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β-半乳糖苷酶的筛选及低聚半乳糖制备工艺优化研究 被引量:1
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作者 刘思琪 郭玉娟 +1 位作者 刘彤 那治国 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第2期51-58,共8页
β-半乳糖苷酶催化乳糖水解得到的低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS),具有维持肠道菌群稳定、免疫调节和抗炎等生物功能。文章通过酶活力以及转糖苷活力的测定,确定乳酸克鲁维酵母来源的β-半乳糖苷酶制备GOS。通过单因素试验得... β-半乳糖苷酶催化乳糖水解得到的低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS),具有维持肠道菌群稳定、免疫调节和抗炎等生物功能。文章通过酶活力以及转糖苷活力的测定,确定乳酸克鲁维酵母来源的β-半乳糖苷酶制备GOS。通过单因素试验得到不同的加酶量、反应时间、反应温度和反应pH对GOS产率有显著性影响,而不同的底物浓度影响不大。利用响应面试验优化GOS产率,获得该酶水解乳糖转化合成GOS的最佳工艺条件。结果表明:底物浓度200 mg/mL、加酶量0.030%、反应温度36.9℃、反应时间2.5 h、反应pH值6.7为最优条件。GOS产率可达(12.61±0.17)%。优化后的工艺参数可为GOS的定向合成提供理论依据。 展开更多
关键词 低聚乳糖 β-乳糖 响应面 GOS产率
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源于奶酪的产β-半乳糖苷酶乳酸片球菌的筛选及其合成低聚半乳糖特性
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作者 李欣 张秋涵 +4 位作者 马子尧 关波 胡有贞 李谞 倪永清 《食品工业科技》 北大核心 2025年第6期170-178,共9页
为了给益生性低聚半乳糖(GOS)的合成提供新的乳酸菌酶源,本研究从新疆传统奶酪中筛选具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶产酶菌株。在以乳糖为单一碳源的MRS固体培养基中加入显色剂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal),以菌落生长颜色... 为了给益生性低聚半乳糖(GOS)的合成提供新的乳酸菌酶源,本研究从新疆传统奶酪中筛选具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶产酶菌株。在以乳糖为单一碳源的MRS固体培养基中加入显色剂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal),以菌落生长颜色进行初筛,以粗酶液酶活性以及转糖苷反应混合物的薄层色谱(TLC)进行复筛,结合其形态学、生理生化特征及16S rRNA序列同源性分析对产转糖苷活性的β-半乳糖苷酶菌株进行鉴定。单因素实验确定菌株的产酶条件和粗酶液的转糖苷反应条件,高效液相色谱分析转糖苷反应产物的组分及含量。筛选获得产转糖苷活性β-半乳糖苷酶的菌株6株,其中Pediococcus acidilactici Y1的产酶水平和转糖苷活性最高。单因素实验结果表明,P.acidilactici Y1在20 mg/mL乳糖,37℃培养18 h时,产酶水平最高可达(15.52±0.34)U/g。在初始乳糖浓度300 mg/mL,加酶量4.24 U/mL,50℃反应28 h时,GOS得率最高为38.4%±0.56%(w/w),乳糖残留量为30.9%±0.44%(w/w)。其中转移二糖、转移三糖以及转移四糖的质量分数分别为15.6%±0.21%(w/w)、18.3%±0.15%(w/w)和4.5%±0.01%(w/w)。以上结果表明,P.acidilactici Y1是一株产转糖苷活性β-半乳糖苷酶的新菌株,在益生性GOS的合成领域具有应用前景。 展开更多
关键词 β-乳糖 转糖活性 低聚乳糖 乳酸片球菌 奶酪
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Bifidobacterium bifidum ATCC 29521 β-半乳糖苷酶的生物信息学分析、异源表达及其酶学性质
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作者 符长春 杨瑞金 仝艳军 《食品科学》 北大核心 2025年第6期98-107,共10页
本研究旨在为低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)的合成提供新的双歧杆菌酶源,对Bifidobacterium bifidum ATCC 29521的β-半乳糖苷酶(β-gal^(^(ATCC29521)))进行生物信息学分析,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现异源表达。... 本研究旨在为低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)的合成提供新的双歧杆菌酶源,对Bifidobacterium bifidum ATCC 29521的β-半乳糖苷酶(β-gal^(^(ATCC29521)))进行生物信息学分析,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现异源表达。研究β-gal^(ATCC29521)的异源表达条件和发酵优化条件、酶学性质及其在乳清体系合成GOS的应用。生物信息学分析表明β-gal^(ATCC29521)属于糖苷水解酶家族2,不存在信号肽和跨膜区。发酵优化实验结果表明,E.coli BL21(DE3)-pET28a-β-gal^(ATCC29521)重组菌在含有10 g/L蔗糖、12 g/L胰蛋白胨、24 g/L酵母粉的培养基中,且0.05 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在27℃诱导培养16 h后,酶活力可达318.03 U/mL。粗酶液经过镍柱亲和层析得到电泳纯蛋白,其最适pH值和最适温度分别为7.5和40℃。β-gal^(ATCC29521)纯化酶在温度10~30℃和pH 6.5~9.0范围内表现出良好的稳定性。Mn^(2+)和Mg^(2+)可显著提高酶活性,Cu^(2+)和Fe^(3+)则显著抑制酶活性。以乳清为底物合成GOS时,该酶的产率为29.83%。研究结果表明β-gal^(ATCC29521)在GOS的制备领域中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 低聚乳糖 β-乳糖 Bifidobacterium bifidum ATCC 29521 发酵优化 学性质
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α-半乳糖苷酶对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及养分利用率的影响
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作者 丁孟松 《中国饲料》 北大核心 2025年第2期33-36,共4页
文章旨在研究日粮中添加不同剂量的α-半乳糖苷酶对断奶仔猪的生长性能、血清免疫指标和养分利用率的影响。试验选取健康状况和体重一致的(38±1)日龄断奶仔猪140头,随机分为4组,每组5个重复,每个重复7头仔猪,预试期7 d和正试期40 ... 文章旨在研究日粮中添加不同剂量的α-半乳糖苷酶对断奶仔猪的生长性能、血清免疫指标和养分利用率的影响。试验选取健康状况和体重一致的(38±1)日龄断奶仔猪140头,随机分为4组,每组5个重复,每个重复7头仔猪,预试期7 d和正试期40 d。日粮中α-半乳糖苷酶的添加量分别是0、100、200和300 U/kg。结果发现,与对照组相比,处理组对断奶仔猪的末重、平均日增重以及料重比均有提升,其中添加200 U/kgα-半乳糖苷酶对提高断奶仔猪的生长性能效果最显著(P <0.05),断奶仔猪平均日增重比对照组提高8.51%,料重比比对照组降低8.79%;其次,处理组对断奶仔猪血清中的IgA、IgG、IgM等生化指标均有提高,其中添加200 U/kgα-半乳糖苷酶的处理组免疫指标与对照组相比差异最显著(P <0.05),IgA、IgG、IgM分别提高12.21%、21.97%和24.39%。最后,处理组对断奶仔猪的养分利用率也有提升,其中添加200 U/kgα-半乳糖苷酶的处理组养分利用率与对照组相比差异最显著(P <0.05),粗纤维利用率和粗蛋白质利用率分别比对照组提高7.54%和9.48%。结果表明,在日粮中添加200 U/kg的α-半乳糖苷酶,对断奶仔猪的生长性能、血清生化指标及养分利用率的效率最佳。 展开更多
关键词 Α-乳糖 仔猪 生长性能 血清生化指标 养分利用率
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定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
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作者 李仙红 贾润清 +4 位作者 王友亮 漫未玲 朱天昊 阎新龙 林艳丽 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第4期576-585,共10页
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建... 对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。 展开更多
关键词 β-1 4乳糖基转移 α-2 6-唾液酸转移1 N-乙酰氨基糖基转移 规律成簇的间隔短回文重复技术 重组介导的盒式交换技术 中国仓鼠卵巢细胞
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能释放超氧阴离子的β-半乳糖苷前药的设计、合成及抗肿瘤活性
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作者 刘珈璇 姚雪妍 +3 位作者 谭云鹰 胡静 傅俊杰 尹健 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第3期295-304,共10页
以能在细胞内循环释放超氧阴离子(O_(2)^(-))的蒽醌类化合物HAQ-OH和AQ-OH为原药,设计并合成了4个全新的蒽醌β-半乳糖苷前药,期望利用Warburg效应和肿瘤细胞内过表达的β-半乳糖苷酶选择性地在肿瘤细胞内释放O_(2)^(-)杀死肿瘤细胞。... 以能在细胞内循环释放超氧阴离子(O_(2)^(-))的蒽醌类化合物HAQ-OH和AQ-OH为原药,设计并合成了4个全新的蒽醌β-半乳糖苷前药,期望利用Warburg效应和肿瘤细胞内过表达的β-半乳糖苷酶选择性地在肿瘤细胞内释放O_(2)^(-)杀死肿瘤细胞。细胞实验表明,前药Gal-HAQ和Gal-AQ可选择性地抑制β-半乳糖苷酶过表达的卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖并诱导细胞凋亡。O_(2)^(-)荧光探针发现,Gal-HAQ和Gal-AQ可时间依赖性地在OVCAR-3细胞内释放O_(2)^(-),并且O_(2)^(-)对于其抗肿瘤活性至关重要。前药Gal-HAQ和Gal-AQ还可有效清除高表达β-半乳糖苷酶的衰老细胞,而不影响非衰老细胞,进一步证明了前药依赖β-半乳糖苷酶发挥其细胞毒性。综上,本研究发现的能响应β-半乳糖苷酶释放O_(2)^(-)的前药Gal-HAQ和GalAQ有望作为新型的抗肿瘤候选分子。 展开更多
关键词 超氧阴离子 β-乳糖前药 抗肿瘤药物
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园艺作物果实β-半乳糖苷酶研究进展 被引量:1
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作者 俞沁佩 孙鹂 +3 位作者 张淑文 俞浙萍 郑锡良 戚行江 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2184-2192,共9页
β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶GH35家族,参与了植物不同生长阶段细胞壁的合成与修饰,尤其对肉质水果发育和成熟过程中多糖的裂解具有重要作用。文章概述了β-半乳糖苷酶的蛋白功能、不同亚型、亚细胞定位和活性规律,重点阐述了该基因家... β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶GH35家族,参与了植物不同生长阶段细胞壁的合成与修饰,尤其对肉质水果发育和成熟过程中多糖的裂解具有重要作用。文章概述了β-半乳糖苷酶的蛋白功能、不同亚型、亚细胞定位和活性规律,重点阐述了该基因家族在园艺作物果实质地变化中的作用及相关研究进展。 展开更多
关键词 β-乳糖 园艺作物 果实软化 基因功能
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适冷β-半乳糖苷酶及其在食品工业中的应用 被引量:1
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作者 周玲 龚金炎 +3 位作者 何光华 肖功年 许韩山 李玲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期314-320,共7页
β-半乳糖苷酶,又称乳糖酶,广泛存在于细菌、真菌、酵母菌等微生物中,主要功能是乳糖水解和合成低聚半乳糖。利用β-半乳糖苷酶生产低乳糖牛奶等乳制品成为解决乳糖不耐受问题最有效的途径,然而常用的商业化β-半乳糖苷酶的最适反应温... β-半乳糖苷酶,又称乳糖酶,广泛存在于细菌、真菌、酵母菌等微生物中,主要功能是乳糖水解和合成低聚半乳糖。利用β-半乳糖苷酶生产低乳糖牛奶等乳制品成为解决乳糖不耐受问题最有效的途径,然而常用的商业化β-半乳糖苷酶的最适反应温度大多较高,对pH的要求比较严格,存在生产成本较高、消耗能量高等问题。适冷β-半乳糖苷酶在低温下也具有较高的酶活性,广泛应用于食品行业中,尤其在乳品工业。在低温下水解乳糖,生产低乳糖或无乳糖乳制品,供乳糖不耐受者食用,可降低成本、节约能源,具有重要意义。该文综述了β-半乳糖苷酶的微生物来源、特性、催化特性的研究现状,对适冷β-半乳糖苷酶的来源、特性、耐冷机制及工业化应用进行了系统阐述,并对其前景进行了展望。 展开更多
关键词 β-乳糖 适冷β-乳糖 耐冷机制
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β-半乳糖苷酶的固定化及其合成低聚半乳糖研究
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作者 李智慧 赖田甜 +4 位作者 张敏 郝瑞敏 姚梦珂 赵华 杨贞耐 《食品科学技术学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期102-112,共11页
选用壳聚糖、海藻酸钠、海藻酸钠/明胶、海藻酸钠/羧甲基纤维素为固定化载体材料,探究β-半乳糖苷酶的固定化方法,并将获得的适宜固定化酶应用于合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS)。结果表明,较优固定化载体为壳聚糖,β-半... 选用壳聚糖、海藻酸钠、海藻酸钠/明胶、海藻酸钠/羧甲基纤维素为固定化载体材料,探究β-半乳糖苷酶的固定化方法,并将获得的适宜固定化酶应用于合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS)。结果表明,较优固定化载体为壳聚糖,β-半乳糖苷酶的优化固定化条件为壳聚糖质量浓度0.03 g/mL,静置时间2 h,戊二醛体积分数2%,交联时间3 h,吸附时间12 h,固定化温度60℃,加酶量0.4 mg/g(以壳聚糖微球质量计)。与游离酶相比,固定化酶的耐酸、碱、热的稳定性显著提升。进一步利用壳聚糖固定化β-半乳糖苷酶合成GOS,确定了优化反应条件:加酶量为2 U/mL,pH值为6.0,反应温度为50℃,初始乳糖质量浓度为500 g/L,反应时间为14 h。此条件下GOS产率可达到52.61%,高于已报道的GOS产率(25.1%~46.0%),且产物中聚合度大于等于3的GOS含量为37.07%。固定化酶重复使用5次后,产GOS活性仍保留了97.21%,研究获得的壳聚糖固定化β-半乳糖苷酶在GOS合成领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 β-乳糖 低聚乳糖合成 固定化方法 壳聚糖 交联
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甲壳质酶蛋白-40、半胱氨酸蛋白水解酶-1及ASPECTS预测前循环大面积脑梗死介入取栓患者预后的价值研究
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作者 王冀伟 李辉 +4 位作者 刘建峰 徐丽峰 毕红玲 谢雄伟 田洋洋 《中国卒中杂志》 北大核心 2024年第10期1155-1161,共7页
目的探讨甲壳质酶蛋白-40(chitinase protein-40,YKL-40)、半胱氨酸蛋白水解酶-1(cysteine proteolytic enzyme-1,Caspase-1)水平及ASPECTS对前循环大面积脑梗死介入取栓患者预后的预测价值。方法回顾性分析2020年6月—2023年2月于河北... 目的探讨甲壳质酶蛋白-40(chitinase protein-40,YKL-40)、半胱氨酸蛋白水解酶-1(cysteine proteolytic enzyme-1,Caspase-1)水平及ASPECTS对前循环大面积脑梗死介入取栓患者预后的预测价值。方法回顾性分析2020年6月—2023年2月于河北医科大学第一医院接受介入取栓治疗的180例前循环大面积脑梗死患者的病历资料。按照介入取栓3个月后的预后情况分为死亡组(41例)与存活组(139例),比较两组基线资料及介入取栓前YKL-40、Caspase-1水平。采用Cox回归分析探讨大面积脑梗死介入取栓预后的影响因素。利用ROC曲线分析探讨YKL-40、Caspase-1水平及ASPECTS预测大面积脑梗死介入取栓预后的效能。结果死亡组患者年龄及梗死灶面积大于存活组,ASPECTS低于存活组(均P<0.001)。死亡组患者的血清YKL-40水平([141.37±12.40)μg/L vs.(115.05±11.40)μg/L]、Caspase-1水平([13.05±1.15)ng/L v s.(8.61±0.64)n g/L]均高于存活组(均P<0.001)。C ox回归分析结果显示,梗死灶面积大(HR 1.011,95%CI 1.001~1.022)、YKL-40水平高(HR 1.033,95%CI 1.001~1.066)、Caspase-1水平高(HR 1.576,95%CI 1.264~1.966)均是前循环大面积脑梗死介入取栓后死亡的独立危险因素,ASPECTS高(HR 0.887,95%CI 0.794~0.991)是前循环大面积脑梗死介入取栓后死亡的保护因素。ROC曲线分析结果显示,血清YKL-40、Caspase-1水平及ASPECTS联合预测前循环大面积脑梗死介入取栓后死亡的效能(AUC 0.940,95%CI 0.890~0.990)优于上述3项指标单独预测[AUC分别为0.869(95%CI 0.806~0.933)、0.897(95%CI 0.828~0.966)、0.724(95%CI 0.642~0.806)]。结论YKL-40、Caspase-1水平及ASPECTS均与前循环大面积脑梗死介入取栓患者预后密切相关,可作为患者预后的预测指标。 展开更多
关键词 大面积脑梗死 预后 甲壳质蛋白-40 胱氨酸蛋白水解酶-1 Alberta卒中项目早期CT评分
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α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及其在保育猪日粮中的应用 被引量:4
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作者 张波 王继强 张宝彤 《中国饲料》 北大核心 2013年第1期18-20,共3页
为研究α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及日粮中添加与α-半乳糖苷酶(α-Gal)对保育猪生长的影响,进行了两个试验。试验一:1 mL浓度为1.0 mg/mL的蜜二糖、棉子糖和水苏糖分别与3 U的α-Gal于37℃孵育16 h,用离子色谱检测释放的α-D-半乳... 为研究α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及日粮中添加与α-半乳糖苷酶(α-Gal)对保育猪生长的影响,进行了两个试验。试验一:1 mL浓度为1.0 mg/mL的蜜二糖、棉子糖和水苏糖分别与3 U的α-Gal于37℃孵育16 h,用离子色谱检测释放的α-D-半乳糖。结果表明,α-Gal可以水解95.7%的蜜二糖,72.5%的棉子糖以及32.9%的水苏糖。试验二:选用72头平均体重为(12.5±0.2)kg的仔猪为研究对象,分为2个处理,每个处理6个重复,每个重复6头猪,研究α-Gal对保育猪生长的影响。处理1为对照组,处理2在对照组的基础上添加300 U/kg的α-Gal。21 d试验结果表明,加酶组平均日增重641 g,比不加酶组提高了9.8%(P=0.015);与对照组相比,加酶组饲料转化率提高了10.1%(P=0.020);两组之间平均日采食量差异不显著(P=0.944)。总之,α-Gal可以有效地降解棉子糖类寡糖,保育猪玉米-豆粕基础日粮中添加300 U/kgα-Gal显著提高了平均日增重和饲料转化率。 展开更多
关键词 Α-乳糖 底物特异性 保育猪 生长性能
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普通烟草β-半乳糖苷酶基因(NtBGAL)的生信分析及其在不同组织及原核诱导的表达
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作者 曹领改 刘杰 +2 位作者 张洁 张盼 余世洲 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1220-1227,共8页
【目的】探明普通烟草β-半乳糖苷酶基因NtBGAL的表达模式与蛋白特征,为后期创制烟草多用途利用的底盘材料提供依据。【方法】通过比对普通烟草K326基因序列与本氏烟草NbBGAL1基因的同源性,以K326的cDNA为模板经PCR技术克隆获得NtBGAL基... 【目的】探明普通烟草β-半乳糖苷酶基因NtBGAL的表达模式与蛋白特征,为后期创制烟草多用途利用的底盘材料提供依据。【方法】通过比对普通烟草K326基因序列与本氏烟草NbBGAL1基因的同源性,以K326的cDNA为模板经PCR技术克隆获得NtBGAL基因,随后利用生信工具软件分析其基因结构及蛋白理化性质,并采用qRT-PCR检测该基因在烟草不同组织部位(根、茎、叶和花)的表达模式,最后开展原核诱导表达、蛋白纯化及蛋白表征研究。【结果】克隆获得烟草NtBGAL基因,其与本氏烟草NbBGAL1基因同源性最高,二者具有相同的结构域(Motif);该基因定位于9号染色体上,含有18个内含子,mRNA长度为6649 bp,CDS长度为2541 bp,编码846个氨基酸,翻译的β-半乳糖苷酶属于GH35家族,NtBGAL蛋白的分子量为92.44 kDa,理论等电点(pI)为6.8,GRAVY为-0.222,定位于细胞壁。该基因在普通烟草不同组织部位的表达量为花>叶>茎>根,差异显著。在37℃下进行原核诱导,NtBGAL蛋白有明显表达;采用包涵体纯化方法获得较高纯度的NtBGAL蛋白。NtBGAL蛋白酶促反应最适温度为30~40℃,最适pH为4.0~6.5,Mn^(2+)浓度为0.05~0.15 mmol/L时对NtBGAL酶活性有增强作用。【结论】研究明确NtBGAL基因的组织表达模式及蛋白表征,为进一步通过改造NtBGAL基因,利用普通烟草生产人源化糖蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 烟草 NtBGAL基因 β-乳糖 生信分析 原核诱导 蛋白表征
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家蚕乳糖酶-根皮苷水解酶基因BmLPH014192的表达和序列选择性剪接分析 被引量:1
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作者 黄飞飞 赵小靓 鲁成 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期21-27,共7页
乳糖酶-根皮苷水解酶(lactase-phlorizin hydrolase,LPH)是肠组织上皮细胞微绒膜上的一种糖蛋白,对乳糖和根皮苷有水解活性。鉴定了家蚕基因组中的一个LPH基因,命名为BmLPH014192。该基因CDS长1 305 bp,编码434个氨基酸,预测蛋白质分子... 乳糖酶-根皮苷水解酶(lactase-phlorizin hydrolase,LPH)是肠组织上皮细胞微绒膜上的一种糖蛋白,对乳糖和根皮苷有水解活性。鉴定了家蚕基因组中的一个LPH基因,命名为BmLPH014192。该基因CDS长1 305 bp,编码434个氨基酸,预测蛋白质分子质量为50.8 kD,等电点(pI)为5.35。将该基因的cDNA与家蚕基因组序列比对,显示其具有7个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT-AG规则。将BmLPH014192与哺乳动物人、褐鼠、家兔和昆虫黑腹果蝇、冈比亚按蚊、二化螟、佛罗里达弓背蚁、大红斑蝶等的LPH进行氨基酸序列比对,相似度都在60%左右;聚类分析中BmLPH014192与昆虫类LPH聚在一起。芯片数据分析结果表明BmLPH014192在家蚕5龄第3天幼虫的9个组织中,只在中肠中有表达,并且表达量很高。在绿茧品种大造和白茧品种19-710幼虫的中肠中扩增到的特异性条带其长度分别为1 000 bp和750 bp,存在序列选择性剪接;在其它白茧品种的中肠中没有扩增出特异性条带。推测BmLPH014192的特殊表达方式可能与其在不同家蚕品种中肠组织中的特异性功能有关。 展开更多
关键词 家蚕 乳糖-根皮水解酶 序列特征 表达 选择性剪接
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环状芽孢杆菌β-半乳糖苷酶水解乳糖和ONPG的底物特异性(英文) 被引量:1
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作者 秦燕 宁正祥 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-62,共5页
在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现 ,OHA与LHA的比值范围在 1.3~ 32 .2之间 ,表明OHA与LHA差异很大 ,无相关性 .对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现 ,Na+和K+能不同程度地促进OHA和LHA ;Mg2 +能增强OHA ,对LHA却表现出抑制作用 .酶作用于O... 在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现 ,OHA与LHA的比值范围在 1.3~ 32 .2之间 ,表明OHA与LHA差异很大 ,无相关性 .对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现 ,Na+和K+能不同程度地促进OHA和LHA ;Mg2 +能增强OHA ,对LHA却表现出抑制作用 .酶作用于ONPG和乳糖的最适 pH和温度也存在差异 .一定反应体系中 ,OHA/LHA的值随反应条件的变化而不同 ,因此用OHA来评价LHA会对酶的实际应用带来很大影响 . 展开更多
关键词 β-乳糖 底物特异性 ONPG 水解能力 乳糖 环状芽孢杆菌 抑制作用
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β-半乳糖苷酶选择性催化人参皂苷Rg3水解制备Rh2初探 被引量:4
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作者 万会达 李丹 张珏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期54-58,共5页
初步研究了来源于Aspergillus sp.的β-半乳糖苷酶催化人参皂苷Rg3水解的反应。首先采用羟丙基-β-环糊精包合法解决Rg3水溶性差的问题,其溶解度提高了74.6倍。根据相溶解度曲线,Rg3的包合类型属于AL型,即形成1∶1的包合物。以Rg3包合... 初步研究了来源于Aspergillus sp.的β-半乳糖苷酶催化人参皂苷Rg3水解的反应。首先采用羟丙基-β-环糊精包合法解决Rg3水溶性差的问题,其溶解度提高了74.6倍。根据相溶解度曲线,Rg3的包合类型属于AL型,即形成1∶1的包合物。以Rg3包合物为底物,来源于Aspergillus sp.的β-半乳糖苷酶能选择性催化水解Rg3分子结构中C3位槐糖基的β-1,2葡萄糖苷键,得到Rh2。当加酶量为500 U/g Rg3,60℃下反应24 h,Rg3的转化率达90.6%,Rh2的产率为88.5%。 展开更多
关键词 β-乳糖 人参皂 水解 羟丙基-环糊精
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硫色曲霉α-半乳糖苷酶基因的异源表达及其水解大豆寡糖的效果研究 被引量:1
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作者 曹恒 杨美玉 +3 位作者 刘安国 张梦杰 曹云鹤 陆文清 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期7092-7104,共13页
本试验旨在研究硫色曲霉α-半乳糖苷酶基因(As-gal1)在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果。以本实验室前期对硫色曲霉进行全基因组测序为依据,选取1条功能鉴定为α-半乳糖苷酶的cDNA序列As-gal1进行基因分析,并根据毕赤... 本试验旨在研究硫色曲霉α-半乳糖苷酶基因(As-gal1)在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果。以本实验室前期对硫色曲霉进行全基因组测序为依据,选取1条功能鉴定为α-半乳糖苷酶的cDNA序列As-gal1进行基因分析,并根据毕赤酵母密码子偏好性进行序列优化,构建优化型菌株进行72 h摇瓶发酵,测定酶学性质。对该工程菌株进行30 L发酵罐高密度发酵,用发酵罐所得粗酶酶解豆浆中的大豆寡糖。结果表明:1)该α-半乳糖苷酶基因As-gal1全长1 626 bp,编码541个氨基酸,诱导72 h后优化型工程菌株的α-半乳糖苷酶活性为3.20 U/mL。2)发酵得到的α-半乳糖苷酶的最适pH为5.0,最适温度为55℃;除pH 6.0外,在pH 4.0~8.0稳定性良好;耐热性较差,60℃10 min和70℃5 min即可近乎全部失活;该酶对大部分金属离子具有抗性,但其被MnSO_(4)抑制,被FeCl_(3)促进;30 L发酵罐高密度发酵结果显示,甲醇诱导177 h酶活性可达最高,为190 U/mL,比摇瓶提高了约58倍。3)大豆寡糖酶解试验结果显示,55℃下加酶量为2 U/mL反应3 h时,豆浆中总寡糖的降解率为49.07%。综上所述,本试验选取的As-gal1异源表达后获得的α-半乳糖苷酶对大豆中寡糖具有较好的降解潜力。 展开更多
关键词 硫色曲霉 Α-乳糖 毕赤酵母 高密度发酵 寡糖
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用α-半乳糖苷酶制备可供输注的人通用型O型红细胞 被引量:18
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作者 宫锋 吕秋霜 +10 位作者 由英 高红伟 鲍国强 高新 李素波 李立立 王颖丽 田曙光 张志欣 张评 章扬培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期313-316,共4页
研究的目的是将人群中28%的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、 恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求。用α-1.3半孔糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索 改造一个使用单位B型血红细胞(100 ml... 研究的目的是将人群中28%的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、 恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求。用α-1.3半孔糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索 改造一个使用单位B型血红细胞(100 ml)的最佳条件。结果实现了在密闭、无菌条件下使用50 U/ml工具酶,pH 5.6,26℃ 2小时,进行B→O的血型改造。结论:改造后的通用型O型血红细胞符合生物制品检定规程的要求, 并可在4℃存放21天。 展开更多
关键词 输血 O型红细胞 α-1.3乳糖 血型改造 B→O血型改造
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超声波细胞破碎法检测嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶活力的研究 被引量:28
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作者 赵瑞香 王大红 +1 位作者 牛生洋 苏娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期47-50,共4页
采用超声波破碎法对嗜酸乳杆菌A和B产生的β-半乳糖苷酶进行提取,并以邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物测定了β-半乳糖苷酶的活力。通过单因素试验和正交试验,选出了超声波破碎的最佳工艺条件。实验表明,嗜酸乳杆菌A在工作时间7.6m... 采用超声波破碎法对嗜酸乳杆菌A和B产生的β-半乳糖苷酶进行提取,并以邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物测定了β-半乳糖苷酶的活力。通过单因素试验和正交试验,选出了超声波破碎的最佳工艺条件。实验表明,嗜酸乳杆菌A在工作时间7.6min,工作/间歇为28s/20s,温度36℃时,超声波对细胞的破碎效果较好,此条件下破碎后,A株产生的β-半乳糖苷酶活力为5.963μmolONP/L·min。嗜酸乳杆菌B在工作时间6.8min,工作/间歇为20s/20s,温度37℃时效果较好,产生的β-半乳糖苷酶活力为6.683μmolONP/L·min。因此,嗜酸乳杆菌具有较高产生β-半乳糖苷酶的能力。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 β-乳糖 超声波细胞破碎
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黑曲霉变种RM48 α-半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究 被引量:10
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作者 许尧兴 李艳丽 +2 位作者 柳永 许少春 姚晓红 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期147-152,共6页
经硫酸铵沉淀、疏水柱层析和分子筛层析,从黑曲霉变种RM48(Aspergillus niger v.Tiegh RM48)固体发酵后的浸提液中分离纯化了α-半乳糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,此酶蛋白的分子量约为108kDa.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度是60℃,... 经硫酸铵沉淀、疏水柱层析和分子筛层析,从黑曲霉变种RM48(Aspergillus niger v.Tiegh RM48)固体发酵后的浸提液中分离纯化了α-半乳糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,此酶蛋白的分子量约为108kDa.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度是60℃,耐热温度为40℃;最适反应pH为4.5,在pH3.0~6.0之间保持90%以上的酶活性;在实验的金属离子范围内,所有金属离子对黑曲霉变种RM48α-半乳糖苷酶均有抑制作用,其中Cu2+和Fe2+抑制作用最为显著,Li2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+、Ca2+、Mg2+和Co2+对酶活性有轻微的抑制作用.在pH4.0和60℃反应条件下此酶的Km为7.37mmol·L-1,Vmax为5618IU·mg-1·min-1.成熟酶蛋白N端序列为DEKAYSPCYY,与已报道的α-半乳糖苷酶蛋白无同源性. 展开更多
关键词 黑曲霉变种RM48 Α-乳糖 分离纯化 学性质
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β-半乳糖苷酶高产菌株的诱变筛选及其发酵培养 被引量:13
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作者 吴惧 张嘉芷 +3 位作者 张庆波 许永红 贾文华 王秋颍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期5-9,共5页
本文系统地报道了以乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis 2883)作为出发菌株,经诱变而获得β一半乳糖苷酶高产菌株(K·lactis 2—90—1)和该菌株的最适培养基选择以及其最佳发酵工艺条件的确定等研究内容。
关键词 β-乳糖 诱变 发酵 高产菌株 乳品微生物
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