永生化上皮细胞系及肺鳞癌细胞系基因组DNA拷贝数变异的比较研究

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作者 路丹 曹邦荣 +4 位作者 冯林 郭素平 程书钧 高燕宁 张开泰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期1497-1500,共4页

目的:通过分析比较支气管上皮永生化细胞系与肺鳞癌细胞系的拷贝数变异探讨肿瘤早期发展的分子机制。方法:用人类比较基因组杂交芯片(aCGH)分别测定支气管上皮细胞系Y-BE和肺鳞癌细胞系NCI-H2170的拷贝数,经数据校正,对拷贝数变异基因进... 目的:通过分析比较支气管上皮永生化细胞系与肺鳞癌细胞系的拷贝数变异探讨肿瘤早期发展的分子机制。方法:用人类比较基因组杂交芯片(aCGH)分别测定支气管上皮细胞系Y-BE和肺鳞癌细胞系NCI-H2170的拷贝数,经数据校正,对拷贝数变异基因进行GO(Gene Ontology)富集分析。结果:永生化上皮细胞系早代Yp21仅出现了少量的DNA拷贝数变异,而在染色体20 q11～12区段Yp21细胞与HCI-H2170细胞出现了相似的拷贝数变异结果;永生化上皮细胞系晚代Yp113具有类神经细胞黏附基因的拷贝数增加现象;整体来看,从永生化上皮细胞早代到晚代,再与肿瘤细胞比较,DNA拷贝数变异频率不断升高,基因组稳定性逐渐下降结论:通过对永生化上皮细胞拷贝数变异的研究,成功建立了肺癌癌前模型的拷贝数变异谱,部分拷贝数变异可能代表了肿瘤发生发展早期的分子事件,预示了细胞的潜在恶性,这些发现可能为阐明肿瘤发生发展的分子机制提供了条件。 展开更多

关键词 永生化上皮细胞 拷贝数变异 肺鳞癌

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鬼臼毒素纳米脂质载体的制备及体外对HPV感染的永生化人宫颈上皮细胞的作用 被引量：8

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作者 种树彬 曾抗 +3 位作者 李国锋 任非 朱晓亮 周金洁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1023-1028,共6页

目的研究鬼臼毒素纳米脂质载体（POD-NLC）的体外对HPV感染的永生化人宫颈上皮细胞的作用。方法采用乳化蒸发法制备POD-NLC,分别应用扫描电镜、粒径仪、高效液相法等方法研究其表征,并观察其稳定性。分别以不同浓度（0.00011μg/ml）的P... 目的研究鬼臼毒素纳米脂质载体（POD-NLC）的体外对HPV感染的永生化人宫颈上皮细胞的作用。方法采用乳化蒸发法制备POD-NLC,分别应用扫描电镜、粒径仪、高效液相法等方法研究其表征,并观察其稳定性。分别以不同浓度（0.00011μg/ml）的POD-NLC和鬼臼毒素（POD）处理H8细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,以荧光显微镜观察细胞的形态变化,流式细胞术（FCM）检测其凋亡率和细胞周期。结果①制备的POD-NLC扫描电镜下呈球形,有较好的稳定性,粒径为（85.6±10.25）nm,电位为（26.2±4.1）mV,包封率为（88.56±3.1）%;②POD-NLC能较强地抑制H8细胞的增殖,其抑制作用呈现时间和剂量依赖性;POD-NLC和POD作用72h对H8细胞的抑制率最高分别为95.8%、65.6%,半数抑制浓度（IC50）分别为0.015、0.13μg/ml;空白NLC对H8细胞的增殖无影响;③浓度为0.01μg/ml的POD-NLC和POD分别处理H8细胞48h后,H8细胞的凋亡率分别为（88.30±4.28）%和（59.95±3.26）%;荧光显微镜观察,均出现了核固缩、染色质高度凝聚、凋亡小体等典型的凋亡形态改变;与空白对照组相比,POD-NLC组和POD组G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例无明显变化,G0/G1期细胞比例明显减少,但两组间细胞周期时相比例的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该制备工艺可行;与POD相比,POD-NLC对H8细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效果,可使细胞阻滞于G2/M期。 展开更多

关键词 鬼臼毒素 纳米结构脂质载体 细胞凋亡 永生化人宫颈上皮细胞

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基于永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02对猪源益生性乳酸菌的筛选 被引量：2

3

作者 王大会 赵献军 +3 位作者 齐雪峰 苏运芳 李义 佟琪 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第11期12-18,共7页

【目的】从健康仔猪的粪便及各肠段内容物和黏液中分离乳酸菌,并以永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02为体外细胞模型对猪源益生性乳酸菌进行筛选。【方法】采用分离培养和常规生化试验对乳酸菌进行分离与鉴定。用永生化猪小肠上皮细胞ZYM-... 【目的】从健康仔猪的粪便及各肠段内容物和黏液中分离乳酸菌,并以永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02为体外细胞模型对猪源益生性乳酸菌进行筛选。【方法】采用分离培养和常规生化试验对乳酸菌进行分离与鉴定。用永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02作为体外模型,通过黏附性试验、耐酸耐胆盐试验和对致病菌的黏附抑制试验对菌株进行筛选。【结果】分离筛选出了12株乳酸菌,其黏附能力存在差异。Y091231、Y091221、Y224031、X302032、Y223052和Y223072等6株菌的黏附性较好,黏附指数依次为:2 903.25±83.33,2 320.37±81.02,1 965.43±37.72,1 416.12±62.74,1 100.00±68.10,988.73±17.06。对其进行耐酸耐胆盐试验和抑菌试验,结果表明,菌株Y091231、Y091221和Y224031对致病菌均具有较强的黏附抑制能力,且对高胆盐、低pH具有较强的耐受性。其中Y091231对大肠杆菌C83921的黏附抑制率可达(99.40±3.17)%,Y091221对致病性沙门氏菌的黏附抑制率为(97.10±2.04)%,Y091231对金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑制率为(98.00±2.31)%。Y091231、Y091221和Y224031 3株菌分别被鉴定为发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌和嗜酸乳杆菌。【结论】筛选得到的3株益生性乳酸菌,不仅具有耐酸耐胆盐能力,而且对小肠黏膜上皮细胞具有强黏附性,对大肠杆菌C83921、致病性沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CVCC2258具有较强的黏附抑制能力,可作为肠道微生态制剂的候选菌株。 展开更多

关键词 永生化猪小肠上皮细胞 猪源乳酸菌 黏附性 黏附抑制

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信号传导及转录激活子3通路参与卷烟烟气凝集物诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化 被引量：1

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作者 袁娜娜 李伟 +9 位作者 陈余清 张佳秀 洪磊 蒋鹏 周继红 王效静 朱茂祥 潘秀颉 杨陟华 顾永清 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1182-1191,共10页

目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞... 目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞状细胞不典型增生组织、112例癌旁组织中p STAT3蛋白的表达,比较其表达与吸烟的相关性。构建卷烟烟气凝集物(CSC)诱导第10,20,30,40,50,60及70代细胞(P10,P20,P30,P40,P50,P60及P70)永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化模型。从血清抗性及锚着独立性等方面对CSC诱导各代BEP2D细胞的恶性转化特征进行鉴定。Western蛋白印迹法检测CSC诱导各代BEP2D细胞中p STAT3的表达。MTT法和流式细胞术分别检测JSI-124 0.25~10μmol·L^(-1)对P70细胞存活及凋亡的影响。JSI-124处理CSC诱导P70 24 h后检测存活蛋白表达的变化。结果 p STAT3蛋白在肺鳞癌组织中表达高于鳞状细胞不典型增生和癌旁组织(P<0.05);p STAT3在目前吸烟者中的表达均高于曾经吸烟者和从不吸烟者(P<0.05),且随着吸烟指数增加两者表达水平逐渐升高(P<0.01)。随着转化代数的增高,细胞血清抗性增加,锚着独立性增强,P30细胞以后尤为明显。p STAT3在正常对照组和乙醇对照组中弱表达,且两者之间无显著性差异;CSC诱导的各组BEP2D细胞中,p STAT3的表达均显著高于正常对照组和乙醇对照组(P<0.05),并随细胞代数的增高而增高。JSI-124抑制P70细胞增殖、促进P70细胞凋亡呈浓度及时间依赖性。JSI-124 1μmol·L^(-1)作用P70细胞24 h后,存活蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 STAT3信号通过调控存活蛋白表达抑制细胞凋亡,参与烟草诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化。 展开更多

关键词 信号传导及转录激活子3 卷烟烟气凝集物 永生化人支气管上皮细胞

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烟草悬凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的研究

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作者 谢俊豪 吴庆琛 +4 位作者 张诚 李强 朱茂祥 杨陟华 潘秀颉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期49-51,共3页

目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化。方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro... 目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化。方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro-translation PCR,RT-PCR)检测各组细胞株中survivin基因变化,免疫组织化检测各组中survivin蛋白的表达。结果:1.survivin mRNA在正常细胞BEP-2D中的表达强度为0.08,在转化的肺癌细胞P-15、P-25和P-38中分别为0.56、0.80和0.81。2.survivin蛋白在正常BEP-2D细胞株中表达阴性,在转化的3组细胞中表达阳性,且survivin蛋白在正常细胞与转化细胞株中的表达存在明显差异,其中在P-15具有明显差异(P<0.05)。结论:survivin基因及蛋白的表达水平可作为早期肺癌的一个检测指标。 展开更多

关键词 烟草悬凝物 永生化人支气管上皮细胞 survivin基因及蛋白 免疫组化 半定量反转录PCR

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HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调 被引量：4

6

作者 张晓玲 陈剑 +2 位作者 姚敏 刘小勇 周清 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期880-884,共5页

目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-... 目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。 展开更多

关键词 缺氧 小发夹RNA 自发永生化人角膜上皮细胞 缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子 色素上皮生长因子

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人支气管上皮细胞恶性转化过程中染色体畸变的研究 被引量：3

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作者 孔令文 吴庆琛 朱进国 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第6期813-819,共7页

目的:研究在烟草特异性亚硝胺(NNK)诱发人支气管上皮细胞(BEAS-2B)恶性转化过程中染色体畸变,探讨其在吸烟高危人群罹患肺癌预警及普查方面的意义。方法用NNK诱发BEAS-2B细胞(BEAS-2BNNK)恶性转化,并在此过程中用常规中期染色体分析方法... 目的:研究在烟草特异性亚硝胺(NNK)诱发人支气管上皮细胞(BEAS-2B)恶性转化过程中染色体畸变,探讨其在吸烟高危人群罹患肺癌预警及普查方面的意义。方法用NNK诱发BEAS-2B细胞(BEAS-2BNNK)恶性转化,并在此过程中用常规中期染色体分析方法,动态观察染色体畸变的情况。结果:1．NNK诱发BEAS-2B细胞恶性转化模型的建立①BEAS -2BNNK(实验组)第5代细胞血清抗性显著增强。②第15代BEAS-2BNNK细胞具有锚着独立性生长特性。③第20代BEAS -2BNNK细胞超微结构出现明显异型性。④第25代BEAS-2BNNK细胞在裸鼠体内成瘤,病理为高分化鳞形细胞癌。2．染色体畸变①BEAS-2B(对照组)二倍体细胞占细胞总数的91％-97％,传代后核型稳定;从第5代开始BEAS-2BNNK细胞即逐渐失去正常核型,随着传代次数增加,二倍体细胞比例从83％递减至54％,异倍体及多倍体细胞呈递增趋势,较对照组明显增高。②各代BEAS-2B细胞结构畸变发生率为2％-4％;除第5代BEAS-2BNNK细胞结构畸变总频率(11％)明显高于BEAS -2B细胞外,其余各代细胞与BEAS-2B细胞相近。结论:NNK能成功诱发人支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞恶性转化, 为进一步探讨肺癌发生机制、尤其是吸烟致肺癌发生机制提供了理想模型。染色体的异倍性和多倍性在NNK诱发BEAS- 2B细胞转化成肺癌过程中可能属早期事件,有望成为吸烟高危人群罹患肺癌的预警及普查指标之一。 展开更多

关键词 NNK 永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B) 染色体 畸变

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人支气管上皮细胞恶性转化过程中FHIT蛋白表达的研究 被引量：1

8

作者 孔令文 吴庆琛 朱进国 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第2期167-172,共6页

背景与目的目前大多数研究者分别研究了正常支气管上皮、癌前病变及肺癌组织(吸烟或不吸烟者)标本FHIT蛋白表达,而没有在肺癌发生发展过程中研究其表达及意义。本研究的目的是在烟草特异性亚硝胺(NNK)诱发人支气管上皮细胞(BEAS2B)恶性... 背景与目的目前大多数研究者分别研究了正常支气管上皮、癌前病变及肺癌组织(吸烟或不吸烟者)标本FHIT蛋白表达,而没有在肺癌发生发展过程中研究其表达及意义。本研究的目的是在烟草特异性亚硝胺(NNK)诱发人支气管上皮细胞(BEAS2B)恶性转化过程中,探讨FHIT蛋白表达的变化及其意义。方法用500mg/LNNK诱发BEAS2B细胞(对照组)恶性转化为BEAS2BNNK细胞(实验组),并在此过程中用免疫细胞化学方法动态观察FHIT蛋白表达的情况。结果㈠NNK诱发BEAS2B细胞恶性转化模型的建立:①第5代BEAS2BNNK细胞血清抗性显著增强;②第15代BEAS2BNNK细胞具有锚着独立性生长特性(软琼脂克隆形成);③第20代BEAS2BNNK细胞超微结构出现明显异型性;④第25代BEAS2BNNK细胞在裸鼠体内成瘤,病理类型为高分化鳞癌。㈡FHIT蛋白表达:BEAS2B细胞FHIT蛋白表达稳定,在各代之间的差异无统计学意义(P>0.05);第5代BEAS2BNNK细胞FHIT蛋白表达即有所降低,并随传代次数增加而进行性下降,但第25代细胞FHIT蛋白却呈高表达。结论①500mg/LNNK能成功诱发BEAS2B细胞恶性转化,为进一步探讨肺癌尤其是吸烟致肺癌的发生机制提供了理想模型。②FHIT蛋白表达减弱在肺癌发生过程中可能属早期事件,但FHIT蛋白在细胞恶性转化晚期上调表达值得进一步研究。 展开更多

关键词 NNK 永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B) FHIT蛋白

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

9

作者 姚敏 陈剑 +4 位作者 王文娟 张晓玲 杨筱曦 周清 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第9期801-805,共5页

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 &#... 目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。 展开更多

关键词 人永生化角膜上皮细胞 人羊膜上皮细胞 丝裂霉素 微环境 组织工程

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烟草悬凝物对人支气管上皮细胞急性毒性损伤的研究

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作者 张诚 吴庆琛 +4 位作者 朱茂祥 杨陟华 潘秀颉 李强 谢俊豪 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期511-514,共4页

目的通过研究烟草悬凝物(CSC)对人支气管上皮细胞(BEP-2D cells)急性毒性损伤生物学作用,探讨烟草烟气在人支气管上皮细胞损伤过程中的机制,为呼吸道疾病的防治措施提供实验依据。方法收集某品牌香烟烟气并溶解于LHC-8培养液制备成CSC;... 目的通过研究烟草悬凝物(CSC)对人支气管上皮细胞(BEP-2D cells)急性毒性损伤生物学作用,探讨烟草烟气在人支气管上皮细胞损伤过程中的机制,为呼吸道疾病的防治措施提供实验依据。方法收集某品牌香烟烟气并溶解于LHC-8培养液制备成CSC;采用永生化的人支气管上皮细胞,分为对照组(BEP-2D cells)和实验组(BEP-2DCSC cells)。观察烟草悬凝物染毒后的细胞存活率、膜通透性损伤、细胞凋亡率和次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(HPRT gene)突变率。结果在急性毒性损伤过程中,随着CSC浓度的逐渐增加:细胞存活率逐步下降、细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)逐渐且明显增多、细胞的早期和晚期凋亡率均增大、HPRT基因突变率逐渐增大,均与染毒剂量具有明显量-效关系。结论CSC作为一种复杂的香烟烟气混合物具有较为典型的急性细胞毒性作用,其机制可能与细胞膜通透性增加、细胞凋亡及HPRT基因突变有关。 展开更多

关键词 烟草悬凝物 永生化人支气管上皮细胞 急性毒性损伤

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食管细胞系和癌组织中分化抑制因子Id-1mRNA的表达

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作者 李健 范宗民 +7 位作者 高珊珊 何欣 郭花芹 齐义军 郭涛 杜芳 秦豫培 王立东 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期37-38,共2页

目的:探讨分化抑制因子Id-1基因在食管癌组织和食管癌细胞系中的表达状况。方法:采用RT-PCR方法检测食管癌细胞系(EC109、EC1、EC18)、食管永生化上皮细胞系(NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT)及20例食管癌及其配对癌旁正常组织中Id-1mRNA... 目的:探讨分化抑制因子Id-1基因在食管癌组织和食管癌细胞系中的表达状况。方法:采用RT-PCR方法检测食管癌细胞系(EC109、EC1、EC18)、食管永生化上皮细胞系(NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT)及20例食管癌及其配对癌旁正常组织中Id-1mRNA基因的表达状况。结果:EC109、EC1、EC18、NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT均出现Id-1mRNA的表达。正常食管上皮中未见其表达,癌旁组织中Id-1mRNA阳性表达率为35%(7/20),癌组织中为65%(13/20),有升高趋势,但差异无统计学意义(χ2=3.6,P>0.05)。结论:Id-1基因可能参与了食管癌的癌变过程。 展开更多

关键词 Id-1基因 食管癌 组织 细胞系 食管永生化上皮细胞系

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生存素和增殖细胞核抗原在个旧矿粉诱导的肺癌细胞中的表达

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作者 梁锐 金克炜 +4 位作者 王志强 赵作辉 王芳 高倩 阮永华 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第2期83-87,共5页

背景与目的云南个旧为矿工职业性肺癌的高发区,既往本课题小组以永生化人支气管上皮细胞(i mmortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为靶细胞,以采自井下作业面的个旧矿粉为染毒物,成功建立了个旧矿粉体外诱导的恶性转... 背景与目的云南个旧为矿工职业性肺癌的高发区,既往本课题小组以永生化人支气管上皮细胞(i mmortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为靶细胞,以采自井下作业面的个旧矿粉为染毒物,成功建立了个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞模型。本研究旨在探讨生存素(survivin)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞过程中发挥的作用。方法采用免疫荧光细胞化学和免疫组织化学技术检测survivin和PCNA在BEAS-2B及其恶性转化肺癌细胞中的表达。结果①免疫荧光细胞化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,在其恶性转化肺癌细胞中表达阳性;PCNA蛋白在BEAS-2B中低表达,在其恶性转化肺癌细胞中高表达。②免疫组织化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,显著低于在其恶性转化肺癌细胞中的表达率(85%,17/20)(P<0.001);PCNA蛋白在BEAS-2B中的标记指数(labelling index,LI)显著低于其恶性转化肺癌细胞(P<0.001);survivin表达阳性的恶性转化肺癌细胞中PCNA的LI明显高于survivin表达阴性者(P<0.001)。结论①survivin在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示其可能在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中发挥重要作用,为揭示个旧矿工肺癌的致癌机制提供依据,其有可能作为个旧矿工肺癌的检测和治疗的新靶点。②PCNA在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示细胞增殖过程可能在该恶性转化过程中发挥重要作用。③sur-vivin可能通过PCNA的介导促进细胞的增殖,二者可能在该恶性转化过程中发挥协同作用。 展开更多

关键词 生存素 增殖细胞核抗原 肺肿瘤 个旧矿粉 永生化人支气管上皮细胞

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鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定与VP1基因序列分析 被引量：7

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作者 刘博 祖立闯 +3 位作者 魏中锋 谷英华 毕研丽 王文秀 《中国家禽》 北大核心 2022年第12期34-39,共6页

为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(5... 为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(50))、对鸭胚的致病性,并进行VP1基因序列比对及相似性分析。结果显示:临床病料分离培养的病毒可引起GEEC出现细胞明显皱缩、聚集、折光性增强等典型细胞病变,表明分离到一株鸭源NGPV毒株,命名为SDHZ株,该病毒对1%鸡红细胞无凝集性,TCID_(50)高达10^(-6.25)/mL,鸭胚半数致死量(ELD_(50))为10^(-4.5)/mL,接种鸭胚死亡出现全身及肝脏出血、短喙、发育迟缓等典型症状,VP1基因序列与樱桃谷鸭中分离的新型鹅细小病毒(NGPV)相似性为95.3%~98.0%,与GPV经典毒株的相似性为89.3%~94.6%。表明该鸭场本次疫病病原为NGPV,为进一步研究NGPV致病机制及制定综合防控措施提供参考。 展开更多

关键词 新型鹅细小病毒 永生化鹅胚上皮细胞系 分离鉴定 VP1基因 序列分析

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