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重组水貂生长激素pVAX1-mGH及其在小鼠肌肉组织中表达的研究 被引量:1
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作者 马凤龙 龙英娜 +3 位作者 乔彦良 刘焕奇 王明志 刘焕珍 《动物医学进展》 CSCD 2008年第6期11-14,共4页
将化学合成的水貂生长激素基因mGH插入载体pVAX1,将经过PCR、酶切鉴定、测序正确的pVAX1-mGH重组质粒,注射到小鼠后肢的股四头肌,空白对照组注射PBS,于注射后5、10、20、40、60d,眼球采血,取注射部位的肌肉组织进行免疫组化研究,结果证... 将化学合成的水貂生长激素基因mGH插入载体pVAX1,将经过PCR、酶切鉴定、测序正确的pVAX1-mGH重组质粒,注射到小鼠后肢的股四头肌,空白对照组注射PBS,于注射后5、10、20、40、60d,眼球采血,取注射部位的肌肉组织进行免疫组化研究,结果证明在胞浆中有特异性蛋白表达。 展开更多
关键词 水貂生长激素基因 载体pVAX1 小鼠 股四头肌 免疫组化
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水貂生长激素cDNA的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 尚丹 刘维全 +4 位作者 孙绍光 王吉贵 李全 张丽 朱宝成 《特产研究》 2005年第2期1-4,共4页
从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA。PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α。在含X-galI、PTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,... 从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA。PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α。在含X-galI、PTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明,RT-PCR扩增出的2个cDNA片段碱基数分别为713bp和780bp,用DNAsis2.5软件进行分析表明,此扩增序列与GenBank中发表的水貂生长激素cDNA100%相同。前体肽编码区由651bp组成,编码216个氨基酸,包括长度为29个氨基酸的信号肽;成熟肽的开放阅读框全长564bp,编码187个氨基酸,分子量约为21kDa。通过Blast比对,分析了与人、马、牛、猪、山羊、绵羊、猫、狗、大鼠和小鼠生长激素核苷酸序列的同源性。 展开更多
关键词 水貂 生长激素CDNA 克隆 序列分析
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水貂生长激素受体cDNA克隆与序列分析 被引量:2
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作者 荣敏 王雷 +4 位作者 吴琼 李一清 徐佳萍 邢秀梅 杨福合 《特产研究》 2014年第1期1-4,共4页
根据已报道的物种GHR基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从水貂肝脏组织总RNA中扩增出GHR基因的cDNA序列,并进行序列分析。结果表明,RT-PCR扩增出的cDNA片段为826bp,利用邻接法构建了分子系统进化树。
关键词 水貂 生长激素受体 反转录聚合酶链式反应 序列分析
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生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究
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作者 荣敏 王洪亮 +3 位作者 涂剑锋 杨颖 徐佳萍 邢秀梅 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第7期13-17,共5页
为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,... 为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P<0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P<0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P<0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。 展开更多
关键词 水貂 生长激素受体(GHR) 不同日龄 不同组织 基因表达
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水貂生长激素基因重组腺病毒的构建 被引量:1
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作者 王友东 张乐萃 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2010年第2期144-149,共6页
本研究利用AdEasyTMXL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒。利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH。pShuttle-CMV-mGH经PmeⅠ酶切线性化后转化至BJ5183... 本研究利用AdEasyTMXL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒。利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH。pShuttle-CMV-mGH经PmeⅠ酶切线性化后转化至BJ5183感受态大肠杆菌内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-mGH。重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞。PacⅠ酶切结果表明质粒重组成功。转染第10天,细胞出现圆缩、死亡、漂浮等典型病变,透射电镜检测到重组病毒。TCID50测得第2代重组病毒的滴度达到10-7.89/0.1ml。RT-PCR结果证实,重组病毒能够正确转录目的基因。结果表明本试验成功构建了水貂生长激素基因重组腺病毒,为水貂促生长的研究提供了新的科学手段。 展开更多
关键词 水貂 生长激素基因 重组腺病毒
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水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备
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作者 苏俊 刘曼 +2 位作者 王吉贵 孙燕 刘维全 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期866-872,共7页
本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表... 本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。 展开更多
关键词 水貂生长激素(mgh) 原核表达 Ni-NTA树脂 质谱分析 兔抗mgh血清
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GH-IGF-Ⅰ生长轴及其在水貂中的研究 被引量:5
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作者 荣敏 吴琼 +3 位作者 王雷 邢秀梅 王桂武 杨福合 《特产研究》 2011年第2期42-46,共5页
生长激素-胰岛素样生长因子Ⅰ(GH-IGF-Ⅰ)轴是动物生长发育的主要调控因素。本文概述了GH、GHRI、GF-Ⅰ基因的生物学功能、基因结构及其在水貂上的研究。
关键词 生长 生长激素 生长激素受体 胰岛素样生长因子Ⅰ 水貂
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埋植褪黑激素对促进水貂毛皮早熟的试验 被引量:9
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作者 刘念海 谢群恩 《上海畜牧兽医通讯》 2009年第3期33-33,共1页
关键词 褪黑激素 试验总结 毛皮 水貂 早熟 埋植 推广使用 生长激素
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