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牦牛水通道蛋白11基因克隆分析及其在不同发育阶段睾丸中的表达
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作者 刘敏清 陈文东 +4 位作者 何玉鹏 苏满春 潘阳阳 崔燕 余四九 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期1-8,17,共9页
【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到A... 【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到AQP11基因的cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析。采用qRT-PCR、Western blot方法对不同发育阶段牦牛睾丸中AQP11基因及蛋白的表达水平进行检测,采用免疫组织化学法对AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达进行定位。【结果】成功克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,其长度为460 bp,共编码144个氨基酸。AQP11分子式:C_(710)H_(1135)N_(187)O_(191)S_(12),为稳定性蛋白,保守性较高。qRT-PCR结果显示,随着年龄的增长,AQP11基因在牦牛睾丸中的表达水平呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),其他年龄组间差异不显著(P>0.05)。Western blot结果显示,随着牦牛年龄的增长,AQP11蛋白表达水平也呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平最高,在初生牦牛睾丸中的表达水平显著低于其他年龄组(P<0.05)。免疫组织化学试验结果显示,AQP11蛋白在睾丸中主要表达于精子、精子细胞、间质细胞、支持细胞和管周肌样细胞,各年龄段表达位置基本一致。【结论】克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,明确了其生物信息学特征。AQP11基因在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),AQP11蛋白在青年牦牛中的表达水平显著高于初生牦牛(P<0.05)。推测AQP11在牦牛精子发育、成熟及膜的完整性方面发挥着重要作用。 展开更多
关键词 牦牛 睾丸 通道蛋白11基因 繁殖能力 高寒牧区
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月季水通道蛋白基因家族的生物信息学特征及干旱下的表达分析
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作者 李雪芬 邓小辉 陈清华 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第22期15-23,共9页
水通道蛋白(AQP)是高度多样化的内在蛋白家族,可运输水和中性溶质,在植物发育和胁迫反应中起着至关重要的作用。然而关于月季(Rosa chinensis)AQP的组成和生物学功能仍知之甚少,以月季品种坦尼克为试验材料,基于全基因组分析,对月季AQP... 水通道蛋白(AQP)是高度多样化的内在蛋白家族,可运输水和中性溶质,在植物发育和胁迫反应中起着至关重要的作用。然而关于月季(Rosa chinensis)AQP的组成和生物学功能仍知之甚少,以月季品种坦尼克为试验材料,基于全基因组分析,对月季AQP家族成员进行鉴定和生物信息学分析,并分析相关基因在干旱胁迫下的表达情况。结果表明,共鉴定出61个AQP编码基因的非冗余成员,其中57个可定位于9条染色体上。系统发育分析结果表明,月季AQP(RsAQP)分为4个亚家族,包括21个质膜内在蛋白(PIP)、19个液泡膜内在蛋白(TIP)、16个NOD样内在蛋白(NIP)和5个小碱性内在蛋白(SIP),所有RsAQP都包含共同的高度保守基序、跨膜区域及多种顺式作用元件,表明RsAQP具有潜在跨膜转运功能。RNA-Seq表达模式分析结果表明,PIP1表达水平普遍高于其他亚群;qRT-PCR结果进一步表明,7个PIP1亚群成员中,6个基因(RsPIP1-1、RsPIP1-2、RsPIP1-3、RsPIP1-4、RsPIP1-6、RsPIP1-7)在干旱胁迫下上调表达,以RsPIP1-6表达水平最高、契合度最高,推测RsPIP1-6可能是月季耐旱的关键基因。 展开更多
关键词 月季 通道蛋白 质膜内在蛋白(PIP) 基因 干旱胁迫
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植物水通道类NOD26膜内在蛋白的生物学功能研究与进展
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作者 刘兰 方贝贝 徐芳森 《植物营养与肥料学报》 北大核心 2025年第6期1239-1250,共12页
水通道蛋白(AQPs)是植物体内水分跨膜运输的主要通道,有关AQPs维持水稳态的研究近年来已被广泛报道。在AQPs的7个亚家族中,类NOD26膜内在蛋白(nodulin 26-like intrinsic proteins,NIPs)是植物所特有的一个亚族,它在植物中转运水的能力... 水通道蛋白(AQPs)是植物体内水分跨膜运输的主要通道,有关AQPs维持水稳态的研究近年来已被广泛报道。在AQPs的7个亚家族中,类NOD26膜内在蛋白(nodulin 26-like intrinsic proteins,NIPs)是植物所特有的一个亚族,它在植物中转运水的能力相对较弱,但在类金属的运输上发挥了重要功能。NIPs蛋白结构高度保守,具有2个结构域:NPA基序和ar/R选择性过滤器,它们对底物选择性至关重要。NIPs作为典型的类金属跨膜通道蛋白,根据ar/R区的氨基酸组成可分为3个亚类,包括NIPⅠ、NIPⅡ和NIPⅢ,不同亚类在底物运输上存在特异性和冗余性。NIPⅠ介导砷和锑的转运,NIPⅡ参与硼、砷和锗的运输,NIPⅢ运输硅、硒、硼、砷、锑和锗。NIPs在植物体内对必需和有益类金属(硼、硅和硒)的调节,增强了植物抵御逆境胁迫的能力;对有害类金属(砷和锑)的调节,一方面通过减少其向种子的分配进而保障食品安全和人体健康,另一方面通过在植物体内超富集以达到环境修复的目的。此外,NIPs作为一种多功能通道蛋白,还能够运输过氧化氢、甘油、乳酸、尿素和氨气等,在植物信号转导和多种生理代谢活动中起作用。随着全球变暖,极端天气频发,植物在生长发育过程中将面临更大的挑战。因此,基于NIPs对多种底物的选择性和功能多样性,可考虑将其作为培育高抗逆性作物的靶基因。NIPs在植物中的表达具有器官、组织和细胞特异性,其表达丰度及蛋白活性在转录水平和蛋白水平上被严格调控。明确NIPs的调控机制对于进一步解析其在植物中的生物学功能非常必要。综上,本文在介绍NIPs结构和分类基础上,重点阐述了NIPs底物运输及其相关的生物学功能和调控机制,以期为通过基因工程技术来增强作物抗逆性并提高作物产量和品质提供关键候选基因。 展开更多
关键词 通道蛋白 类NOD26膜内在蛋白 NIPs基因 底物 准金属 生物学功能 调控机制
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水通道蛋白基因在胎肺发育过程中的表达 被引量:1
4
作者 刘慧姝 曾瑞萍 E.M.Wintour 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第B03期23-26,共4页
【目的】测定水通道蛋白基因(Aquaporins,AQPs)是否在中晚期妊娠羊胎肺中表达及其表达模式。【方法】应用荧光定量 PCR 技术对妊娠80d,100d,120d,140d 的羊胎外周肺组织各4例及4例成年羊外周肺组织行 AQP1,3,4和5基因的 mRNA 表达的定... 【目的】测定水通道蛋白基因(Aquaporins,AQPs)是否在中晚期妊娠羊胎肺中表达及其表达模式。【方法】应用荧光定量 PCR 技术对妊娠80d,100d,120d,140d 的羊胎外周肺组织各4例及4例成年羊外周肺组织行 AQP1,3,4和5基因的 mRNA 表达的定量检测;应用 Western 免疫蛋白杂交对妊娠100d,130d的羊胎的外周肺组织行 AQP1,3,4和5基因的蛋白表达的检测。【结果】AQP1,3,4,5基因 mRNA 及蛋白质均在妊娠中晚期羊胎肺中表达;AQP5mRNA 在胎肺的表达显著高于成羊肺。【结论】AQPs 基因在胎肺中表达及 AQP5在胎肺中高于成年肺的特定表达模式提示 AQPs 在胎肺液体产生及吸收中发挥一定作用。 展开更多
关键词 胎肺发育 水通道蛋白基因的表达 荧光定量PCR技术 免疫蛋白杂交
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茶树水通道蛋白基因的克隆与表达分析 被引量:10
5
作者 岳川 曹红利 +4 位作者 王赞 陈丹 林宏政 孙云 叶乃兴 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1419-1427,共9页
从茶树中克隆了6个水通道蛋白(aquaporin,AQP)基因的cDNA全长序列,根据序列相似性和系统进化分析结果,分别命名为CsNIP1;1、CsNIP5;1、CsPIP2;1、CsPIP2;2、CsTIP1;1和CsTIP2;2。氨基酸序列特征分析表明,6个基因的编码氨基酸序列长度在2... 从茶树中克隆了6个水通道蛋白(aquaporin,AQP)基因的cDNA全长序列,根据序列相似性和系统进化分析结果,分别命名为CsNIP1;1、CsNIP5;1、CsPIP2;1、CsPIP2;2、CsTIP1;1和CsTIP2;2。氨基酸序列特征分析表明,6个基因的编码氨基酸序列长度在250~301个氨基酸残基,分子量在25.186~30.728kD之间;均为疏水性蛋白,并都含有6个跨膜螺旋;6个基因均含有MIP蛋白家族的特征序列HF/I/VNPA/SI/L/VTI/FA/G和NPA(Asn-Pro-Ala)基序,以及类似沙漏状的跨膜三级结构。荧光定量PCR分析显示:这6个基因在根、茎、叶和花中均表达,且在根中的表达水平最高,表明它们与茶树根系的物质转运密切相关;CsAQPs基因的表达受ABA、高盐、干旱和低温胁迫的调控,表明它们可能参与茶树抗逆响应。 展开更多
关键词 茶树 通道蛋白基因 非生物胁迫 表达分析
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龙眼水通道蛋白基因(DLPIP1)的克隆与表达分析 被引量:11
6
作者 陈虎 何新华 +4 位作者 罗聪 邓立宝 胡颖 李明娟 杨丽涛 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期225-230,共6页
应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时,发现PIP1蛋白在龙眼低温胁迫中上调表达。应用RACE技术克隆龙眼水通道蛋白基因全长eDNA,命名为DL纠纠,基因登陆号为JN572691,长度为1132bp,包括1个900bp的开放阅读框,编码29... 应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时,发现PIP1蛋白在龙眼低温胁迫中上调表达。应用RACE技术克隆龙眼水通道蛋白基因全长eDNA,命名为DL纠纠,基因登陆号为JN572691,长度为1132bp,包括1个900bp的开放阅读框,编码299个氨基酸序列,同源性分析表明,DLPIP1在21个不同植物中的一致性为90%-93%。应用生物信息学软件对DLPIP1氨基酸序列分析表明,含有7个跨膜区,有2个NPA单元,其氨基酸残基与MIP家族蛋白保守区序列完全一致。氨基酸序列比对发现,该序列与其他物种PIP质膜水通道蛋白氨基酸序列有很高的同源性。利用实时荧光定量技术对现肼川在低温胁迫下不同组织表达谱分析表明,现用纠在龙眼根、茎、叶中都有表达,在根中的表达量最高,其次是茎和叶。DLPIP1在低温胁迫时,随着低温胁迫时间的延长而发生变化。这说明DLPIP1蛋白在龙眼低温逆境过程中起作用。 展开更多
关键词 龙眼 通道蛋白 低温胁迫 克隆 表达
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斜纹夜蛾水通道蛋白1(AQP1)基因的克隆、分子特性和表达分析 被引量:8
7
作者 刘海远 舒本水 +2 位作者 姜春来 李良德 钟国华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期339-349,共11页
水通道蛋白(aquaporin,AQP)是生物体中一种重要的跨膜通道蛋白,它通过一些中性小分子化合物的运输,从而参与了昆虫对食物中水分再吸收、抗寒和抗干燥等重要生理机制。为研究斜纹夜蛾中水通道蛋白的基因特征和时空表达特征,本研究利用同... 水通道蛋白(aquaporin,AQP)是生物体中一种重要的跨膜通道蛋白,它通过一些中性小分子化合物的运输,从而参与了昆虫对食物中水分再吸收、抗寒和抗干燥等重要生理机制。为研究斜纹夜蛾中水通道蛋白的基因特征和时空表达特征,本研究利用同源克隆和RACE技术获得了斜纹夜蛾水通道蛋白1(AQP1)基因的两个转录异构体,并将其分别命名为SL-AQP1A(GenBank登录号:KC999953)和SL-AQP1B(GenBank登录号:KC999954),其中SL-AQP1B比SL-AQP1A在推导的编码区5'端连续性缺失81个碱基,而其他序列完全一致;同源分析显示推导的SL-AQP1与家蚕为代表的水通道蛋白1具有较高的同源性。拓扑学和三级结构模拟显示其有经典的6个全跨膜结构域、2个半跨膜结构域、2个保守的NPA(asparagine-proline-alanine,天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸)结构基序及选择性水孔构件ar/R(aromatic arginine,芳香族精氨酸)。qRT-PCR结果显示,SL-AQP1整体时空表达差异性十分明显,并且SL-AQP1B的表达量显著高于SL-AQP1A;SL-AQP1在卵期和预蛹期有较高的表达量,在中肠、马氏管、血淋巴、消化腺中有相对较高的表达量,暗示其在斜纹夜蛾中存在重要的渗透压调节作用。本文结果为进一步研究水通道蛋白在斜纹夜蛾中的作用提供了一定的分子基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 通道蛋白 基因克隆 转录异构体 分子特性 表达分析
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橡胶树水通道蛋白基因HbPIP1和HbPIP2的功能鉴定及其表达分析 被引量:11
8
作者 王进 安锋 +3 位作者 蔡秀清 邹智 张薇 林位夫 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期69-75,共7页
利用非洲爪蟾卵母细胞对橡胶树水通道蛋白基因HbPIP1和HbPIP2进行功能鉴定,发现HbPIP1具有快速水分传输功能而HbPIP2不具该功能。推测HbPIP1基因表达可能与乙烯利刺激橡胶树增产机制有关。因此,选择对乙烯利较敏感的橡胶树PR107品种,利... 利用非洲爪蟾卵母细胞对橡胶树水通道蛋白基因HbPIP1和HbPIP2进行功能鉴定,发现HbPIP1具有快速水分传输功能而HbPIP2不具该功能。推测HbPIP1基因表达可能与乙烯利刺激橡胶树增产机制有关。因此,选择对乙烯利较敏感的橡胶树PR107品种,利用RT-qPCR和Western blot技术检测HbPIP1在转录和翻译水平的表达变化,探讨其与乙烯利刺激后橡胶树排胶体积、排胶时间、干含和总固形物变化的关系。结果表明:HbPIP1在树皮、胶乳和次生木质部中具有较高的表达量;胶乳中HbPIP1的表达量随乙烯利刺激时间延长呈上升趋势,而树皮中HbPIP1的表达量则呈降低的趋势;乙烯利通过调节HbPIP1的基因表达促进水分向乳管细胞的运输,从而降低胶乳干含和总固形物,延迟排胶时间,增加排胶体积和产量。 展开更多
关键词 橡胶树 通道蛋白 功能鉴定 表达分析 组织特异性表达 乙烯利刺激 胶乳稀释
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烟草水通道蛋白NtTIP1基因的克隆及其在干旱胁迫下的表达分析 被引量:7
9
作者 夏宗良 李军旗 +2 位作者 刘剑君 苏新宏 张小全 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期509-513,共5页
为明确烟草水通道蛋白在干旱胁迫下的表达特性,利用RT—PCR方法从烟草中克隆了一个水通道蛋白NtTIP1的全长eDNA编码区.序列分析表明,NtTIP1开放阅读框长756bp,编码251个氨基酸.对该基因编码氨基酸的保守结构域进行分析,NtTIP1包含... 为明确烟草水通道蛋白在干旱胁迫下的表达特性,利用RT—PCR方法从烟草中克隆了一个水通道蛋白NtTIP1的全长eDNA编码区.序列分析表明,NtTIP1开放阅读框长756bp,编码251个氨基酸.对该基因编码氨基酸的保守结构域进行分析,NtTIP1包含6个保守的跨膜结构域.系统进化分析显示,NtTIP1与3种茄科植物、拟南芥TIP同源性较高,相似性为80%~97%.荧光定量PCR分析表明,NtTIP1在烟草的根、茎、叶等营养器官中表达量较高.20%PEG6000诱导的干旱胁迫条件下,NtTIP1在耐旱、干旱敏感品种中表现出不同的响应模式,在耐旱品种中显著上调表达,而在干旱敏感品种中显著下调表达.这一结果表明了NtTIP1的表达丰度与烟草的抗旱性密切相关. 展开更多
关键词 烟草 通道蛋白 NtTIP1基因 干旱胁迫
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马尾松水通道蛋白PmPIP1基因克隆及在干旱胁迫下的表达分析 被引量:8
10
作者 蔡琼 丁贵杰 文晓鹏 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期191-200,共10页
克隆马尾松Pinus massoniana水通道蛋白(AQP),并对其生物信息学与干旱胁迫表达模式进行分析。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以及互补脱氧核糖核酸(c DNA)末端快速扩增(RACE)方法克隆马尾松水通道蛋白基因。采用实时荧光定量聚合酶... 克隆马尾松Pinus massoniana水通道蛋白(AQP),并对其生物信息学与干旱胁迫表达模式进行分析。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以及互补脱氧核糖核酸(c DNA)末端快速扩增(RACE)方法克隆马尾松水通道蛋白基因。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析其在干旱胁迫下的响应模式。结果克隆到一个马尾松水通道蛋白基因,命名为Pm PIP1(Gen Bank登录号为KF582038)。此基因c DNA全长序列为1 301 bp,包括867 bp的完整开放阅读框,99 bp的5′末端非翻译区和335 bp的3′末端非翻译区。编码288个氨基酸残基,分子量为30.86 k D,等电点(p I)8.48。Pm PIP1与菠菜Spinacia oleracea(2b5f A)水通道蛋白结构相似。Pm PIP1含有6个跨膜区,具有膜内在蛋白(MIP)家族信号序列、高等植物高度保守序列HINPAVTFG和2个天门冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸(NPA)保守肽段。Pm PIP1基因属质膜内在蛋白(PIPs)亚族,与挪威云杉Picea abies水通道蛋白基因亲缘关系最近,同源性达95%。q RT-PCR表明Pm PIP1受干旱胁迫诱导表达。马尾松Pm PIP1的克隆丰富了植物AQP基因的资料库,同时推测Pm PIP1基因可能参与了马尾松干旱胁迫过程。 展开更多
关键词 植物学 马尾松 通道蛋白 克隆 表达
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蜡梅水通道蛋白基因分子特征分析及植物表达载体的构建 被引量:5
11
作者 张迷 马婧 +3 位作者 马鑫 胡雨晴 眭顺照 李名扬 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期83-88,共6页
在已构建的蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,通过对文库cDNA克隆全长测序,得到了1个蜡梅水通道蛋白基因,命名为CpAQP(GenBank登录号为:GU433105).cDNA全长1154bp,最大ORF810bp,编码269个氨基酸.聚类分析和同源性比对表明,该蛋白基因属... 在已构建的蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,通过对文库cDNA克隆全长测序,得到了1个蜡梅水通道蛋白基因,命名为CpAQP(GenBank登录号为:GU433105).cDNA全长1154bp,最大ORF810bp,编码269个氨基酸.聚类分析和同源性比对表明,该蛋白基因属于TIPs亚族类,具有高度保守的MIP家族结构域.该蛋白具有6个跨膜结构,N-末端和C-末端都在细胞内.利用NetPhos2.0对CpAQP蛋白进行磷酸化位点预测,该蛋白C端丝氨酸磷酸化,可能在植物胁迫和亚细胞定位中起着重要作用.将该基因的cDNA编码序列连接到植物表达载体pCAMBIA2301g中,成功构建了CpAQP基因的植物表达载体pCAM-CpAQP. 展开更多
关键词 蜡梅 通道蛋白 分子特征 植物表达载体
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水稻叶片中水通道蛋白基因OsAQP的表达分析 被引量:5
12
作者 刘悦霞 梁卫红 张利娟 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期545-547,共3页
利用半定量RT-PCR技术,检测了水稻水通道蛋白基因OsAQP在水稻不同生长时期叶片中的表达情况。并利用地高辛标记原位杂交技术,检测了OsAQP在叶组织中的定位。OsAQP在叶片中的表达水平在水稻种子发芽后15d内呈现下降的趋势。该基因的转录... 利用半定量RT-PCR技术,检测了水稻水通道蛋白基因OsAQP在水稻不同生长时期叶片中的表达情况。并利用地高辛标记原位杂交技术,检测了OsAQP在叶组织中的定位。OsAQP在叶片中的表达水平在水稻种子发芽后15d内呈现下降的趋势。该基因的转录本在叶片保卫细胞中的信号最强,叶肉细胞中信号较弱,而在表皮细胞中没有检测到信号,提示该基因可能通过介导保卫细胞水分的快速运输而与气孔功能相关。 展开更多
关键词 通道蛋白基因 反转录聚合酶链式反应 原位杂交 基因表达
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香蕉水通道蛋白基因的克隆与表达分析 被引量:4
13
作者 谢学立 刘菊华 +1 位作者 徐碧玉 金志强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12596-12599,共4页
[目的]更好了解香蕉果实与水分代谢的关系。[方法]依据从抑制差减杂交文库(SSH)中获得的一个cDNA序列,设计5′和3′RACE引物,从香蕉果实中扩增基因5′和3′末端片段,并用RT-PCR的方法探讨该基因在香蕉各组织中的表达情况。[结果]获得一... [目的]更好了解香蕉果实与水分代谢的关系。[方法]依据从抑制差减杂交文库(SSH)中获得的一个cDNA序列,设计5′和3′RACE引物,从香蕉果实中扩增基因5′和3′末端片段,并用RT-PCR的方法探讨该基因在香蕉各组织中的表达情况。[结果]获得一个1 132 bp的水通道蛋白全长基因,命名为MaPIPl;1。MaPIPl;1基因包含861 bp的完整阅读框架,编码的蛋白有6个跨膜结构及aspara-gine-proline-alanine(NPA)和aromatic/arginine 2个保守区。其与水稻水通道蛋白基因OsPIP1;2在氨基酸序列上有94.1%的一致性和97.9%的相似性。且MaPIP1;1在香蕉各器官中均稳定表达。[结论]MaPIPl;1可能与香蕉的水分代谢相关。 展开更多
关键词 香蕉 通道蛋白 表达 半定量PCR
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枣树水通道蛋白基因生物信息学分析及原核表达载体的构建 被引量:5
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作者 张洁 杨大威 +2 位作者 孟玉平 赵玉云 曹秋芬 《山西农业科学》 2010年第1期6-10,共5页
利用生物信息学软件对已获得的枣树水通道蛋白基因cDNA序列ZjPIP2(DDBJ/EMBL/GenBank的注册号为:AB530493)进行了同源性及功能位点等多项参数分析,结果表明,此序列为全长846 bp的开放读码框(ORF),编码281氨基酸,分子量为29.87 kD,理论... 利用生物信息学软件对已获得的枣树水通道蛋白基因cDNA序列ZjPIP2(DDBJ/EMBL/GenBank的注册号为:AB530493)进行了同源性及功能位点等多项参数分析,结果表明,此序列为全长846 bp的开放读码框(ORF),编码281氨基酸,分子量为29.87 kD,理论等电点为8.77;具有膜蛋白(MIP)家族典型的保守氨基酸序列HINPAVTFG和2个NPA保守肽段。序列相似性分析表明,该蛋白与已知的其他12种植物膜蛋白中的水通道蛋白具有极高的同源性,属于水通道蛋白的质膜膜内蛋白PIP2类。三级结构预测表明,其与菠菜(Spinacia oleracea)水通道蛋白(1z98A)有相似的三维结构。以克隆载体pSPORT1携带的枣树水通道蛋白基因cDNA序列为模板,PCR扩增后,经BamHⅠ和SalⅠ消化,与pET28a载体进行重组连接,测序结果显示,其原核表达载体构建成功。此结果为研究枣水通道蛋白基因在植物组织的分布、生物学功能以及可能的活性调节方式奠定了基础。 展开更多
关键词 枣树 通道蛋白 生物信息学分析 原核表达
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陆地棉水通道蛋白GhNIP6.1基因的克隆及表达分析 被引量:3
15
作者 巩元勇 郭书巧 +1 位作者 束红梅 倪万潮 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期1-8,共8页
根据EST拼接的序列设计引物,利用RT-PCR技术,从陆地棉品种苏棉18中克隆获得了一个水通道蛋白基因GhNIP6.1。该基因开放阅读框包含903个核苷酸,编码300个氨基酸,分子量为30.97kD,理论等电点为8.99。GhNIP6.1蛋白的生物信息学分析表明:GhN... 根据EST拼接的序列设计引物,利用RT-PCR技术,从陆地棉品种苏棉18中克隆获得了一个水通道蛋白基因GhNIP6.1。该基因开放阅读框包含903个核苷酸,编码300个氨基酸,分子量为30.97kD,理论等电点为8.99。GhNIP6.1蛋白的生物信息学分析表明:GhNIP6.1含有6个跨膜区,由5个环相连,其中环A、C和E在细胞膜外,环B、D和蛋白的N、C末端都位于细胞膜内,N末端79个氨基酸,C末端18个氨基酸,具有MIP家族典型的保守氨基酸序列;该蛋白的三级结构同拟南芥的AtNIP6.1非常相似,亚细胞定位也同AtNIP6.1一致,可能位于质膜中。进化分析发现,GhNIP6.1蛋白同拟南芥的AtNIP6.1蛋白相似性最高。进一步扩增棉花核基因组获得了2021bp的DNA序列,它包含5个外显子和4个内含子,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则。半定量分析表明,该基因在根、茎和叶中都有表达,其中真叶含量较高,子叶中没有表达。 展开更多
关键词 陆地棉 通道蛋白 GhNIP6.1 表达序列标签
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中国水仙水通道蛋白基因cDNA克隆、序列分析与表达 被引量:3
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作者 林江波 王伟英 +1 位作者 邹晖 戴艺民 《福建农业学报》 CAS 2011年第3期371-376,共6页
以构建的中国水仙不同花期的抑制差减杂交文库(SSH)为基础,采用RACE及RT-PCR技术,分离克隆到1个水通道蛋白基因NtPIP1。此基因包含有一个867 bp完整阅读框架(ORF),编码288个氨基酸,分子量为30.68 kD,理论等电点为8.97。用生物软件对NtP... 以构建的中国水仙不同花期的抑制差减杂交文库(SSH)为基础,采用RACE及RT-PCR技术,分离克隆到1个水通道蛋白基因NtPIP1。此基因包含有一个867 bp完整阅读框架(ORF),编码288个氨基酸,分子量为30.68 kD,理论等电点为8.97。用生物软件对NtPIP1蛋白分析表明:NtPIP1含有6个跨膜区,由5个环相连,其中环A、C和E在细胞膜外,环B、D和蛋白的N、C末端都位于细胞膜内,N末端55个氨基酸,C末端9个氨基酸,具有MIP家族典型的保守氨基酸序列HINPAVTFG和2个NPA保守肽段。三级结构预测表明和菠菜(2b5fA)水通道蛋白结构相似。聚类分析表明:该蛋白与其他12个物种的PIP1类水通道蛋白同源性在91%以上,属于质膜水通道蛋白PIP1类。半定量RT-PCR分析结果表明:NtPIP1基因在盛花期中国水仙雌蕊中的表达量最高。 展开更多
关键词 中国 通道蛋白 基因克隆 蛋白质结构
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小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达 被引量:2
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作者 章杰 江华 +3 位作者 汪汇 方帆 宋艳玲 芦立轩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期199-204,共6页
目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-c... 目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1。体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQP1感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQP1 mRNA和蛋白的表达情况。结果构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1经PCR鉴定和测序正确。慢病毒lentivirus-AQP1感染神经膜细胞后AQP1表达增加(P<0.05)。结论成功构建了小鼠AQP1基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQP1 mRNA和蛋白表达水平增高。 展开更多
关键词 通道蛋白1 表达 慢病毒 神经膜细胞
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西番莲水通道蛋白PePIP2基因克隆及表达分析 被引量:2
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作者 敖茂宏 马伏宁 +4 位作者 彭杨 黄东梅 邢文婷 吴斌 许奕 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期17-25,共9页
西番莲作为新兴的热带果树,在热带农业中具有非常重要的作用,然而干旱、高温等非生物胁迫严重影响其正常生长发育。相关研究表明水通道蛋白(AQP)能够提高植物的抗逆性,本研究以西番莲‘台农’(Passiflora edulia Sims)为实验材料,利用... 西番莲作为新兴的热带果树,在热带农业中具有非常重要的作用,然而干旱、高温等非生物胁迫严重影响其正常生长发育。相关研究表明水通道蛋白(AQP)能够提高植物的抗逆性,本研究以西番莲‘台农’(Passiflora edulia Sims)为实验材料,利用西番莲的基因组数据,通过同源克隆法从西番莲中克隆得到了一个水通道蛋白基因PePIP2,其开放阅读框(open reading frame,ORF)为861 bp,编码286个氨基酸。对其进行生物信息学分析,其分子式为C_(1417)H_(2156)N_(360)O_(373)S_(8),预测分子量为30459.37 Da,等电点为8.84,亚细胞定位于细胞膜上。启动子区域分析显示其含有参与胁迫应答的顺式作用元件。对其进行干旱、高盐、低温、高温胁迫下的表达分析,结果表明:PePIP2能够受到干旱、高温和低温胁迫的诱导表达,其中在土壤含水量为50%,在45℃高温处理4 h和0℃低温处理48 h,其表达量最高。在烟草中进行瞬时表达,在不同时间的干旱胁迫处理下,PePIP2的表达水平也受到不同程度的诱导。该研究结果将为西番莲抗逆机制解析和分子育种等方面打下基础。 展开更多
关键词 西番莲 通道蛋白 克隆 生物信息学 非生物胁迫 表达
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花期前后稻穗水分含量与水通道蛋白基因家族表达关系研究 被引量:2
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作者 赵亚波 李培纲 +2 位作者 陈泽恺 潘伟槐 莫亿伟 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期38-44,共7页
水稻开花期对水分胁迫非常敏感直接影响到结实率,水分供应主要通过水通道蛋白来完成,为了研究花期稻穗的相对含水量与水通道蛋白基因家族表达关系,探讨了花期前后6 d内稻穗相对含水量和水通道蛋白基因家族表达变化情况。结果表明:稻穗... 水稻开花期对水分胁迫非常敏感直接影响到结实率,水分供应主要通过水通道蛋白来完成,为了研究花期稻穗的相对含水量与水通道蛋白基因家族表达关系,探讨了花期前后6 d内稻穗相对含水量和水通道蛋白基因家族表达变化情况。结果表明:稻穗相对含水量呈现出花前最高、开花期当天最低、花后则再出现增加的规律;OsPIPs基因家族中各个基因表达的水平各有不同,其中OsPIP1-1、OsPIP1-2、OsPIP2-1、OsPIP2-4和OsPIP2-7的表达水平较高,而OsPIP2-2、OsPIP2-3和OsPIP2-8这3个基因在花期前后6 d内均没有表达;所有OsTIPs基因均表达,但不同OsTIPs基因表达水平在不同时间点也不同,除了OsTIP1-2和OsTIP3-2的表达量比较低外,其他基因的表达量都非常高;OsNIPs基因家族表达量相对较低,如OsNIP1-2、OsNIP1-4、OsNIP3-2及OsNIP3-3在花期前后均不表达,而OsNIP1-1和OsNIP2-1在开花前后均有表达,并在开花当天表达量较高;OsNIP2-2和OsNIP3-1只在开花当天表达,其他时间点均不表达;OsSIP1-1、OsSIP1-2在花前3 d表达量最大,而OsSIP2-1在开花当天表达量最大,其他时间点略有下降。结果说明,花期前后稻穗内OsTIPs基因家族表达量最大,然后是OsPIPs基因家族,再次是OsSIPs和OsNIPs基因家族,但不同水通道蛋白家族各基因间的表达模式也不同,可能与对水分运输分工差异有关,其中液泡膜水通道蛋白在水稻花期水分运输中的作用可能最大。 展开更多
关键词 稻穗 通道蛋白 相对含 基因表达
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萝卜水通道蛋白基因RsAQP1b的表达模式及功能分析 被引量:1
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作者 周志国 冯雪 《中国蔬菜》 北大核心 2017年第5期33-39,共7页
以萝卜品种白玉春为材料,利用同源克隆的方法获得萝卜水通道蛋白基因Rs AQP1b的编码序列全长,在萝卜苗期干旱胁迫下分析Rs AQP1b基因及蛋白的表达模式;在烟草中表达该基因,研究干旱胁迫下烟草中MDA含量及保护酶的活性变化。结果表明:萝... 以萝卜品种白玉春为材料,利用同源克隆的方法获得萝卜水通道蛋白基因Rs AQP1b的编码序列全长,在萝卜苗期干旱胁迫下分析Rs AQP1b基因及蛋白的表达模式;在烟草中表达该基因,研究干旱胁迫下烟草中MDA含量及保护酶的活性变化。结果表明:萝卜水通道蛋白基因Rs AQP1b的编码序列全长861bp,编码286个氨基酸。制备了Rs AQP1b多克隆抗体,效价在1∶512000以上。RealtimePCR与Westernblot检测表明,干旱胁迫导致Rs AQP1b基因与蛋白的表达水平整体下降。PEG6000干旱处理下的转基因与野生型烟草MDA含量都增加,但是转基因烟草的增加幅度小;随着干旱程度加重,转Rs AQP1b基因烟草中SOD含量呈上升趋势,CAT含量呈先上升后下降趋势,POD含量呈上升趋势,酶活性均高于相应野生型对照。 展开更多
关键词 萝卜 通道蛋白 表达模式 表达
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