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重组水貂生长激素pVAX1-mGH及其在小鼠肌肉组织中表达的研究
被引量:
1
1
作者
马凤龙
龙英娜
+3 位作者
乔彦良
刘焕奇
王明志
刘焕珍
《动物医学进展》
CSCD
2008年第6期11-14,共4页
将化学合成的水貂生长激素基因mGH插入载体pVAX1,将经过PCR、酶切鉴定、测序正确的pVAX1-mGH重组质粒,注射到小鼠后肢的股四头肌,空白对照组注射PBS,于注射后5、10、20、40、60d,眼球采血,取注射部位的肌肉组织进行免疫组化研究,结果证...
将化学合成的水貂生长激素基因mGH插入载体pVAX1,将经过PCR、酶切鉴定、测序正确的pVAX1-mGH重组质粒,注射到小鼠后肢的股四头肌,空白对照组注射PBS,于注射后5、10、20、40、60d,眼球采血,取注射部位的肌肉组织进行免疫组化研究,结果证明在胞浆中有特异性蛋白表达。
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关键词
水貂
生长激素
基因
载体pVAX1
小鼠
股四头肌
免疫组化
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职称材料
水貂生长激素cDNA的克隆与序列分析
被引量:
3
2
作者
尚丹
刘维全
+4 位作者
孙绍光
王吉贵
李全
张丽
朱宝成
《特产研究》
2005年第2期1-4,共4页
从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA。PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α。在含X-galI、PTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,...
从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA。PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α。在含X-galI、PTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明,RT-PCR扩增出的2个cDNA片段碱基数分别为713bp和780bp,用DNAsis2.5软件进行分析表明,此扩增序列与GenBank中发表的水貂生长激素cDNA100%相同。前体肽编码区由651bp组成,编码216个氨基酸,包括长度为29个氨基酸的信号肽;成熟肽的开放阅读框全长564bp,编码187个氨基酸,分子量约为21kDa。通过Blast比对,分析了与人、马、牛、猪、山羊、绵羊、猫、狗、大鼠和小鼠生长激素核苷酸序列的同源性。
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关键词
水貂
生长激素
CDNA
克隆
序列分析
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职称材料
水貂生长激素受体cDNA克隆与序列分析
被引量:
2
3
作者
荣敏
王雷
+4 位作者
吴琼
李一清
徐佳萍
邢秀梅
杨福合
《特产研究》
2014年第1期1-4,共4页
根据已报道的物种GHR基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从水貂肝脏组织总RNA中扩增出GHR基因的cDNA序列,并进行序列分析。结果表明,RT-PCR扩增出的cDNA片段为826bp,利用邻接法构建了分子系统进化树。
关键词
水貂
生长激素
受体
反转录聚合酶链式反应
序列分析
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职称材料
生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究
4
作者
荣敏
王洪亮
+3 位作者
涂剑锋
杨颖
徐佳萍
邢秀梅
《家畜生态学报》
北大核心
2019年第7期13-17,共5页
为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,...
为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P<0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P<0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P<0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。
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关键词
水貂
生长激素
受体(GHR)
不同日龄
不同组织
基因表达
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职称材料
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建
被引量:
1
5
作者
王友东
张乐萃
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2010年第2期144-149,共6页
本研究利用AdEasyTMXL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒。利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH。pShuttle-CMV-mGH经PmeⅠ酶切线性化后转化至BJ5183...
本研究利用AdEasyTMXL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒。利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH。pShuttle-CMV-mGH经PmeⅠ酶切线性化后转化至BJ5183感受态大肠杆菌内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-mGH。重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞。PacⅠ酶切结果表明质粒重组成功。转染第10天,细胞出现圆缩、死亡、漂浮等典型病变,透射电镜检测到重组病毒。TCID50测得第2代重组病毒的滴度达到10-7.89/0.1ml。RT-PCR结果证实,重组病毒能够正确转录目的基因。结果表明本试验成功构建了水貂生长激素基因重组腺病毒,为水貂促生长的研究提供了新的科学手段。
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关键词
水貂
生长激素
基因
重组腺病毒
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职称材料
水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备
6
作者
苏俊
刘曼
+2 位作者
王吉贵
孙燕
刘维全
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第4期866-872,共7页
本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表...
本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。
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关键词
水貂
生长激素
(
mgh
)
原核表达
Ni-NTA树脂
质谱分析
兔抗
mgh
血清
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职称材料
GH-IGF-Ⅰ生长轴及其在水貂中的研究
被引量:
5
7
作者
荣敏
吴琼
+3 位作者
王雷
邢秀梅
王桂武
杨福合
《特产研究》
2011年第2期42-46,共5页
生长激素-胰岛素样生长因子Ⅰ(GH-IGF-Ⅰ)轴是动物生长发育的主要调控因素。本文概述了GH、GHRI、GF-Ⅰ基因的生物学功能、基因结构及其在水貂上的研究。
关键词
生长
轴
生长激素
生长激素
受体
胰岛素样
生长
因子Ⅰ
水貂
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职称材料
埋植褪黑激素对促进水貂毛皮早熟的试验
被引量:
9
8
作者
刘念海
谢群恩
《上海畜牧兽医通讯》
2009年第3期33-33,共1页
关键词
褪黑
激素
试验总结
毛皮
水貂
早熟
埋植
推广使用
生长激素
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职称材料
题名
重组水貂生长激素pVAX1-mGH及其在小鼠肌肉组织中表达的研究
被引量:
1
1
作者
马凤龙
龙英娜
乔彦良
刘焕奇
王明志
刘焕珍
机构
山东信得科技股份有限公司
青岛农业大学动物科技学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
2008年第6期11-14,共4页
基金
山东信得科技股份有限公司自主课题
文摘
将化学合成的水貂生长激素基因mGH插入载体pVAX1,将经过PCR、酶切鉴定、测序正确的pVAX1-mGH重组质粒,注射到小鼠后肢的股四头肌,空白对照组注射PBS,于注射后5、10、20、40、60d,眼球采血,取注射部位的肌肉组织进行免疫组化研究,结果证明在胞浆中有特异性蛋白表达。
关键词
水貂
生长激素
基因
载体pVAX1
小鼠
股四头肌
免疫组化
Keywords
Mustela vision growth hormone gene
pVAX1 vector
mouse
quadriceps femoris
immunohistochemistry
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
水貂生长激素cDNA的克隆与序列分析
被引量:
3
2
作者
尚丹
刘维全
孙绍光
王吉贵
李全
张丽
朱宝成
机构
河北大学生命科学学院
中国农业大学生物学院
出处
《特产研究》
2005年第2期1-4,共4页
文摘
从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA。PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α。在含X-galI、PTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明,RT-PCR扩增出的2个cDNA片段碱基数分别为713bp和780bp,用DNAsis2.5软件进行分析表明,此扩增序列与GenBank中发表的水貂生长激素cDNA100%相同。前体肽编码区由651bp组成,编码216个氨基酸,包括长度为29个氨基酸的信号肽;成熟肽的开放阅读框全长564bp,编码187个氨基酸,分子量约为21kDa。通过Blast比对,分析了与人、马、牛、猪、山羊、绵羊、猫、狗、大鼠和小鼠生长激素核苷酸序列的同源性。
关键词
水貂
生长激素
CDNA
克隆
序列分析
Keywords
mink
growth hormone cDNA
cloning
sequence analysis
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
S865.22 [农业科学—野生动物驯养]
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职称材料
题名
水貂生长激素受体cDNA克隆与序列分析
被引量:
2
3
作者
荣敏
王雷
吴琼
李一清
徐佳萍
邢秀梅
杨福合
机构
中国农业科学院特产研究所吉林省省部共建特种经济动物分子生物学国家重点实验室
出处
《特产研究》
2014年第1期1-4,共4页
基金
公益性行业(农业)科研专项经费(200903014)
吉林市科技支撑计划(201162513)
文摘
根据已报道的物种GHR基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从水貂肝脏组织总RNA中扩增出GHR基因的cDNA序列,并进行序列分析。结果表明,RT-PCR扩增出的cDNA片段为826bp,利用邻接法构建了分子系统进化树。
关键词
水貂
生长激素
受体
反转录聚合酶链式反应
序列分析
Keywords
Mink
growth hormone receptor
RT - PCR
sequence analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究
4
作者
荣敏
王洪亮
涂剑锋
杨颖
徐佳萍
邢秀梅
机构
中国农业科学院特产研究所农业部特种经济动物遗传育种与繁殖重点实验室
出处
《家畜生态学报》
北大核心
2019年第7期13-17,共5页
基金
吉林省科技厅(20150101113JC)
国家自然科学基金(31501958)
中国农业科学院特种动物遗传资源创新团队基金
文摘
为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P<0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P<0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P<0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。
关键词
水貂
生长激素
受体(GHR)
不同日龄
不同组织
基因表达
Keywords
mink
Growth Hormone Receptor(GHR)
different day age
different tissues
gene expression
分类号
S811.5 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建
被引量:
1
5
作者
王友东
张乐萃
机构
青岛农业大学动物科技学院
出处
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2010年第2期144-149,共6页
文摘
本研究利用AdEasyTMXL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒。利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH。pShuttle-CMV-mGH经PmeⅠ酶切线性化后转化至BJ5183感受态大肠杆菌内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-mGH。重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞。PacⅠ酶切结果表明质粒重组成功。转染第10天,细胞出现圆缩、死亡、漂浮等典型病变,透射电镜检测到重组病毒。TCID50测得第2代重组病毒的滴度达到10-7.89/0.1ml。RT-PCR结果证实,重组病毒能够正确转录目的基因。结果表明本试验成功构建了水貂生长激素基因重组腺病毒,为水貂促生长的研究提供了新的科学手段。
关键词
水貂
生长激素
基因
重组腺病毒
Keywords
mink
growth hormone gene
recombinant adenovirus
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备
6
作者
苏俊
刘曼
王吉贵
孙燕
刘维全
机构
中国农业大学生物学院
山东省潍坊市畜牧检测中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第4期866-872,共7页
基金
国家自然科学基金(30371064)
文摘
本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。
关键词
水貂
生长激素
(
mgh
)
原核表达
Ni-NTA树脂
质谱分析
兔抗
mgh
血清
Keywords
mink growth hormone(
mgh
)
prokaryotic expression
Ni-NTA resin
mass spectrometry
rabbit anti-
mgh
serum
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
GH-IGF-Ⅰ生长轴及其在水貂中的研究
被引量:
5
7
作者
荣敏
吴琼
王雷
邢秀梅
王桂武
杨福合
机构
中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室
出处
《特产研究》
2011年第2期42-46,共5页
基金
国家科技支撑计划(2007BAI38B03)
文摘
生长激素-胰岛素样生长因子Ⅰ(GH-IGF-Ⅰ)轴是动物生长发育的主要调控因素。本文概述了GH、GHRI、GF-Ⅰ基因的生物学功能、基因结构及其在水貂上的研究。
关键词
生长
轴
生长激素
生长激素
受体
胰岛素样
生长
因子Ⅰ
水貂
Keywords
Growth axis
Growth hormone
Growth hormone receptor
Insulin-like growth factor-I
Mink
分类号
Q575.11 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
埋植褪黑激素对促进水貂毛皮早熟的试验
被引量:
9
8
作者
刘念海
谢群恩
机构
江苏连云港市连云区畜牧兽医站
出处
《上海畜牧兽医通讯》
2009年第3期33-33,共1页
关键词
褪黑
激素
试验总结
毛皮
水貂
早熟
埋植
推广使用
生长激素
分类号
S865.22 [农业科学—野生动物驯养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组水貂生长激素pVAX1-mGH及其在小鼠肌肉组织中表达的研究
马凤龙
龙英娜
乔彦良
刘焕奇
王明志
刘焕珍
《动物医学进展》
CSCD
2008
1
在线阅读
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职称材料
2
水貂生长激素cDNA的克隆与序列分析
尚丹
刘维全
孙绍光
王吉贵
李全
张丽
朱宝成
《特产研究》
2005
3
在线阅读
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职称材料
3
水貂生长激素受体cDNA克隆与序列分析
荣敏
王雷
吴琼
李一清
徐佳萍
邢秀梅
杨福合
《特产研究》
2014
2
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职称材料
4
生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究
荣敏
王洪亮
涂剑锋
杨颖
徐佳萍
邢秀梅
《家畜生态学报》
北大核心
2019
0
在线阅读
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职称材料
5
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建
王友东
张乐萃
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2010
1
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职称材料
6
水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备
苏俊
刘曼
王吉贵
孙燕
刘维全
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
0
在线阅读
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职称材料
7
GH-IGF-Ⅰ生长轴及其在水貂中的研究
荣敏
吴琼
王雷
邢秀梅
王桂武
杨福合
《特产研究》
2011
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
8
埋植褪黑激素对促进水貂毛皮早熟的试验
刘念海
谢群恩
《上海畜牧兽医通讯》
2009
9
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职称材料
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