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水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
1
作者 刘红娜 王文玉 +5 位作者 张云 杨宇航 郝俊伟 时坤 李健明 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期32-36,共5页
利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L... 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒ns1基因 大肠杆菌 分段表达
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水貂肠炎病毒NS1基因进化分析 被引量：2
2
作者 张海玲 张蕾 +7 位作者 胡博 白雪 赵建军 刘昊 徐淑娟 苗立光 冯卓 闫喜军 《特产研究》 2014年第2期1-5,共5页
采用PCR方法,从辽宁省、吉林省、山东省、河北省采集的32份样品中检测出21份水貂肠炎病毒感染阳性样品。每个地区选取有代表性的样品共计11份进行NS1基因的克隆和测序,并与已知参考毒株进行比对及系统发育分析。结果显示,本次检测的11... 采用PCR方法,从辽宁省、吉林省、山东省、河北省采集的32份样品中检测出21份水貂肠炎病毒感染阳性样品。每个地区选取有代表性的样品共计11份进行NS1基因的克隆和测序,并与已知参考毒株进行比对及系统发育分析。结果显示,本次检测的11个阳性样品的核苷酸序列和氨基酸序列同源性为98.8%~100.0%和98.5%~100%;本次测序序列和国内毒株MEVB基因的核苷酸和氨基酸序列同源性为98.7%~99.9%和98.7%~99.9%;与国外毒株MEVAbashiri基因的核苷酸和氨基酸序列同源性为99.0%~99.5%和98.7%~99.1%。11份阳性样品中水貂肠炎病毒的NS1基因有24个氨基酸位点存在变异。11份阳性样品可划分为3个分支。 展开更多
关键词 水貂肠炎病毒 ns1基因 分子流行病学调查
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猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆及序列分析 被引量：16
3
作者 吴丹 仇华吉 +6 位作者 李昌文 薛强 周艳君 李景鹏 韩孝成 刘慧敏 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期241-244,共4页
猪细小病毒 (Porcineparvovirus,PPV)SY_99株由本室分离 ,提取SY_99株的基因组DNA ,利用PCR扩增出全长NS1基因 ,将该基因克隆到原核表达载体pET2 8a中并测序。结果表明 ,NS1基因全长 1989bp ,编码 6 6 2个氨基酸。氨基酸序列中含有在PP... 猪细小病毒 (Porcineparvovirus,PPV)SY_99株由本室分离 ,提取SY_99株的基因组DNA ,利用PCR扩增出全长NS1基因 ,将该基因克隆到原核表达载体pET2 8a中并测序。结果表明 ,NS1基因全长 1989bp ,编码 6 6 2个氨基酸。氨基酸序列中含有在PPV复制过程中发挥重要作用的保守基序GKRN ,并有 3个潜在的糖基化位点 ,分别位于 35 6～ 35 9、4 4 6～ 4 4 9、5 13～ 5 16位氨基酸处。SY_99株NS1基因与其它PPV毒株NADL2_1、NADL2_2、Kresse株核苷酸同源性分别为 98%、99%、99% ,氨基酸同源性分别为 97%、99%、99%。 展开更多
关键词 猪 细小病毒 ns1基因
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云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析 被引量：11
4
作者 王静林 张海林 +6 位作者 孙肖红 付士红 米竹青 龚正达 翟友刚 唐青 梁国栋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期636-640,共5页
目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征... 目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果从白纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒,分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变,脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT-PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因Ⅰ型的H241株(Y19176)同源性最高,分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因Ⅰ型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。 展开更多
关键词 登革4型病毒 ns1 ns2a 基因型
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乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建 被引量：12
5
作者 徐高原 王祥 +4 位作者 陈焕春 徐晓娟 李自力 何启盖 吴斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期192-197,共6页
设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK NS1。将pUSK NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS 2,通过空斑纯化得到了... 设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK NS1。将pUSK NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS 2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK /gG /NS1+。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 ns1基因重组 伪狂犬病毒 中间转移载体
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水貂阿留申病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达 被引量：8
6
作者 梁冬莹 华育平 曾祥伟 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期39-41,共3页
根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实... 根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 VP2基因 抗原表位 原核表达
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虎源猫泛白细胞减少症病毒VP1、Vp2和NS1基因的克隆与序列分析 被引量：6
7
作者 于亚丽 华育平 +3 位作者 曾祥伟 田丽红 夏咸柱 刘丹 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期83-85,共3页
根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据，设计了3对引物，并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增，将各片段克隆至pMD18-T载体，经PCR鉴定后进行了序列测定和分析... 根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据，设计了3对引物，并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增，将各片段克隆至pMD18-T载体，经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示：FPV-HU与GenBank上公布的FPV、CPV和MEV毒株相比，核苷酸序列同源率VP1为98.8％-99.8％，VP2为98.1％-99.4％，NS1为98.6％-99.7％。VP1氨基酸同源率为97.6％-99.2％，VP2、NS1氨基酸同源率与其核苷酸同源率相同。并且VP1、VP2和NS1上分别有4、3和9处氨基酸发生变异。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP1 VP2 ns1 基因 克隆 序列分析
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猪细小病毒非结构蛋白NS1基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测 被引量：8
8
作者 刘建 汤德元 +6 位作者 罗险峰 曾智勇 李春燕 甘振磊 王凤 郝飞 王洪光 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期8-13,共6页
根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株序列,利用Oligo 6.0软件设计1对扩增NS1全基因的特异性引物,对从贵州省安顺地区检测到的PPV的NS1基因进行扩增、克隆、测序、序列分析和蛋白质结构预测分析。测序结果表明,扩增的目的基因... 根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株序列,利用Oligo 6.0软件设计1对扩增NS1全基因的特异性引物,对从贵州省安顺地区检测到的PPV的NS1基因进行扩增、克隆、测序、序列分析和蛋白质结构预测分析。测序结果表明,扩增的目的基因长度为1986bp,共编码659个氨基酸,其中NS1基因的1287、1288和1298位碱基发生了缺失,导致429、430和433位氨基酸发生缺失。系统发生树结果表明,本试验测序的NS1基因与NADL-2弱毒株处在同一进化分支;氨基酸同源性与NADL-2弱毒株和Kresse毒株最高,均为98.6%。蛋白质结构预测分析结果表明,非结构蛋白NS1的分子质量为75269.76u,理论等电点pI为7.25,不稳定系数为41.57,推测其为不稳定蛋白质;脂肪指数为73.58,总体平均亲水性为-0.565,推测该蛋白质是一种亲水性蛋白质;该蛋白质含有丰富的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,柔性区域较多,呈连续分布;非结构蛋白NS1无跨膜区和信号肽;预测非结构蛋白NS1含有3个N-糖基化位点、3个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、22个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、8个N-肉豆蔻酰化位点、1个酰胺化位点及1个ATP/GTP结合位点基序A(P-环);该蛋白质抗原表位较多,存在10个主要的抗原表位。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ns1基因 克隆 序列分析 蛋白质结构预测
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猪细小病毒(PPV)SC1株非结构蛋白NS_1基因的克隆和序列分析 被引量：7
9
作者 殷华平 郭万柱 +1 位作者 徐志文 罗燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期504-508,共5页
本文根据GenBank中PPV NADL-2株病毒基因组序列用Oligo6.0设计了一对引物,以抽提的PPV-SC1 RF-DNA为模板,通过PCR扩增出长约2.2kb的片段,将其插入克隆载体质粒pMD 18-T的EcoRV酶切位点处,构建了重组质粒pPNS1并测序.密码子偏向性分析结... 本文根据GenBank中PPV NADL-2株病毒基因组序列用Oligo6.0设计了一对引物,以抽提的PPV-SC1 RF-DNA为模板,通过PCR扩增出长约2.2kb的片段,将其插入克隆载体质粒pMD 18-T的EcoRV酶切位点处,构建了重组质粒pPNS1并测序.密码子偏向性分析结果表明PPV-SC1 NS1基因在同一氨基酸的不同密码子的选择上存在一定的偏向性,主要是以A结尾的密码子;用Bioedit和swiss TMPRED软件预测PPV-SC1 NS1的跨膜区,并没有得到有显著意义的跨膜区的存在;根据基于motif数据库的结构域预测,PPV-SC1 NS1的第393～415位氨基酸残基存在潜在的ATP/GTP结合位点,该蛋白还存在16个蛋白激酶磷酸化位点,21个酪蛋白激酶2磷酸化位点,3个cAMP-/cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点,PPV-SC1 NS1蛋白与POX-D5(痘病毒D5蛋白)具有一致的保守结构域,推测NS1可能与POX-D5有类似的功能. 展开更多
关键词 猪细小病毒 非结构蛋白 ns1基因 生物信息学
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番鸭细小病毒NS1基因的克隆与原核表达 被引量：7
10
作者 董嘉文 孙敏华 +3 位作者 李林林 袁建丰 邝瑞欢 胡奇林 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期33-37,共5页
本研究利用PCR方法扩增番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MPV)非结构蛋白NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组表达质粒pET32a-NS1。将其转化受体菌E.coli Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western b... 本研究利用PCR方法扩增番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MPV)非结构蛋白NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组表达质粒pET32a-NS1。将其转化受体菌E.coli Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,NS1基因在大肠杆菌中得到了表达,并且可与抗MPV的多克隆抗体发生特异性反应。MPV NS1基因的成功表达为研制MPV的诊断试剂盒、基因工程疫苗等奠定了基础。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 ns1基因 克隆 表达
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鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达 被引量：5
11
作者 王君伟 李勐 +3 位作者 马波 布日额 刘宝全 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1... 本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1株 NS1基因全长 1884 bp,编码 6 2 7个氨基酸 ,与国外已发表的 B株核苷酸序列同源性为 98.15 %。同时将该目的基因正向插入到 GST融合蛋白原核表达载体 PGEX- 6 P- 1的 Bam H 多克隆位点 ,构建了 GPV NS1的原核表达载体 ,成功的表达了约 97KD的 NS1融合蛋白。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 ns1基因 基因克隆 基因表达 原核表达 小鹅瘟
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猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达 被引量：5
12
作者 谢金文 沈志强 +3 位作者 王金良 任艳玲 管宇 苗立中 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2679-2681,共3页
[目的]为建立猪细小病毒的快速诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上猪细小病毒基因组序列和原核表达质粒pET30a（＋）多克隆位点序列设计1对引物,应用PCR技术扩增出猪细小病毒SD1株NS1基因全序列,对阳性重组质粒进行测序和同源... [目的]为建立猪细小病毒的快速诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上猪细小病毒基因组序列和原核表达质粒pET30a（＋）多克隆位点序列设计1对引物,应用PCR技术扩增出猪细小病毒SD1株NS1基因全序列,对阳性重组质粒进行测序和同源性比较。构建原核表达重组质粒pET 30a/NS1,并在大肠杆菌中进行诱导表达。[结果]通过PCR扩增获得2 208 bp目的片段。所克隆NS1基因与已报道的PPV相应基因的核苷酸同源性为97.3%-99.4%,表明NS1基因具有高度保守性,但在偏3′端连续缺失12个碱基。所克隆的PPVNS1基因在原核细胞中成功表达,其表达产物主要以包涵体形式存在。[结论]SDS-PAGE检测结果表明PPVNS1蛋白的分子量为86 kD。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ns1基因 克隆 原核表达
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猪细小病毒GZ株NS1基因主要抗原区的克隆与序列分析 被引量：3
13
作者 刘建 汤德元 +7 位作者 李春燕 曾智勇 罗险峰 甘振磊 王凤 郝飞 姜德荣 王洪光 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第9期129-132,共4页
为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计... 为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计1对扩增PPVNS1基因主要抗原区的特异性引物，扩增、克隆和分析了分离毒株的NS1基因主要抗原区序列。结果表明：从送检的疑似猪细小病毒感染病料中成功分离出1株PPV贵州毒株，并将其命名为Gz株；扩增的NS1基因主要抗原区序列长度为1131bp；遗传进化分析表明，PPVGZ株与国内分离的GX株、N株、SR-1株、PPV2010株、s-1株和YL株的核苷酸序列同源性达到98．3％以上，推导的氨基酸序列的同源性为97．9％～100％，表明NS1基因序列比较保守，PPV的NS1基因主要抗原区基因克隆测序可以作为诊断猪细小病毒感染的依据。 展开更多
关键词 猪细小病毒GZ株 ns1基因 抗原区 克隆
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猪乙脑病毒WHe株的PrM-E、NS1、E-NS2A基因的克隆及序列测定 被引量：3
14
作者 乔宪凤 熊东海 +3 位作者 郑新民 徐涤平 赵浩斌 魏庆信 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期191-194,共4页
本文通过RT_PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约 1.14kb)、prM_E(约 2 .1kb)、E_NS1_NS2A (约 3.0kb) ,并将NS1、E_NS1_NS2A、PrM_E基因克隆、测序。与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析 ,发现WHe株与其他 12种典型的... 本文通过RT_PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约 1.14kb)、prM_E(约 2 .1kb)、E_NS1_NS2A (约 3.0kb) ,并将NS1、E_NS1_NS2A、PrM_E基因克隆、测序。与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析 ,发现WHe株与其他 12种典型的JEV强毒株的同源性在 88.3%～ 99.4 %之间。WHe株与K94P0 5株的同源性最低 (88.3% ) ,与P3株的同源性最高 (99.4 % ) ,可认为WHe株是由P3株衍生而来的。在JEV基因组 5’端 389～ 3910的长 35 2 2nt的决定JEV抗原性的C_prM_E_NS1_NS2A区中 ,WHe株与P3株仅有 2 1个碱基不同 ,其中的 14个单碱基突变为同义突变 ,另外7个为错义突变 ,导致相应的氨基酸序列 (1173个 )中的 6个氨基酸发生了变异 ,其中的 5个氨基酸变异出现在含有各关键的抗体中和决定簇的E蛋白内 ,另一个位于NS1蛋白内。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒 ns1、prM-E、E-ns1-ns2A基因 基因克隆 核酸序列
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猪细小病毒疫苗株NS1基因克隆及生物信息学分析 被引量：4
15
作者 李兴玉 李金海 +7 位作者 林毅 曹冶 罗丹丹 廖党金 魏甬 李江凌 于吉锋 张先惠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期21-26,共6页
为进一步开展猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)NS1蛋白功能研究,根据GenBank登录的PPV参考株NADL-2(登录号:NC001718)的NS1基因序列设计1对特异性引物,采用PCR技术扩增PPV疫苗株NS1基因,将PCR扩增产物克隆入pTA2载体构建重组质粒pTA2... 为进一步开展猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)NS1蛋白功能研究,根据GenBank登录的PPV参考株NADL-2(登录号:NC001718)的NS1基因序列设计1对特异性引物,采用PCR技术扩增PPV疫苗株NS1基因,将PCR扩增产物克隆入pTA2载体构建重组质粒pTA2-NS1,并进行测序鉴定。测序结果显示,构建的pTA2-NS1质粒含有一个开放阅读框(ORF),全长1989bp,共编码662个氨基酸,与GenBank登录的PPV参考株NADL-2、Kresse株的NS1基因的核苷酸同源性分别为99.85%和99.65%,氨基酸同源性分别为99.70%和99.70%。上述结果表明试验成功构建了含有PPV NS1基因的重组质粒pTA2-NS1。应用DNAStar软件及在线ProtScale、SignalP 4.1、TMHMM、Scansite、PSORTⅡ等生物信息学软件对NS1基因及其编码蛋白进行生物信息学分析,结果显示NS1蛋白分子质量为75.7ku,等电点PI为6.82,是弱酸性蛋白;NS1蛋白不含信号肽序列,无跨膜区,为可溶性蛋白,主要定位于细胞核内,T199、Y309、T338、T512、S631、T635为其潜在磷酸化位点。以上研究为进行PPV NS1蛋白表达,进一步开展NS1蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ns1基因 生物信息学分析
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丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：2
16
作者 郑铁龙 成军 +2 位作者 洪源 李晓光 张延峰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期59-61,共3页
目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,... 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达。亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价。结果以pET32a(+)-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高。Western blot证实其具有良好的抗原性。用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价>1∶512000。结论成功构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 ns5ATP1基因 原核表达
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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达 被引量：2
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作者 刘波 薛仁宇 +1 位作者 曹广力 贡成良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1067-1070,共4页
目的构建大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因分别在大肠杆菌和昆虫细胞中进行表达,表达产物用Western blot进行检测分析。方法酶切含有NS1基因的质粒pUC-NS1,分别克隆进大肠杆菌表达... 目的构建大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因分别在大肠杆菌和昆虫细胞中进行表达,表达产物用Western blot进行检测分析。方法酶切含有NS1基因的质粒pUC-NS1,分别克隆进大肠杆菌表达载体pET-28a(+)和杆状病毒转移载体pFastBac HT A中,分别获得表达载体pET-NS1和pFast-NS1。将pET-NS1转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;将pFast-NS1转化DH10Bac感受态细胞,提取重组Bac-NS1DNA,以M13为通用引物作PCR鉴定,阳性Bac-NS1用脂质体转染sf9细胞,72h后收集感染细胞。大肠杆菌表达产物和细胞表达产物分别裂解后作SDS-PAGE和Western blot分析。结果成功构建了大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,大肠杆菌和昆虫细胞中表达的融合蛋白Western blot都能检测到特异性条带。结论NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中得到成功表达,为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1 ns1基因 表达
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西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定 被引量：2
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作者 马健男 杨涛 +7 位作者 王群 张维军 徐青元 田野 林燕 宋红梅 步志高 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期592-595,共4页
为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约... 为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%。利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,western blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 ns1基因 原核表达
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禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3
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作者 孙明 赵铁柱 +5 位作者 王传彬 李纯玲 丁银巧 王宏伟 陈西钊 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期208-211,共4页
目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载... 目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。 展开更多
关键词 原核表达载体 蛋白功能 ns1基因 感染 大肠杆菌 AIV 反应原性 H5N1亚型 禽流感病毒 阳性血清
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鸭坦布苏病毒NS1基因的克隆及原核表达 被引量：2
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作者 郭建伟 董嘉文 +4 位作者 孙敏华 李林林 袁建峰 吴玄光 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期71-73,共3页
为原核表达鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)NS1重组蛋白,本研究通过RT-PCR方法扩增NS1基因,将其亚克隆至pET32a(+)载体中构建重组表达质粒pET32a-NS1。将其转化大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导表达了约59 ku的重组蛋白。Western b... 为原核表达鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)NS1重组蛋白,本研究通过RT-PCR方法扩增NS1基因,将其亚克隆至pET32a(+)载体中构建重组表达质粒pET32a-NS1。将其转化大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导表达了约59 ku的重组蛋白。Western blot分析表明,该重组蛋白可以与DTMUV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 ns1基因 克隆与表达
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