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红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型诱导猪肺泡巨噬细胞炎症的作用机制
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作者 韦兴克 徐一丹 +6 位作者 魏岩 潘诗琴 欧德渊 曾诚 彭羽 宋旭琴 杨剑 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期900-910,共11页
[目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的... [目的]阐明红车轴草异黄酮抗猪圆环病毒2型(PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)炎症的作用机制,为将红车轴草异黄酮开发成兽用抗炎药品提供理论依据。[方法]以PCV2感染诱导建立3D4/2细胞炎症模型,再以不同浓度(0.25、0.50和1.00 mg/mL)的红车轴草异黄酮溶液及地塞米松(DXMS)分别处理3D4/2细胞,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)等细胞炎症因子的分泌及其基因表达水平,同时采用Western blotting检测NF-κB信号通路和MAPK信号通路相关蛋白(p65、IκB-α和p38)的表达与磷酸化情况。[结果]经PCV2诱导后,3D4/2细胞的生长明显受到抑制,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的含量极显著升高(P<0.01,下同),对应的基因相对表达量也极显著升高;IκB-α蛋白降解水平、p38蛋白表达及p65蛋白的磷酸化与表达水平均极显著提升。以0.25、0.50和1.00 mg/mL红车轴草异黄酮处理PCV2诱导3D4/2细胞,其生长状况与空白对照组相比无明显差异,与PCV2诱导3D4/2细胞相比,促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其基因相对表达量呈明显下降趋势,而抗炎因子IL-10含量及其基因相对表达量呈明显上升趋势,且均呈剂量依赖性,以1.00 mg/mL红车轴草异黄酮的效果最佳;此外,不同浓度的红车轴草异黄酮均能极显著抑制p65蛋白磷酸化及IκB-α蛋白降解,同时极显著降低p65和p38蛋白的表达,且其变化趋势基本上呈剂量依赖性,即通过干扰NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活而发挥抗炎作用。[结论]红车轴草异黄酮对PCV2诱导3D4/2细胞具有抗炎作用,其作用机制是通过抑制炎症因子释放,促进抗炎细胞因子IL-10分泌,以及控制NF-κB信号通路和MAPK信号通路的激活来实现。 展开更多
关键词 红车轴草异黄酮 肺泡细胞(3D4/2) 圆环病毒2型(PCV2) 炎症因子 信号通路
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猪繁殖与呼吸综合征病毒促进猪链球菌2型感染猪肺泡巨噬细胞的初步研究 被引量:19
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作者 宋冬 全映颖 +5 位作者 高树基 申娅敏 高梦霞 王瑜欣 魏颖 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期385-391,共7页
为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-H... 为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-HA共感染组(PRRSV-HA组)、T1/5单独感染组(T1/5组)和PRRSV-T1/5共感染组(PRRSV-T1/5组),利用该模型通过黏附试验、侵入试验和细胞内存活试验检测PRRSV对HA和T1/5黏附、侵入iPAM细胞及对该细胞存活率的影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测各感染组iPAM模型细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平。黏附试验结果显示,HA感染2 h后,PRRSV-HA组细菌对细胞的黏附水平极显著高于HA组(P<0.01或P<0.001);T1/5感染6 h后,PRRSV-T1/5组细菌对细胞的黏附水平极显著高于T1/5组(P<0.001),表明PRRSV与HA或T1/5共感染可以促进HA和T1/5对iPAM模型细胞的黏附,且HA对iPAM细胞的黏附水平高于T1/5。侵入试验结果显示,感染4 h后,共感染组细菌侵入iPAM细胞中的数量比单独感染组极显著增多(P<0.01或P<0.001)。细胞内存活试验结果显示,感染2 h后,共感染组细菌的存活率比单独感染组极显著升高(P<0.001)。荧光定量PCR试验结果显示,感染4 h时,共感染组iPAM细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平极显著高于单独感染组(P<0.001)。本研究首次建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染i PAM的模型,基于该模型研究首次发现PRRSV感染不仅促进了不同毒力SS2对i PAM细胞的黏附、侵入及SS2在iPAM细胞内的存活,还可以协同SS2显著提高该细胞中细胞因子的转录水平。本研究为进一步探究PRRSV和SS混合感染的机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 繁殖与呼吸综合征病毒 链球菌 永生化猪肺泡巨噬细胞 共感染
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桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用 被引量:1
3
作者 韩辰淼 王靖萱 +2 位作者 杨海峰 陈晓兰 卜仕金 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3643-3651,共9页
[目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞... [目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。 展开更多
关键词 桑叶多糖 肺泡细胞 免疫调节 细胞因子
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基于CRISPR/Cas9技术的SIRT3基因敲除猪肺泡巨噬细胞系的构建与鉴定
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作者 王宝鑫 张文华 +4 位作者 董霞 郑好 张晶 陈洪波 周傲 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期991-1000,共10页
【目的】旨在构建稳定敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞系,分析SIRT3敲除对病毒诱导的炎症反应的调控作用,为探究SIRT3基因在宿主抗病毒感染中的作用奠定试验基础。【方法】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对猪SIRT3基因第2号外显子设... 【目的】旨在构建稳定敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞系,分析SIRT3敲除对病毒诱导的炎症反应的调控作用,为探究SIRT3基因在宿主抗病毒感染中的作用奠定试验基础。【方法】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对猪SIRT3基因第2号外显子设计sgRNA,连接pb-U6-puro-BFP质粒后转染3D4/21细胞,筛选单克隆细胞,结合Sanger测序、qPCR和Western blot技术对获得的单克隆细胞进行鉴定,进而获得SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21-SIRT3-KO),并以流感病毒A/WSN/33为研究对象,感染野生型和3D4/21-SIRT3-KO猪肺泡巨噬细胞,利用qPCR方法检测炎症相关因子IL-6、IL-8的表达水平,初步分析SIRT3基因在流感病毒感染诱导炎症反应的影响。【结果】Sanger测序结果显示,在挑选获得的敲除SIRT3基因的猪肺泡巨噬细胞克隆中,SIRT3基因第2号外显子位点产生了碱基缺失,并导致移码突变;同时,利用qPCR和Western blot检测猪肺泡巨噬细胞中SIRT3 mRNA和蛋白水平的表达,结果显示与野生型细胞相比,3D4/21-SIRT3-KO细胞中SIRT3 mRNA和SIRT3蛋白均不表达;流感病毒感染SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞时发现,敲除SIRT3能显著加剧流感病毒感染诱导的炎症反应。【结论】研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了SIRT3基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系,并初步分析了SIRT3在流感病毒感染中作用。 展开更多
关键词 肺泡细胞 SIRT3 CRISPR/Cas9 炎症反应 抗病育种 基因编辑
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PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ mRNA转录的影响 被引量:16
5
作者 李焕荣 杨汉春 +4 位作者 郭鑫 施开创 盖新娜 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期382-387,共6页
用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,IL-12p40 mRNA转... 用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,IL-12p40 mRNA转录从攻毒后3 d开始显著上调(P<0.05),7 d达高峰,14 d开始下降,但仍显著高于对照组(P<0.05),28 d和42 d低于对照组;IL-10 mRNA在3 d显著上调(P<0.05),14 d达到转录高峰(P<0.01),之后逐渐下降,42 d接近对照组水平;IFN-γmRNA转录水平尽管在3 d和28 d时出现2次转录低峰1、4 d和42 d时出现2次高峰,但只在3 d和7 d差异显著(P<0.05)。由此表明,PRRSV和PCV2共感染可导致PAM细胞因子IL-12p40和IL-10 mRNA的转录在感染早期被激活,而IFN-γ mRNA转录则呈较复杂的动态变化,提示PRRSV和PCV2共感染猪PAM的免疫应答、免疫调节和抗感染功能均受到不同程度的影响。 展开更多
关键词 繁殖与呼吸综合征病毒 圆环病毒2型 共感染 肺泡细胞 细胞因子
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PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响 被引量:12
6
作者 冯志新 姜平 +1 位作者 王先炜 李玉峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期950-955,共6页
制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和... 制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和PCV2滴度,INF-α、INF-γ、TNF-α、IL-8和IL-10的mRNA。结果为:①PRRSV能在PAM中增殖,有CPE;PCV2在PAM中感染率较低,无CPE。②PRRSV对PCV2增殖无明显影响。PCV2先于或同时与PRRSV感染对PRRSV的复制具有抑制作用,而PCV2后于PPRSV感染,可促进PRRSV增殖。③PCV2单独感染PAM后能促进INF-α、INF-γ、IL-8和IL-10的大量表达,对TNF-α的表达量影响不大。④PCV2与PRRSV混合感染,尤其是PCV2后于PRRSV感染后,TNF-α、IL-8和IL-10的表达量与单感染组相比明显增加,而INF-γ的表达量明显受到抑制。实验结果表明,PCV2感染时间对PRRSV的增殖影响不同,PRRSV感染后如果再感染PCV2,可以明显促进PRRSV病毒增殖;两种病毒共同刺激了TNF-α、IL-8和IL-10的大量表达,抑制了抗病毒因子INF-γ的表达,从而可能抑制体液免疫和细胞免疫,加重了病理学免疫应答。 展开更多
关键词 PRRSV PCV2 共感染 肺泡细胞 免疫学功能
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猪肺泡巨噬细胞的分离、纯化和冷冻保存研究 被引量:7
7
作者 孟春花 曹少先 +5 位作者 苏磊 贺强 王慧利 丰秀静 张庆晓 刘铁铮 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期198-201,共4页
通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬... 通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬细胞抗体MAC387免疫荧光检测表明,贴壁2h后更换培养液获得的PAM纯度最高(P<0.05);用70%RPMI-1640+20%新生牛血清+10%DMSO的体系冷冻保存细胞密度为1×107个/mL的PAM可获得高达98.09%的存活率,冻存前后PAM的墨汁吞噬率无显著差异(P>0.05)。 展开更多
关键词 肺泡细胞 纯化 冷冻保存
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脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响 被引量:11
8
作者 冯丽丽 张丽萍 +4 位作者 张改平 乔松林 田晓辉 万博 王秋霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期106-109,共4页
研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞,收集细胞,提取RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平;同时收集培养上清,... 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞,收集细胞,提取RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平;同时收集培养上清,用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明,脂多糖浓度(1-1000ng/mL)对IL-1β、TNF-α影响显著(P%0.05);刺激时间(1-24h)对IL-1β、TNF-α影响显著(P〈0.05),且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。 展开更多
关键词 脂多糖 肺泡细胞 细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-Α
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PCV2与PPV体外混合感染猪肺泡巨噬细胞对细胞因子的影响 被引量:10
9
作者 王永帅 唐波 +6 位作者 张雪花 华涛 常晨 刘国洋 侯继波 张道华 杨德吉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期772-778,共7页
通过PCV2与PPV混合感染猪肺泡巨噬细胞,探讨PCV2与PPV体外混合感染的致病机制。体外分离猪肺泡巨噬细胞(PAMs),分为PCV2、PPV、PCV2/PPV混合感染组和对照组,采用实时荧光定量PCR技术检测PAMs中PCV2与PPV病毒拷贝数及细胞因子IFN-γ、TNF... 通过PCV2与PPV混合感染猪肺泡巨噬细胞,探讨PCV2与PPV体外混合感染的致病机制。体外分离猪肺泡巨噬细胞(PAMs),分为PCV2、PPV、PCV2/PPV混合感染组和对照组,采用实时荧光定量PCR技术检测PAMs中PCV2与PPV病毒拷贝数及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-10的mRNA转录水平的变化。结果表明,PPV能在PAMs中增殖,而PCV2在肺泡巨噬细胞中增殖效率较低;PCV2能促进PPV增殖;PPV单独感染PAMs后能促进IFN-γ和TNF-α的表达;PCV2单独感染PAMs后能促进IFN-γ的表达,并在感染早期促进TNF-α的表达;PCV2与PPV混合感染后能显著抑制IFN-γ的表达,在感染早期对TNF-α的促进作用高于PCV2单独感染组,并能短暂的刺激IL-10的过量表达。说明PCV2与PPV混合感染存在协同致病作用,两种病毒共同刺激了TNF-α和IL-10的大量表达,抑制了IFN-γ的表达。 展开更多
关键词 圆环病毒2型 细小病毒 肺泡细胞 混合感染 细胞因子
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响 被引量:9
10
作者 磨美兰 杨汉春 +4 位作者 郭鑫 吕艳丽 周双海 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期568-573,共6页
采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM... 采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM的SLA-DR mRNA转录水平在3、7和14 d下调,低于对照组;感染后3 d,Ii链、SLA-DM和CD40的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);CD80和CD86mRNA转录水平也在感染后3 d明显下调(P<0.05)。用流式细胞术检测PAM表面的SLA-DR抗原的结果表明,在感染后3 d短暂上升,7 d之后一直低于对照组。由此说明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。 展开更多
关键词 繁殖与呼吸综合征病毒 肺泡细胞 抗原加工和递呈相关分子 共刺激分子 定量竞争PCR
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猪圆环病毒2型体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞的炎症相关细胞因子mRNA转录分析 被引量:5
11
作者 汪伟 王小敏 +2 位作者 何孔旺 温立斌 倪艳秀 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1225-1228,共4页
通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水... 通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水平的变化。结果显示PCV2对3D4/21细胞的IL-1β、IL-8转录主要起抑制作用,对IL-8转录起促进作用。推测其在体内的综合效应导致感染早期机体抗病毒能力降低,引起机体免疫抑制,影响机体特异性免疫应答的正常运转,为PCVD的发病创造了条件。 展开更多
关键词 圆环病毒2型 肺泡细胞 炎症相关细胞因子 荧光定量PCR
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猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化 被引量:4
12
作者 张亚群 韩俊源 +3 位作者 郭华 陈萌萌 段滇宁 张书霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期802-808,共7页
选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分为对照组和PCV2感染组(PCV2组)进行体外培养,分别在培养0、6、12、24和48... 选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分为对照组和PCV2感染组(PCV2组)进行体外培养,分别在培养0、6、12、24和48h收集AMs。间接免疫荧光法定位检测PCV2感染AMs情况;荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录量的变化。结果表明,TLR2mRNA的转录量在感染后6h迅速升高,12h后又迅速下降,但仍显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),到48h时恢复;TLR3mRNA的转录量,攻毒后6和12h显著高于对照组(P<0.05),24和48h时恢复到对照组水平;PCV2明显升高感染后12hAMs中TLR4mRNA的转录(P<0.05),而明显抑制感染后24和48h的转录(P<0.05);PCV2引起感染后6和12h的AMs中TLR7、TLR8和TLR9mRNA转录量显著升高(P<0.01或P<0.05),而到感染后24和48h又恢复到对照组水平。结果表明,PCV2可显著影响体外培养仔猪AMs TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9mRNA的转录。 展开更多
关键词 圆环病毒2型 荧光定量PCR 肺泡细胞 TOLL样受体
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姜曲海猪肺泡巨噬细胞的分离培养与鉴定 被引量:5
13
作者 倪黎纲 赵旭庭 +2 位作者 王宵燕 刘鹤鸣 陈章言 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第23期163-165,共3页
通过冷PBS气管灌洗法分离培养姜曲海猪肺泡巨噬细胞(PAM),进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。从健康20日龄仔猪,分离得到PAM。以10%RPMI-1640培养液对PAM进行培养,观察细胞形态,用墨汁吞噬和免疫荧光检测了PAM的吞噬功能和... 通过冷PBS气管灌洗法分离培养姜曲海猪肺泡巨噬细胞(PAM),进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。从健康20日龄仔猪,分离得到PAM。以10%RPMI-1640培养液对PAM进行培养,观察细胞形态,用墨汁吞噬和免疫荧光检测了PAM的吞噬功能和纯度,比较冻存前和复苏后细胞的活率和细胞吞噬功能,以获得一批高纯度的PAM,用于猪体外呼吸道疾病发病机理的研究。 展开更多
关键词 肺泡细胞(PAM) 分离 培养 鉴定
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副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖抗猪肺泡巨噬细胞吞噬能力的研究 被引量:3
14
作者 周琪 贺现辉 +3 位作者 阳巧梅 冯赛祥 樊惠英 廖明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1232-1238,共7页
为探讨荚膜多糖在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)抗猪肺泡巨噬细胞吞噬中的作用,作者用间接免疫荧光试验和流式细胞术对H.parasuis SC096分离株及其荚膜缺陷型菌株进行了抗巨噬细胞吞噬试验。间接免疫荧光试验显示野生菌株组的H.pa... 为探讨荚膜多糖在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)抗猪肺泡巨噬细胞吞噬中的作用,作者用间接免疫荧光试验和流式细胞术对H.parasuis SC096分离株及其荚膜缺陷型菌株进行了抗巨噬细胞吞噬试验。间接免疫荧光试验显示野生菌株组的H.parasuis大多数存在于巨噬细胞外,而荚膜多糖缺失突变体则主要存在于巨噬细胞内。流式细胞仪检测结果表明,对应的野生型菌株组巨噬细胞总的吞噬率为12.51%,吞入效率为89.61%;而荚膜多糖缺陷型组巨噬细胞总的吞噬率为27.18%,吞入效率为91.06%。加入外源荚膜多糖后,野生型菌株组巨噬细胞总的吞噬率降为2.72%,吞入效率降为32.72%;荚膜多糖缺陷型组巨噬细胞总的吞噬率降为3.59%,吞入效率基本不变,为91.36%。荚膜多糖缺失后H.parasuis抗巨噬细胞吞噬能力降低,表明H.parasuis SC096株荚膜多糖具有抑制巨噬细胞吞噬能力的作用。 展开更多
关键词 嗜血杆菌 荚膜多糖 肺泡细胞 能力
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猪链球菌2型体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞的炎症相关细胞因子mRNA转录分析 被引量:3
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作者 汪伟 何孔旺 +9 位作者 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 俞正玉 茅爱华 温立斌 王小敏 李彬 郭容利 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期559-564,共6页
为探明猪链球菌2型(SS2)感染的致病机制,利用荧光定量PCR方法,分析不同SS2菌株对3D4/21猪肺泡巨噬细胞各炎症相关细胞因子mRNA体外转录水平的影响。结果显示强毒菌株ZY05719刺激细胞因子转录水平高于其impdh缺失株ZY05719(Δimpdh)和无... 为探明猪链球菌2型(SS2)感染的致病机制,利用荧光定量PCR方法,分析不同SS2菌株对3D4/21猪肺泡巨噬细胞各炎症相关细胞因子mRNA体外转录水平的影响。结果显示强毒菌株ZY05719刺激细胞因子转录水平高于其impdh缺失株ZY05719(Δimpdh)和无毒菌株HA0609及低毒菌株CS100322-1。ZY05719诱导多个细胞因子mRNA过度转录,包括IL-18、IL-8和IL-12等。除IL-10外,HA0609诱导其他细胞因子mRNA上调转录;而CS100322-1刺激后,绝大部分细胞因子mRNA处于稳定状态。不同毒力SS2菌株影响细胞因子mRNA转录,且这种影响具有时间上的依赖性。SS2具有调节炎性细胞因子转录的能力,其结果介导炎症反应及白细胞趋集于感染部位,这可能是SS2引起脑膜炎炎症特征的机制之一。 展开更多
关键词 链球菌2型 肺泡细胞 炎症相关细胞因子 荧光定量PCR
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猪圆环病毒2型感染的猪肺泡巨噬细胞TLR2/TLR4/CD16/CD18转录水平动态变化 被引量:2
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作者 王建立 杨柳 +1 位作者 杨凯 李焕荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期110-117,共8页
为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染对仔猪的肺泡巨噬细胞(PAM)免疫功能造成的影响,试验对PCV2感染40日龄左右健康仔猪PAM模式识别受体TLR2、TLR4、CD16、CD18mRNA的动态变化进行了研究。结果发现,在病毒感染后T... 为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染对仔猪的肺泡巨噬细胞(PAM)免疫功能造成的影响,试验对PCV2感染40日龄左右健康仔猪PAM模式识别受体TLR2、TLR4、CD16、CD18mRNA的动态变化进行了研究。结果发现,在病毒感染后TLR2、TLR4、CD16mRNA的转录水平动态变化基本相似,3、7d高于对照组,14d低于对照组,28d接近对照组,且3d时TLR4、CD16差异极显著(P<0.01),14d仅TLR2差异显著(P<0.05);CD18mRNA的转录水平,3d时显著低于对照组(P<0.05),而7d时显著高于对照组(P<0.05),28d接近正常。以上结果表明,PCV2感染PAM后可引起PAM对异物识别吞噬功能与吞噬后信号转导功能出现紊乱,影响了PAM吞噬和清除病原微生物的能力。 展开更多
关键词 圆环病毒2型 肺泡细胞 模式识别受体
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类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响 被引量:2
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作者 温立斌 何孔旺 +1 位作者 杨汉春 刘梦雅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期32-36,共5页
采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对... 采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。 展开更多
关键词 圆环病毒因子 肺泡细胞 抗原加工和递呈相关分子 共刺激分子 实时定量PCR
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从屠宰猪肺中分离培养猪肺泡巨噬细胞 被引量:5
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作者 王贵平 刘福林 +1 位作者 刘建 石冰花 《养猪》 2013年第2期123-124,共2页
单核细胞进入肺部成为巨噬细胞。猪肺泡巨噬细胞是猪肺脏重要的功能细胞。它不仅可吞噬侵入肺脏的粒子,参与肺脏的防御和免疫;而且还能分泌大量的生物活性物质,维持肺脏和机体正常的生理活动。当与致病因子接触后,猪肺泡巨噬细胞将... 单核细胞进入肺部成为巨噬细胞。猪肺泡巨噬细胞是猪肺脏重要的功能细胞。它不仅可吞噬侵入肺脏的粒子,参与肺脏的防御和免疫;而且还能分泌大量的生物活性物质,维持肺脏和机体正常的生理活动。当与致病因子接触后,猪肺泡巨噬细胞将其包围形成吞噬体,与细胞内溶酶体融合, 展开更多
关键词 肺泡细胞 分离 屠宰 生物活性物质 单核细胞 生理活动
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唾液酸黏附素SN及其介导PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞的研究进展 被引量:3
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作者 任钰为 江一波 张淑君 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第11期2168-2173,共6页
PRRSV是一种能够引起母猪的生殖性疾病和各个年龄阶段猪的呼吸性疾病的RNA正链病毒,在动物体内,PRRSV对单核细胞和巨噬细胞分化的亚群细胞有选择性趋性。唾液酸黏附素SN,又称为CD169或Siglec-1,是唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,属于I... PRRSV是一种能够引起母猪的生殖性疾病和各个年龄阶段猪的呼吸性疾病的RNA正链病毒,在动物体内,PRRSV对单核细胞和巨噬细胞分化的亚群细胞有选择性趋性。唾液酸黏附素SN,又称为CD169或Siglec-1,是唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,属于Ig超家族的I型膜蛋白。猪SN基因与人、小鼠等物种存在显著的差异,物种间胞质尾区同源性较差,N端区域表现出物种的特异性,R97和R116是猪SN的N端区域重要的氨基酸。SN的N端区域介导与PRRSV的结合,并且这种结合依赖于病毒表面的唾液酸,SN可能也介导病毒的内化作用。PRRSV非易感性细胞表达重组SN后可以粘附和内吞病毒,但不能有效感染。猪的SN介导PRRSV进入PAM的作用机制还不清楚,对SN基因、PRRSV感染机制等目前取得的研究进展进行了阐述。 展开更多
关键词 唾液酸黏附素(CD169) PRRSV 肺泡细胞(PAM)
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蓝耳病病毒对猪肺泡巨噬细胞的影响 被引量:4
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作者 卓曲 武力 +2 位作者 陈宝妮 蔡鑫华 冯宝仪 《养猪》 2009年第5期53-54,共2页
巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,分布在机体各个组织中,具有吞噬、抗原加工与递呈、分泌及免疫调节等生理功能。猪感染蓝耳病病毒后,主要影响肺泡巨噬细胞的功能,表现为肺泡巨噬细胞数量减少,吞噬、杀菌活性下降,分泌功能受到抑制,抗原... 巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,分布在机体各个组织中,具有吞噬、抗原加工与递呈、分泌及免疫调节等生理功能。猪感染蓝耳病病毒后,主要影响肺泡巨噬细胞的功能,表现为肺泡巨噬细胞数量减少,吞噬、杀菌活性下降,分泌功能受到抑制,抗原加工、递呈能力减弱等,直接造成感染细胞凋亡和附近大量非感染细胞凋亡,从而形成严重的免疫抑制。蓝耳病导致免疫抑制后,机体对其它病毒性疾病和细菌性疾病易感性明显增加。普清(替米考星)能直接进入到肺泡巨噬细胞内并保持较高的药物浓度,修复受损的肺泡巨噬细胞,恢复肺泡巨噬细胞的数量与吞噬能力等,解除免疫抑制状态,间接起到抗蓝耳病和继发感染的作用。 展开更多
关键词 肺泡细胞 免疫调节 蓝耳病
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