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水蛭素衍生物基因的克隆及其在哺乳类细胞中的表达
被引量：
10
1
作者
顾银良
罗春贞
+2 位作者
李凌
张艳玲
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1996年第3期185-188,共4页
设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果...
设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果：细胞培液中，重组水蛭素衍生物的活性达到１０ＡＴＵ／ｍｌ，并有抗血小板凝集作用。结论：水蛭素新突变体具有预防血栓性疾病的应用前景，但其表达水平和稳定性有待于进一步提高。
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关键词
水蛭素衍生物
基因合成
克隆
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职称材料
水蛭素衍生物基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
9
2
作者
罗春贞
顾银良
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1996年第3期181-184,共4页
制备水蛭素衍生物，首次按照天然水蛭素分子中的氨基酸顺序，设计了水蛭素的基因，基因中融合了ＲＧＤ三肽编码顺序，形成水蛭素衍生物编码基因，用ＤＮＡ合成仪，分１０个寡核苷酸合成水蛭素衍生物基因。其中６个寡核苷酸组成外端大片...
制备水蛭素衍生物，首次按照天然水蛭素分子中的氨基酸顺序，设计了水蛭素的基因，基因中融合了ＲＧＤ三肽编码顺序，形成水蛭素衍生物编码基因，用ＤＮＡ合成仪，分１０个寡核苷酸合成水蛭素衍生物基因。其中６个寡核苷酸组成外端大片段，４个寡核苷酸组成Ｃ－端大片段。各大片段与载体ｐＵＣ１９重组和无性繁殖后，通过ＫｐｎⅠ位点连接成编码水蛭素衍生物分子的完整基因。经核苷酸顺序分析证实后，水蛭素衍生物基因与表达载体重组，转化大肠杆菌，筛选含重组质粒的细菌，命名为ｐＳＧＨＲＥ。结果：ｐＳＧＨＲＥ菌破碎后，上清和沉淀部分都有水蛭素活性。上清活性约２０ＡＴＵ／ｍｌ菌液。结论：我们构建了水蛭素衍生物基因的克隆并在大肠杆菌中得到表达。
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关键词
水蛭素衍生物
基因克隆
原核表达
大肠杆菌
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题名
水蛭素衍生物基因的克隆及其在哺乳类细胞中的表达
被引量：
10
1
作者
顾银良
罗春贞
李凌
张艳玲
宋后燕
机构
上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室
出处
《上海医科大学学报》
CSCD
1996年第3期185-188,共4页
文摘
设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果：细胞培液中，重组水蛭素衍生物的活性达到１０ＡＴＵ／ｍｌ，并有抗血小板凝集作用。结论：水蛭素新突变体具有预防血栓性疾病的应用前景，但其表达水平和稳定性有待于进一步提高。
关键词
水蛭素衍生物
基因合成
克隆
Keywords
hirudin variant
gene synthesis
cloning and expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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题名
水蛭素衍生物基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
9
2
作者
罗春贞
顾银良
宋后燕
机构
上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室
出处
《上海医科大学学报》
CSCD
1996年第3期181-184,共4页
文摘
制备水蛭素衍生物，首次按照天然水蛭素分子中的氨基酸顺序，设计了水蛭素的基因，基因中融合了ＲＧＤ三肽编码顺序，形成水蛭素衍生物编码基因，用ＤＮＡ合成仪，分１０个寡核苷酸合成水蛭素衍生物基因。其中６个寡核苷酸组成外端大片段，４个寡核苷酸组成Ｃ－端大片段。各大片段与载体ｐＵＣ１９重组和无性繁殖后，通过ＫｐｎⅠ位点连接成编码水蛭素衍生物分子的完整基因。经核苷酸顺序分析证实后，水蛭素衍生物基因与表达载体重组，转化大肠杆菌，筛选含重组质粒的细菌，命名为ｐＳＧＨＲＥ。结果：ｐＳＧＨＲＥ菌破碎后，上清和沉淀部分都有水蛭素活性。上清活性约２０ＡＴＵ／ｍｌ菌液。结论：我们构建了水蛭素衍生物基因的克隆并在大肠杆菌中得到表达。
关键词
水蛭素衍生物
基因克隆
原核表达
大肠杆菌
Keywords
hirudin derivative
gene cloning
prokaryotic expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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1
水蛭素衍生物基因的克隆及其在哺乳类细胞中的表达
顾银良
罗春贞
李凌
张艳玲
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1996
10
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职称材料
2
水蛭素衍生物基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
罗春贞
顾银良
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1996
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