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小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析
被引量：
2
1
作者
许炼
高焕娟
+3 位作者
潘志针
朱育菁
陈清西
刘波
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1272-1280,共9页
【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合...
【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。
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关键词
小菜蛾
氨肽酶基因
基因
分析
原核表达
酶活性
配体印迹
同源建模
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职称材料
家蚕氨肽酶N家族基因在5龄幼虫中肠组织的表达分析
被引量：
2
2
作者
王猛
程晨
+3 位作者
郝碧芳
徐安英
沈兴家
黄金山
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期689-694,共6页
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一种偏好水解蛋白质或寡肽N端中性氨基酸的酶,在鳞翅目昆虫中主要分布于中肠上皮细胞的刷状缘囊膜上,是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体(Cry)毒素的重要受体蛋白。为了研究家蚕APN...
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一种偏好水解蛋白质或寡肽N端中性氨基酸的酶,在鳞翅目昆虫中主要分布于中肠上皮细胞的刷状缘囊膜上,是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体(Cry)毒素的重要受体蛋白。为了研究家蚕APN家族基因的表达特征,运用Real-time PCR技术检测分析该家族基因在不同家蚕品种幼虫中肠组织的表达差异以及同一家蚕品种幼虫中肠组织中该家族基因各个成员的表达丰度。在所有供试家蚕品种的幼虫中肠组织均可检测到APN家族基因的表达,但不同化性家蚕品种间APN基因的表达水平存在显著差异(P<0.05),而相同化性品种间的差异较小(P>0.05);在同一家蚕品种幼虫中肠组织中,APN2、APN4、APN5基因的表达量较高,而APN1及APN3基因的表达量较低。研究结果有助于进一步研究家蚕APN家族基因的作用机制,并为家蚕抗Bt品种的选育提供理论依据。
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关键词
家蚕
氨肽酶
N
基因
中肠组织
荧光定量PCR
品种
化性
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职称材料
题名
小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析
被引量：
2
1
作者
许炼
高焕娟
潘志针
朱育菁
陈清西
刘波
机构
厦门大学生命科学学院
福建省农业科学院农业生物资源研究所
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1272-1280,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31371999,31370059)
文摘
【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。
关键词
小菜蛾
氨肽酶基因
基因
分析
原核表达
酶活性
配体印迹
同源建模
Keywords
Plutella xylostella
aminopeptidase （APN） gene
gene analysis
prokaryotic expression
enzyme activity
ligand blot
homology modeling
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
家蚕氨肽酶N家族基因在5龄幼虫中肠组织的表达分析
被引量：
2
2
作者
王猛
程晨
郝碧芳
徐安英
沈兴家
黄金山
机构
江苏科技大学
中国农业科学院蚕业研究所
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期689-694,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划"973"项目(No.2012CB1146-04)
江苏省自然科学基金项目(No.BK2011525)
江苏省教育厅科技项目(No.11KJB180002)
文摘
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一种偏好水解蛋白质或寡肽N端中性氨基酸的酶,在鳞翅目昆虫中主要分布于中肠上皮细胞的刷状缘囊膜上,是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体(Cry)毒素的重要受体蛋白。为了研究家蚕APN家族基因的表达特征,运用Real-time PCR技术检测分析该家族基因在不同家蚕品种幼虫中肠组织的表达差异以及同一家蚕品种幼虫中肠组织中该家族基因各个成员的表达丰度。在所有供试家蚕品种的幼虫中肠组织均可检测到APN家族基因的表达,但不同化性家蚕品种间APN基因的表达水平存在显著差异(P<0.05),而相同化性品种间的差异较小(P>0.05);在同一家蚕品种幼虫中肠组织中,APN2、APN4、APN5基因的表达量较高,而APN1及APN3基因的表达量较低。研究结果有助于进一步研究家蚕APN家族基因的作用机制,并为家蚕抗Bt品种的选育提供理论依据。
关键词
家蚕
氨肽酶
N
基因
中肠组织
荧光定量PCR
品种
化性
Keywords
Bombyx mori
Aminopeptidase N gene
Midgut tissue
Real-time PCR
Variety
Voltinism
分类号
S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析
许炼
高焕娟
潘志针
朱育菁
陈清西
刘波
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
家蚕氨肽酶N家族基因在5龄幼虫中肠组织的表达分析
王猛
程晨
郝碧芳
徐安英
沈兴家
黄金山
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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职称材料
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