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氯离子通道阻滞剂对人RPE细胞增生抑制作用的实验研究
被引量：
1
1
作者
郑雅娟
辛华
+1 位作者
张文松
王丹
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期344-347,共4页
目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3苯丙氨基)苯甲酸(NPPB)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生中的作用。方法培养人RPE细胞株,ARPE-19细胞;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的NPPB对ARPE-19细胞增生的影响;利用血清饥饿法对A...
目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3苯丙氨基)苯甲酸(NPPB)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生中的作用。方法培养人RPE细胞株,ARPE-19细胞;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的NPPB对ARPE-19细胞增生的影响;利用血清饥饿法对ARPE-19细胞进行细胞周期同步化,并通过流式细胞仪加以确定;进行核仁染色,观察NPPB对ARPE-19细胞周期进行中核仁变化的影响。结果NPPB浓度依赖性地抑制了ARPE-19细胞的增生;核仁染色显示了ARPE-19细胞核仁数量和形态随着细胞周期进行而发生变化,NPPB使ARPE-19细胞核仁萎缩,抑制核仁形成,使细胞处于静息状态。结论氯离子通道阻滞剂NPPB能够抑制静止期的ARPE-19细胞进入细胞周期,从而抑制ARPE-19细胞的增生。
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关键词
视网膜色素上皮细胞
增生
核仁
氯离子通道阻滞剂
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职称材料
氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响
被引量：
1
2
作者
尹元
郑雅娟
+1 位作者
王霁雪
梁巍
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期12-16,共5页
背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不...
背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚。目的探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×10^6个／ml的密度接种于96孔培养板，将不同浓度（10、50、100μmol／L）的NPPB分别加入小梁细胞培养基中，通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度（A）值表示；采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期。将100mg／L5-氟尿嘧啶（5-Fu）加入培养的细胞中，而另-组培养的细胞中加入100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB，用AnnexinV—PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况；罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位（Adam），分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响。结果3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义（F=7．230，P=0．006），50Izmol／L、100Fxmol／LNPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10μmol／LNPPB组，50μmol／LNPPB组、100μmol／LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义（t=1．610，P=0．025；t=12．270，P=0．001）。小梁细胞培养基中加入NPPB48h后，G0／G1期的细胞比例增多，S期细胞比例减少，各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。用5-FU作用24h及48h后，100mg／L5-Fu组和100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加（t24h=2．130，P=0．023；t48h=4．810，P=0．011）；100mg／L5-Fu＋100μmol／LNPPB组细胞凋亡率明显高于100mg／L5-Fu组，差异均有统计学意义（t24h=1．980，P=0．037；t48h=1．290，P=0．028），小梁细胞线粒体膜电位降低，差异均有统计学意义（t24h=1．580，P=0．029；F48h=6．200，P=0．015）。结论氯离子通道阻滞剂NPPB可抑制小梁细胞增生，抑制小梁细胞通过G1／S期限制点进入s期；NPPB对5-Fu诱导的小梁细胞凋亡有促进作用，与内源性线粒体凋亡通路相关。
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关键词
氯离子通道阻滞剂
5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸
小梁细胞
凋亡
增生
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职称材料
氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF-β1诱导HConF细胞纤维化中的作用及其机制
被引量：
2
3
作者
孙丽霞
李英俊
+2 位作者
崔仁哲
卢迪
郑雅娟
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期411-418,共8页
目的观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用,并进一步探索其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出TGF-β1最适作用时间和N...
目的观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用,并进一步探索其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出TGF-β1最适作用时间和NPPB最适作用浓度,将细胞分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1+NPPB组,CCK-8法检测各组HConF细胞增生值(A),采用流式细胞仪检测各组HConF细胞周期,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞迁移情况。采用Western blot和荧光定量PCR法检测HConF细胞向肌成纤维细胞转化的标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达,同时用Western blot法检测PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平。结果TGF-β1可促进细胞增生,并呈时间依赖性;其中TGF-β1作用后48h和72h细胞A值比较,差异无统计学意义(P=0.064),选择48h作为TGF-β1作用的最适时间。NPPB抑制HConF细胞增生作用呈浓度依赖性;与对照组比较,50μmol/L和100μmol/LNPPB组细胞增生值明显降低,差异均有统计学意义(P=0.020、0.000),选择100μmol/L作为NPPB的最适作用浓度。TGF-β1+NPPB组细胞A值、相对迁移面积和迁移细胞数较TGF-β1处理组下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);TGF-β1处理组G1期细胞比例较对照组和TGF-β1+NPPB组明显减少,S期和G2/M期细胞比例增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TGF-β1处理组α-SMA、细胞外基质COL-Ⅰ和FN的蛋白及mRNA相对表达量均明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05);TGF-β1处理组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NPPB可能通过抑制PI3K和Akt磷酸化来抑制TGF-β1诱导的HConF增生、迁移、分化及细胞外基质合成等纤维化过程。
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关键词
氯
离子通道
滤过泡瘢痕化
氯离子通道阻滞剂
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职称材料
题名
氯离子通道阻滞剂对人RPE细胞增生抑制作用的实验研究
被引量：
1
1
作者
郑雅娟
辛华
张文松
王丹
机构
吉林大学第二医院眼科
吉林大学中日联谊医院
出处
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期344-347,共4页
基金
国家自然科学基金(30571993)
教育部留学回国人员科研启动基金(2004176)资助
文摘
目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3苯丙氨基)苯甲酸(NPPB)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生中的作用。方法培养人RPE细胞株,ARPE-19细胞;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的NPPB对ARPE-19细胞增生的影响;利用血清饥饿法对ARPE-19细胞进行细胞周期同步化,并通过流式细胞仪加以确定;进行核仁染色,观察NPPB对ARPE-19细胞周期进行中核仁变化的影响。结果NPPB浓度依赖性地抑制了ARPE-19细胞的增生;核仁染色显示了ARPE-19细胞核仁数量和形态随着细胞周期进行而发生变化,NPPB使ARPE-19细胞核仁萎缩,抑制核仁形成,使细胞处于静息状态。结论氯离子通道阻滞剂NPPB能够抑制静止期的ARPE-19细胞进入细胞周期,从而抑制ARPE-19细胞的增生。
关键词
视网膜色素上皮细胞
增生
核仁
氯离子通道阻滞剂
Keywords
retinal pigment epithelium cells
proliferation
nucleolus
chloride channel blocker
分类号
R774.1 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响
被引量：
1
2
作者
尹元
郑雅娟
王霁雪
梁巍
机构
吉林大学第二医院眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期12-16,共5页
基金
基金项目：国家自然科学基金项目（30973274）
文摘
背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚。目的探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×10^6个／ml的密度接种于96孔培养板，将不同浓度（10、50、100μmol／L）的NPPB分别加入小梁细胞培养基中，通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度（A）值表示；采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期。将100mg／L5-氟尿嘧啶（5-Fu）加入培养的细胞中，而另-组培养的细胞中加入100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB，用AnnexinV—PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况；罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位（Adam），分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响。结果3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义（F=7．230，P=0．006），50Izmol／L、100Fxmol／LNPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10μmol／LNPPB组，50μmol／LNPPB组、100μmol／LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义（t=1．610，P=0．025；t=12．270，P=0．001）。小梁细胞培养基中加入NPPB48h后，G0／G1期的细胞比例增多，S期细胞比例减少，各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。用5-FU作用24h及48h后，100mg／L5-Fu组和100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加（t24h=2．130，P=0．023；t48h=4．810，P=0．011）；100mg／L5-Fu＋100μmol／LNPPB组细胞凋亡率明显高于100mg／L5-Fu组，差异均有统计学意义（t24h=1．980，P=0．037；t48h=1．290，P=0．028），小梁细胞线粒体膜电位降低，差异均有统计学意义（t24h=1．580，P=0．029；F48h=6．200，P=0．015）。结论氯离子通道阻滞剂NPPB可抑制小梁细胞增生，抑制小梁细胞通过G1／S期限制点进入s期；NPPB对5-Fu诱导的小梁细胞凋亡有促进作用，与内源性线粒体凋亡通路相关。
关键词
氯离子通道阻滞剂
5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸
小梁细胞
凋亡
增生
Keywords
Chloride channel inhibitor
5-Nitro-2-（ 3-styrene-acrylic amine） benzoic acid
Trabecularmeshwork cell
Apoptosis
Proliferation
分类号
R775 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF-β1诱导HConF细胞纤维化中的作用及其机制
被引量：
2
3
作者
孙丽霞
李英俊
崔仁哲
卢迪
郑雅娟
机构
延边大学附属医院眼科
吉林大学第二医院眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期411-418,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81760171).
文摘
目的观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用,并进一步探索其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出TGF-β1最适作用时间和NPPB最适作用浓度,将细胞分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1+NPPB组,CCK-8法检测各组HConF细胞增生值(A),采用流式细胞仪检测各组HConF细胞周期,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞迁移情况。采用Western blot和荧光定量PCR法检测HConF细胞向肌成纤维细胞转化的标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达,同时用Western blot法检测PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平。结果TGF-β1可促进细胞增生,并呈时间依赖性;其中TGF-β1作用后48h和72h细胞A值比较,差异无统计学意义(P=0.064),选择48h作为TGF-β1作用的最适时间。NPPB抑制HConF细胞增生作用呈浓度依赖性;与对照组比较,50μmol/L和100μmol/LNPPB组细胞增生值明显降低,差异均有统计学意义(P=0.020、0.000),选择100μmol/L作为NPPB的最适作用浓度。TGF-β1+NPPB组细胞A值、相对迁移面积和迁移细胞数较TGF-β1处理组下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);TGF-β1处理组G1期细胞比例较对照组和TGF-β1+NPPB组明显减少,S期和G2/M期细胞比例增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TGF-β1处理组α-SMA、细胞外基质COL-Ⅰ和FN的蛋白及mRNA相对表达量均明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05);TGF-β1处理组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NPPB可能通过抑制PI3K和Akt磷酸化来抑制TGF-β1诱导的HConF增生、迁移、分化及细胞外基质合成等纤维化过程。
关键词
氯
离子通道
滤过泡瘢痕化
氯离子通道阻滞剂
Keywords
Chloride channel
Filtering bleb scarring
Chloride channel blocker
分类号
R775 [医药卫生—眼科]
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1
氯离子通道阻滞剂对人RPE细胞增生抑制作用的实验研究
郑雅娟
辛华
张文松
王丹
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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职称材料
2
氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响
尹元
郑雅娟
王霁雪
梁巍
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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职称材料
3
氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF-β1诱导HConF细胞纤维化中的作用及其机制
孙丽霞
李英俊
崔仁哲
卢迪
郑雅娟
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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