日本医蛭摄食前后不同组织中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式

1

作者 石萍 游华建 +2 位作者 邓小书 陈仕江 鲁增辉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第7期1400-1405,共6页

【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织(唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢)中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式,为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基... 【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织(唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢)中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式,为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基因序列信息,利用实时荧光定量PCR方法,对水蛭关键活性成分的编码基因hirudin在不同摄食阶段、不同组织中的表达量进行检测分析,研究该基因的时空表达模式。【结果】水蛭素基因(hirudin)在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢组织中均有表达,且在唾液腺中的表达量显著高于其他组织;Hirudin基因在不同摄食阶段的唾液腺组织中表达结果显示,摄食后第2天表达量显著升高,之后随着摄食时间的推延而呈下降趋势;Hirudin基因在嗉囊、肠中的表达量呈先升高后下降趋势,分别于摄食后第1、第2天达到最高,之后会随着停食时间延长呈下降趋势,尤其是在摄食后第7、第8天的表达量呈显著性降低;Hirudin基因在皮肤组织中也有表达,并随着停食时间的延长呈先升后降趋势,最高峰出现在摄食后第2天;在精/卵巢组织中,摄食期间hirudin基因的表达量最高,与其他摄食阶段的表达呈显著性差异。【结论】水蛭素基因(hirudin)在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤和精/卵巢组织中均有不同程度的表达,在唾液腺中的表达量显著高于其他组织。摄食行为及食物刺激可能影响水蛭素基因(hirudin)的表达,在不同摄食阶段的表达量存在显著差异。研究结果可为水蛭药材的科学采收加工、提取部位的科学选取、合理入药提供理论依据和技术支撑,对未来水蛭药材资源的可持续利用具有重要的参考价值。 展开更多

关键词 日本医蛭 水蛭素基因(hirudin) 摄食 时空表达模式

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水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌 被引量：4

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作者 毕群 黄仪秀 朱圣庚 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期737-742,共6页

水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭（Ｈｉｒｕｄｏｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大... 水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭（Ｈｉｒｕｄｏｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一致。水蛭素基因在大肠杆菌中得到表达，重组水蛭素（ｒＨＶ－２）被分泌到细胞周质及培养基中，表达量占菌体蛋白的１９．８％，并且有明显抗凝血酶生物活性。经分离纯化，产物在质谱分析中显示基本为单一成分，分子量为６８９３．１Ｄａ，证明重组水蛭素在分泌过程得到正确加工。 展开更多

关键词 水蛭素 递归PCR 大肠杆菌 基因表达 抗凝血药

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水蛭素变异体I基因的合成及其在酵母中表达的初步研究 被引量：4

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作者 昝云红 孙茂盛 +1 位作者 郭仁 代长柏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期361-366,共6页

目的将水蛭素基因转入酵母系统中进行表达，以评价人工合成基因在真核系统中表达的可行性和探讨影响表达水平的因素。方法根据水蛭素变异体Ｉ（ＨＶ１）的氨基酸序列，选择酿酒酵母偏爱的密码子，设计了ＨＶ１基因。将ＨＶ１基因分１２... 目的将水蛭素基因转入酵母系统中进行表达，以评价人工合成基因在真核系统中表达的可行性和探讨影响表达水平的因素。方法根据水蛭素变异体Ｉ（ＨＶ１）的氨基酸序列，选择酿酒酵母偏爱的密码子，设计了ＨＶ１基因。将ＨＶ１基因分１２个寡核苷酸片段，进行人工合成，并连接成一个完整的水蛭素基因。经ＰＣＲ扩增后，将扩增产物连到克隆载体ｐＢＳ－ＳＫ（＋）上并进行ＤＮＡ序列分析。用正确的ＨＶ１基因与酵母α因子信号肽基因相连，并一起插入酵母表达载体ｐＹＣ－ＤＥ，经鉴定表明，获得正确的重组表达质粒。将后者转入酿酒酵母ＢＪ１９９０细胞进行初步表达。结果在筛选出的阳性克隆的培养上清中，检测出的水蛭素活性为３０抗凝血酶单位（ＡＴＵ）／ｍｌ。所表达的量高于ＨＶ２在酵母中和ＨＶ１在原核系统的表达水平。Ｎ末端氨基酸序列与天然水蛭素一致。结论采用人工合成的ＨＶ１基因和较强的启动子在酵母中进行表达是一较好途径。 展开更多

关键词 水蛭素 基因合成 酿酒酵母

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广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定 被引量：13

4

作者 谭恩光 刘秀平 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期84-86,共3页

【目的】研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响。【方法】抽提广东菲牛蛭基因组DNA ,根据已发表的水蛭素基因设计一对引物 ,从基因组DNA扩增出一特异性的大约 70 0bp片段 ,再回收、克隆和测序。【结果】广东菲牛蛭水蛭素基因全长为 6... 【目的】研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响。【方法】抽提广东菲牛蛭基因组DNA ,根据已发表的水蛭素基因设计一对引物 ,从基因组DNA扩增出一特异性的大约 70 0bp片段 ,再回收、克隆和测序。【结果】广东菲牛蛭水蛭素基因全长为 6 42bp ,基因有 4个外显子 ,被三个内含子隔开。与马尼拉菲牛蛭水蛭素基因Hm1、Hm2 的同源性分别为 90 %与和 88 6 %。【结论】地理因素会影响菲牛蛭水蛭素基因结构的变异。 展开更多

关键词 水蛭素基因 基因扩增 序列分析 菲牛蛭 克隆 广东菲牛蛭

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水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达 被引量：3

5

作者 杨宇峰 周建 +2 位作者 耿旭 董亚芳 吴自荣 《华东师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期102-105,共4页

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的... 水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果. 展开更多

关键词 RGD序列 重组水蛭素 枯草芽孢杆菌 融合蛋白基因 基因克隆 抗血小板聚集 纤维蛋白原 血栓性疾病 凝血酶抑制剂 分离纯化

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水蛭素衍生物基因的克隆及其在哺乳类细胞中的表达 被引量：10

6

作者 顾银良 罗春贞 +2 位作者 李凌 张艳玲 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第3期185-188,共4页

设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果... 设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果：细胞培液中，重组水蛭素衍生物的活性达到１０ＡＴＵ／ｍｌ，并有抗血小板凝集作用。结论：水蛭素新突变体具有预防血栓性疾病的应用前景，但其表达水平和稳定性有待于进一步提高。 展开更多

关键词 水蛭素衍生物 基因合成 克隆

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水蛭素的全基因合成及克隆 被引量：1

7

作者 许长蔼 张要武 +1 位作者 向开军 李爱华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期58-61,共4页

报道了水蛭素全基因的合成及克隆。根据已知水蛭素氨基酸序列及酵母菌体内蛋白质表达特性 ,设计了水蛭素的全基因序列 ,采用化学合成及酶学相结合的方法 ,合成了该基因片段 ,并逐段克隆至载体 pBS上 ,得到全长水蛭素基因。序列测定表明 ... 报道了水蛭素全基因的合成及克隆。根据已知水蛭素氨基酸序列及酵母菌体内蛋白质表达特性 ,设计了水蛭素的全基因序列 ,采用化学合成及酶学相结合的方法 ,合成了该基因片段 ,并逐段克隆至载体 pBS上 ,得到全长水蛭素基因。序列测定表明 ,克隆后DNA顺序同原设计序列。 展开更多

关键词 水蛭素 基因合成 基因克隆 基因重组 抗凝血药物

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水蛭素基因在酵母细胞中的分泌表达 被引量：1

8

作者 许长蔼 张要武 +1 位作者 向开军 李爱华 《天津农业科学》 CAS 2000年第2期26-29,共4页

报道了合成的水蛭素基因表达载体的构建 ,表达载体在酵母细胞中的表达 。

关键词 水蛭素 酵母菌 分泌 基因表达载体

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重组水蛭素Ⅲ对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

9

作者 欧瑜 袁志军 +1 位作者 耿培 吴梧桐 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期581-584,共4页

背景重组水蛭素Ⅲ（rHV3）对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞（LECs）有较好的保护作用，但其分子机制尚不清楚。目的探讨rHV3对半乳糖损伤的人LECs凋亡相关基因表达的影响。方法用本课题组构建的表达重组水蛭素工程菌，参照Markwardt的... 背景重组水蛭素Ⅲ（rHV3）对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞（LECs）有较好的保护作用，但其分子机制尚不清楚。目的探讨rHV3对半乳糖损伤的人LECs凋亡相关基因表达的影响。方法用本课题组构建的表达重组水蛭素工程菌，参照Markwardt的凝血酶滴定方法进行水蛭素生物学活性的测定。将培养的人LECs分为3组，培养于含质量分数10％胎牛血清（FBS）的D／F12培养液作为正常组、用含125×10^-3mol／LD一半乳糖的D／F12培养液建立人LECs株SRAOI／04损伤模型为模型组，用2000U／ml（商品单位）rHV3加入部分损伤模型培养液中进行干预作为rHV3组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组人LECs内凋亡相关基因的表达，包括醛糖还原酶（AR）、bcl2、bax、p53基因mRNA的表达水平，各目的基因表达丰度用目的基因的吸光度（A）值与3一磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）A值的比值表达。结果与正常组比较，模型组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显高于对照组，差异均有统计学意义（t=3．90E一06、t=8．44E一04、t=5．15E一08，P〈0．叭），而水蛭素干预组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显低于模型组，差异均有统计学意义（t=5．90E一06、t=1．51E．04、t=3．42E一06，P〈0．01）。与正常组比较，模型组人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值明显降低，差异有统计学意义（t=1．86E一05，P〈O．01），与模型组相比，水蛭素干预后人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值显著提高，差异有统计学意义（t=8．56E一05，P〈0．01）。结论D一半乳糖导致人LECs损伤，rHV3可能通过抑制多元醇途径和线粒体介导的凋亡途径对人LECs起保护作用。 展开更多

关键词 人晶状体上皮细胞 重组水蛭素Ⅲ 半乳糖 凋亡 基因

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水蛭素衍生物基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：9

10

作者 罗春贞 顾银良 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第3期181-184,共4页

制备水蛭素衍生物，首次按照天然水蛭素分子中的氨基酸顺序，设计了水蛭素的基因，基因中融合了ＲＧＤ三肽编码顺序，形成水蛭素衍生物编码基因，用ＤＮＡ合成仪，分１０个寡核苷酸合成水蛭素衍生物基因。其中６个寡核苷酸组成外端大片... 制备水蛭素衍生物，首次按照天然水蛭素分子中的氨基酸顺序，设计了水蛭素的基因，基因中融合了ＲＧＤ三肽编码顺序，形成水蛭素衍生物编码基因，用ＤＮＡ合成仪，分１０个寡核苷酸合成水蛭素衍生物基因。其中６个寡核苷酸组成外端大片段，４个寡核苷酸组成Ｃ－端大片段。各大片段与载体ｐＵＣ１９重组和无性繁殖后，通过ＫｐｎⅠ位点连接成编码水蛭素衍生物分子的完整基因。经核苷酸顺序分析证实后，水蛭素衍生物基因与表达载体重组，转化大肠杆菌，筛选含重组质粒的细菌，命名为ｐＳＧＨＲＥ。结果：ｐＳＧＨＲＥ菌破碎后，上清和沉淀部分都有水蛭素活性。上清活性约２０ＡＴＵ／ｍｌ菌液。结论：我们构建了水蛭素衍生物基因的克隆并在大肠杆菌中得到表达。 展开更多

关键词 水蛭素衍生物 基因克隆 原核表达 大肠杆菌

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水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响 被引量：2

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作者 那丽莎 曲娜 +1 位作者 于雪 栗昭生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1640-1645,共6页

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HR... 目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。 展开更多

关键词 水蛭素 脑梗死 炎症 Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶信号通路 细胞凋亡

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安舒克栓酶和水蛭素融合基因在枯草杆菌中的表达

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作者 张嘉敏 周建 +1 位作者 黄静 吴自荣 《华东师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期129-132,共4页

安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的... 安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的水蛭素(hirudin,Hir)是凝血酶的最强有力的天然抑制剂,是极具优势的抗凝药物[1].但仍各有不足:安舒克栓酶只有溶栓功能,不能抗栓,不能解决血栓治疗中再栓塞的问题;水蛭素只有抗凝作用,不具溶栓功能.如果将这两种从不同途径治疗血栓的药物,通过融合蛋白基因工程技术结合在一起,理论上能让两者互补所短,研究出具溶栓、抗凝双功能的新药.虽然蛋白酶和其他蛋白融合有过成功的报道[2],但安舒克栓酶有强烈的蛋白水解作用,它能否和其他蛋白融合,目前还未见报道.对这一课题的研究,一方面能深入对安舒克栓酶结构、功能的了解,另一方面也为今后此类融合蛋白的构建打下基础,提供有用的信息. 展开更多

关键词 克栓酶 水蛭素 纤维蛋白 融合基因 表达 纤溶酶原激活剂 凝血酶 枯草杆菌 水解 医用

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基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产

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作者 王亚丽 刘秀霞 +1 位作者 杨艳坤 白仲虎 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期1-8,共8页

水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分,在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究,该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表... 水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分,在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究,该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表达重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant Hirudin varidantⅢ,Rhv3)的办法。首先,在C.glutamicum中构建含Ptac启动子和CspA信号肽的Rhv3分泌表达菌株,比较其在不同培养基中的表达情况。结果表明在BHI培养基中Rhv3活性最高,达到3.02×10^(3) ATU/L。为进一步提升Rhv3产量,通过核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)筛选,选用RBS1应用于Rhv3多拷贝菌株构建和表达。然后利用3A组装技术构建含不同信号肽和不同拷贝数的Rhv3分泌表达菌株进一步优化其产量。通过放大发酵培养,Rhv3产量达到1.89 g/L,活性达到10.91×10^(3) ATU/L。最后利用镍柱对Rhv3进行简单纯化,其纯度达到90%。该异源表达策略有效提高Rhv3表达量,为Rhv3的重组生产提供了一种质量可靠、低成本的表达体系。 展开更多

关键词 重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant hirudin varidantⅢ Rhv3) 核糖体结合位点(ribosome binding site RBS) 多拷贝 信号肽 谷氨酸棒杆菌

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重组水蛭素的突变及突变体部分性质研究 被引量：5

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作者 鹿峪峰 王朝晖 韩玉珉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期32-37,共6页

以基因突变结合动力学分析的方法研究了水蛭素空间结构及其与凝血酶的相互作用．采用基因定点突变和随机突变的方法得到两个重组水蛭素突变体，并从抗酰胺水解活性，抗凝血酶活力和稳定性三个方面，比较研究了重组水蛭素ｒＨＶ２中４７... 以基因突变结合动力学分析的方法研究了水蛭素空间结构及其与凝血酶的相互作用．采用基因定点突变和随机突变的方法得到两个重组水蛭素突变体，并从抗酰胺水解活性，抗凝血酶活力和稳定性三个方面，比较研究了重组水蛭素ｒＨＶ２中４７位和１１位两个氨基酸残基对其稳定性和抑制能力的影响．将ｒＨＶ２中Ｇｌｎ１１和Ａｓｎ４７分别突变为Ｈｉｓ１１和Ｌｙｓ４７后，ｒＨＶ２－Ｈ１１生物活力降低３０％，ｒＨＶ２－Ｋ４７生物活力提高６１％．测定抑制常数Ｋｉ表明，ｒＨＶ２－Ｈ１１突变体Ｋｉ值升高１４倍，ｒＨＶ２－Ｋ４７突变体Ｋｉ值降低１４倍，两个突变体的热稳定性均有所增强，ｒＨＶ２－Ｈ１１在酸性和碱性条件的稳定性降低．分析实验结果，可以认为：①４７位的Ｌｙｓ可能是通过氢键和静电两种作用力同时影响着水蛭素的三维结构和其与凝血酶的结合．②１１位氨基酸可能是水蛭素分子中另一个重要位点． 展开更多

关键词 重组 水蛭素 基因突变 动力学 稳定性

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抗生素和干扰素

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第5期64-70,共7页

关键词 基因克隆 乳链菌肽 融合蛋白 水蛭素 链霉菌属 编码区 BamHI 启动子 人淋巴毒素 程云

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