目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒（VZV）糖蛋白E（g E）的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G...目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒（VZV）糖蛋白E（g E）的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2＋-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。展开更多
基金the National Natural Science Foundation of China(81801295).
文摘目的:水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)是最常见引起病毒性脑膜炎/脑炎的致病菌之一.VZV脑膜炎/脑炎早期临床表现和脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)变化缺乏特异性,容易被误诊为其他病毒性脑炎或结核性脑膜炎。因此本研究探讨VZV脑膜炎/脑炎与中枢神经系统(central nervous system,CNS)单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的临床特征、CSF结果及CSF细胞因子水平的区别。方法:回顾性研究2018年1月至2021年6月中南大学湘雅三医院神经内科细胞学实验室确诊的157例CNS感染患者的医疗记录,其中感染HSV 49例(HSV-145例,HSV-24例),VZV 55例,MTB 53例。收集的3组数据,包括人口学特征、实验室结果、影像学结果和疾病结局。对68例(13例HSV,22例VZV和33例MTB)患者CSF中的12个细胞因子(IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-17,IFN-γ,IFN-α,TNF-α)水平进行检测。比较3组患者的临床和实验室资料。结果:3组患者最常见的临床表现是发热、头痛、呕吐和颈部僵硬。HSV和VZV CNS疾病的临床表现相似。与HSV和MTB组相比,VZV组发热(63.6%vs 87.8%vs 96.2%,P<0.001)和意识改变(14.5%vs 26.5%vs 47.2%,P=0.004)更少见。VZV组有7例(12.7%)患者出现皮肤带状疱疹。VZV组(230×10^(6)/mL)和MTB组(276×10^(6)/mL)CSF白细胞计数显著高于HSV组(87×10^(6)/mL,P=0.002),此外,VZV组CSF蛋白水平显著高于HSV组(1034 mg/L vs 694 mg/L,P=0.011),但低于MTB组(1744 mg/L,P<0.001)。所测细胞因子中,3组IL-6(VZV vs HSV vs MTB:2855.93 pg/mL vs 2128.26 pg/mL vs 354.77 pg/mL,P=0.029)、IL-8(VZV vs HSV vs MTB:4001.46 pg/mL vs 1578.11 pg/mL vs 1023.25 pg/mL,P=0.046)水平比较差异有统计学意义,其中VZV组IL-6和IL-8水平显著升高。事后分析显示:VZV组的IL-6和IL-8明显高于MTB组(分别为P=0.002和P=0.035),但与HSV组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:VZV脑膜炎/脑炎表现为CSF高细胞数和高蛋白质,这改变了我们对病毒性脑炎CSF谱的传统认识。VZV脑膜炎/脑炎患者CSF IL-6和IL-8水平升高,提示这些患者的炎症反应更为强烈。
文摘目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒（VZV）糖蛋白E（g E）的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2＋-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。
