李青岭
+2 位作者
周倩云
曾爱忠
黄爱龙
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第5期136-139,共4页
根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G...
根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GSTPull-down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。
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关键词
汉坦病毒受体
包膜糖蛋白G2
Β3整合素
GST
Pull—down
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职称材料
题名
一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选
1
作者
李青岭
冯涛
郭进军
黄爱龙
机构
重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第4期125-129,共5页
基金
国家自然科学基金项目“汉坦病毒胞膜糖蛋白受体或受体辅助分子的分离鉴定研究”资助(30400377)
文摘
目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标记汉坦病毒易感细胞Vero E6和非允许细胞CHO的细胞膜蛋白。将在BL21裂解上清中有表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81-140)纯化后与含有生物素标记的Vero E6细胞膜裂解液进行孵育,同时以非允许细胞CHO和无关蛋白GST-TLM做为阴性对照,通过GST Pull-down分离与G2蛋白特异性结合的细胞膜蛋白。结果:一个约30kD的Vero E6细胞膜蛋白与G2N81～140片段之间存在着特异性的相互作用。结论:该30kD蛋白可能是汉坦病毒细胞膜候选受体或受体辅助分子之一,是病毒入侵细胞的一个相关分子。
关键词
汉坦病毒受体
包膜糖蛋白G2
GST
Pull-down生物素膜标记
Keywords
Hantavirus receptor Envelope G2 protein GST Pull-down Membrane biotin-labeling
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用
被引量：
1
2
作者
郭进军
李青岭
周倩云
曾爱忠
黄爱龙
机构
重庆医科大学附属第二医院消化内科
重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第5期136-139,共4页
基金
国家自然科学基金项目“汉坦病毒胞膜糖蛋白受体或受体辅助分子的分离鉴定研究”资助(30400377)
文摘
根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GSTPull-down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。
关键词
汉坦病毒受体
包膜糖蛋白G2
Β3整合素
GST
Pull—down
Keywords
Hantavims Envelope G2 protein β3 intergrin GST pull-down
分类号
Q939.4 [生物学—微生物学]
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选
李青岭
冯涛
郭进军
黄爱龙
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用
郭进军
李青岭
周倩云
曾爱忠
黄爱龙
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008
1
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职称材料
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