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水貂细小病毒NS1与VP2蛋白的原核表达及免疫原性分析 被引量:7
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作者 王洋 牛登云 +5 位作者 刘昊 胡博 马凡舒 鲁荣光 吕爽 闫喜军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期1630-1634,共5页
为了比较VP2和NS1两种蛋白的免疫原性,选择免疫原性较好的蛋白进行亚单位疫苗制备。本试验分别扩增了水貂细小病毒(mink enteritis virus,MEV)NS1与VP2基因,连接pET-32a表达载体并进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分... 为了比较VP2和NS1两种蛋白的免疫原性,选择免疫原性较好的蛋白进行亚单位疫苗制备。本试验分别扩增了水貂细小病毒(mink enteritis virus,MEV)NS1与VP2基因,连接pET-32a表达载体并进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以His-Bind亲和层析柱纯化目的蛋白,将纯化后的蛋白免疫小鼠,分析目的蛋白的免疫原性。经SDS-PAGE与Western blotting鉴定,表明NS1与VP2蛋白大小分别为83和67ku,且均具有生物学活性;免疫小鼠后,目的蛋白NS1和VP2均可诱导小鼠产生抗MEV特异性抗体,且VP2蛋白诱导小鼠产生的抗体滴度要高于NS1蛋白。与NS1蛋白比较,VP2蛋白更适合亚单位疫苗的制备。 展开更多
关键词 水貂细小病毒 原核表达 重组蛋白
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水貂细小病毒VP2基因的可溶性表达优化及包涵体蛋白复性研究 被引量:6
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作者 朱翔宇 蔡熙姮 +8 位作者 史宁 王洋 由海波 鲁荣光 闫喜军 侯金利 李滋睿 胡博 徐超 《动物医学进展》 北大核心 2020年第6期1-6,共6页
为探究水貂细小病毒(MEV)VP2蛋白的结构和功能,对MEV VP2蛋白进行原核表达并纯化,用ELISA初步评价重组蛋白在血清学诊断中的价值。通过大肠埃希菌表达外源基因的方法构建MEV VP2原核表达体系,经诱导表达得到以包涵体形式存在的目的蛋白... 为探究水貂细小病毒(MEV)VP2蛋白的结构和功能,对MEV VP2蛋白进行原核表达并纯化,用ELISA初步评价重组蛋白在血清学诊断中的价值。通过大肠埃希菌表达外源基因的方法构建MEV VP2原核表达体系,经诱导表达得到以包涵体形式存在的目的蛋白,对蛋白进行纯化、透析复性并鉴定;加入分子伴侣pTf16质粒构建共表达系统,优化表达条件以提升可溶性目的蛋白的表达量,对表达产物进行纯化及鉴定。将纯化后的可溶性蛋白、复性后的包涵体蛋白及纯化后的全病毒蛋白作为抗原包被酶标板,用间接ELISA方法对MEV标准阴、阳性血清进行检测,初步对比评价3种抗原的血清学诊断价值。结果表明,经过双酶切和测序鉴定,成功构建重组蛋白原核表达载体;重组VP2蛋白的分子质量约为67 ku;优化诱导温度和诱导试剂浓度未能解决包涵体表达问题;构建了共表达系统,优化表达条件后可溶性目的蛋白的表达量得到明显提高;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果表明,两种重组蛋白皆具有良好的反应原性;间接ELISA结果表明可溶性表达蛋白更适合作为MEV的候选诊断抗原。通过分子伴侣共表达和包涵体蛋白复性的方法获得了大量有活性的目的蛋白,为建立水貂细小病毒血清学诊断方法和制备MEV病毒样颗粒(VLPs)及VP2蛋白多克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 水貂细小病毒 VP2基因原核表达 可溶性蛋白 包涵体复性 血清学评价
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貉细小病毒与犬细小病毒和水貂细小病毒的抗原差异性分析
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作者 苏玮玮 张秀华 +3 位作者 和彦良 陈涛 闫喜军 彭大新 《特产研究》 2022年第6期29-34,共6页
为了确定貉细小病毒(RDPV)与同属的犬细小病毒(CPV)和水貂细小病毒(MEV)之间的抗原差异性。用RDPV、CPV和MEV 3种阳性血清分别与RDPV(HB01株)、CPV(BJ株)和MEV(GL株)3种病毒测定中和抗体效价;另外,将实验室制备的RDPV、CPV及MEV灭活疫... 为了确定貉细小病毒(RDPV)与同属的犬细小病毒(CPV)和水貂细小病毒(MEV)之间的抗原差异性。用RDPV、CPV和MEV 3种阳性血清分别与RDPV(HB01株)、CPV(BJ株)和MEV(GL株)3种病毒测定中和抗体效价;另外,将实验室制备的RDPV、CPV及MEV灭活疫苗分别免疫5只健康易感貉,同时设立5只作为未免疫对照组。免疫后第21天所有实验貉攻击RDPV强毒测定保护率。中和试验显示,3种阳性血清对RDPV、CPV和MEV的中和抗体效价差异均不超过1倍(1:512~1:1280)。免疫保护试验中,HB01株免疫组保护率为5/5;BJ株免疫组保护率为3/5;GL株免疫组保护率为2/5;对照组5/5发病。RDPV、CPV和MEV存在抗原性差异性,HB01株免疫貉针对RDPV攻毒可以提供完全保护。 展开更多
关键词 细小病毒 HB01株 细小病毒 水貂细小病毒 抗原性
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水貂肠炎细小病毒的分离鉴定及其VP2基因的序列分析 被引量:2
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作者 张庆明 王玉平 +2 位作者 李莹莹 闫新武 雷连成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期26-30,共5页
本试验从疑似细小病毒感染的病死水貂中分离到1株病毒。经PCR鉴定、细胞培养、蛋白质电泳鉴定最终确定为水貂肠炎细小病毒(MEV),命名为MEV-WFD。对该分离病毒的衣壳蛋白VP2基因进行克隆测序分析,结果表明此病毒VP2基因3处碱基发生点突变... 本试验从疑似细小病毒感染的病死水貂中分离到1株病毒。经PCR鉴定、细胞培养、蛋白质电泳鉴定最终确定为水貂肠炎细小病毒(MEV),命名为MEV-WFD。对该分离病毒的衣壳蛋白VP2基因进行克隆测序分析,结果表明此病毒VP2基因3处碱基发生点突变,其中一处的突变导致第328处氨基酸残基由疏水性丙氨酸(Ala)变为亲水性苏氨酸(Thr)。将此株病毒VP2基因与GenBank上公布的所有MEV的VP2基因碱基序列进行同源性比较及进化树分析,结果表明该病毒与ZYL-1、MEV/LN/-10和Manzhouli的VP2基因同源率最高,为99.8%;进化树构建结果表明,该病毒与6株已公布的病毒属于同一进化分支。 展开更多
关键词 水貂细小病毒 分离鉴定 序列分析
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水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析 被引量:5
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作者 闫喜军 张海玲 +5 位作者 柴秀丽 吴威 易立 王凤雪 邵西群 罗国良 《特产研究》 2007年第4期1-3,6,共4页
对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基... 对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%~99.4%和98.6%~99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 水貂肠炎细小病毒 VP2基因 序列分析
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二乙烯亚胺对水貂肠炎细小病毒灭活效果的研究 被引量:2
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作者 罗国良 王振军 +5 位作者 冯二凯 易立 郭利 叶明 张淼 程悦宁 《特产研究》 2018年第3期23-26,共4页
为研究二乙烯亚胺(BEI)对水貂肠炎细小病毒的灭活效果,采用BEI终浓度为0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005mol/L,灭活温度为30℃,灭活时间为24h、48h、72h条件下,对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验。通过F81细胞传代观察细胞病... 为研究二乙烯亚胺(BEI)对水貂肠炎细小病毒的灭活效果,采用BEI终浓度为0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005mol/L,灭活温度为30℃,灭活时间为24h、48h、72h条件下,对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验。通过F81细胞传代观察细胞病变和血凝试验检测灭活效果;用水貂检验BEI灭活水貂肠炎细小病毒所制疫苗的安全性,通过检测接种水貂的血凝抑制抗体,评价BEI灭活细小病毒所制疫苗的免疫效果,同时与甲醛灭活的疫苗进行免疫效果比较。结果表明,BEI终浓度0.002mol/L、30℃24h是灭活水貂肠炎细小病毒的适宜参数,BEI灭活工艺制备的水貂肠炎细小病毒灭活疫苗具有良好的安全性,BEI灭活工艺与甲醛灭活工艺的免疫抗体水平差异不显著(P>0.05)。本研究为水貂肠炎细小病毒灭活工艺的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 水貂肠炎细小病毒 二乙烯亚胺 灭活效果
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