米曲霉3042的液体培养特性及其产氨基酰化酶的特性研究 被引量：14

1

作者 王淑豪 宋正孝 +2 位作者 马忠海 元英进 袁淑敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第7期9-13,共5页

对液体培养的米曲霉（Aspergillusoryzae）3042所产生的氨基酰化酶胞内外分布及其酶的最适pH、温度和热稳定性进行了探讨。结果表明：米曲霉3042属于凝聚型菌株，当搅拌速率为90～120r／min时可获得较好的菌球；氨基酰化酶属于胞内酶，... 对液体培养的米曲霉（Aspergillusoryzae）3042所产生的氨基酰化酶胞内外分布及其酶的最适pH、温度和热稳定性进行了探讨。结果表明：米曲霉3042属于凝聚型菌株，当搅拌速率为90～120r／min时可获得较好的菌球；氨基酰化酶属于胞内酶，存在于细胞内部或分布于细胞壁上；菌体酶活最适pH为7．0，最适温度为55℃。 展开更多

关键词 米曲霉3042 液体培养 氨基酰化酶 凝聚型菌株

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米曲霉氨基酰化酶拆分DL-茶氨酸 被引量：9

2

作者 钱绍松 吴晓燕 +3 位作者 陈然 李加友 刘毅 焦庆才 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期537-540,共4页

DL 茶氨酸经乙酰化可生成N 乙酰DL 茶氨酸, 然后利用米曲霉氨基酰化酶拆分N 乙酰DL 茶氨酸可以获得L 茶氨酸。本文对氨基酰化酶酶促反应也进行了初步研究, 考察了反应温度、反应时间、pH值和底物浓度等因素对酶促反应的影响。实验表明,... DL 茶氨酸经乙酰化可生成N 乙酰DL 茶氨酸, 然后利用米曲霉氨基酰化酶拆分N 乙酰DL 茶氨酸可以获得L 茶氨酸。本文对氨基酰化酶酶促反应也进行了初步研究, 考察了反应温度、反应时间、pH值和底物浓度等因素对酶促反应的影响。实验表明, 转化温度40℃、转化时间30 h、pH为7 0和底物浓度0 2 mol/L时, 目的产物L 茶氨酸的产率最高。 展开更多

关键词 L-茶氨酸 N-乙酰-茶氨酸 米曲霉 拆分 氨基酰化酶

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米曲氨基酰化酶的纯化及固定化酶法拆分D,L-丙氨酸 被引量：10

3

作者 王晓平 刘一鸣 +2 位作者 王丽娟 张红缨 张今 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1998年第4期81-84,共4页

利用硫酸铵分级与双水相萃取结合的方法从米曲霉中提取米曲氨基酰化酶，并将其固定在ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５上，用于拆分Ｄ，Ｌ－丙氨酸。

关键词 氨基酰化酶 固定化酶法 丙氨酸 米曲霉 氨基酸

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氨基酰化酶与Cu(Ⅱ)相互作用的谱学研究 被引量：5

4

作者 郑学仿 王静云 +3 位作者 王园 安利佳 盖宏伟 胡皆汉 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期804-806,共3页

通过顺磁共振法、可见光谱法及酶活性测量研究从猪肾中提纯的氨基酰化酶 (Aminoacylase,简称ACY)在pH 4 0条件下与外加的Cu(Ⅱ )离子存在直接相互作用。结果发现 :外加Cu(Ⅱ )离子进入ACY活性中心位点 ,取代了活性中心位点的Zn(Ⅱ ) ,... 通过顺磁共振法、可见光谱法及酶活性测量研究从猪肾中提纯的氨基酰化酶 (Aminoacylase,简称ACY)在pH 4 0条件下与外加的Cu(Ⅱ )离子存在直接相互作用。结果发现 :外加Cu(Ⅱ )离子进入ACY活性中心位点 ,取代了活性中心位点的Zn(Ⅱ ) ,使酶活性下降。 展开更多

关键词 ESR谱 氨基酰化酶 Cu(Ⅱ) 相互作用 活性 铜(Ⅱ) 顺磁共振 可见光光谱

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固定化牛肾氨基酰化酶拆分法制备D-丙氨酸 被引量：7

5

作者 姚文兵 侯振清 +1 位作者 吴梧桐 金建勤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期297-300,共4页

研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分 DL-Ala制备 D-Ala及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明 ,固定化酶反应的最适 p H为 7.0 ,最适反应温度为 3 0～ 3 5℃ ;固定化酶拆分反应的酶量选择为 5mg/ ml,时空体... 研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分 DL-Ala制备 D-Ala及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明 ,固定化酶反应的最适 p H为 7.0 ,最适反应温度为 3 0～ 3 5℃ ;固定化酶拆分反应的酶量选择为 5mg/ ml,时空体积 SV=1 .0 ,在 p H 7.0 ,3 0℃条件下的全拆分底物浓度为 0 .1 ml/ L。固定化酶常温 1周内拆分率稳定 ,但对热不稳定 ,4 0℃条件下放置 3 0 min活力下降 3 0 %。 展开更多

关键词 D-丙氨酸 牛肾 氨基酰化酶拆分 固定化

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分子筛固定氨基酰化酶I的研究 被引量：11

6

作者 宋锡瑾 王杰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期617-620,共4页

以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用... 以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用性和米氏常数进行了测定;结果表明该载体适合氨基酰化酶I的固定,可以获得较高的酶活力,分子筛固定化酶的最适pH值、最适反应温度都有所拓宽。 展开更多

关键词 分子筛 氨基酰化酶Ⅰ 固定化 吸附 偶联

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猪肾和牛肾氨基酰化酶拆分DL-Ala及制备D-Ala的实验研究 被引量：8

7

作者 姚文兵 吴梧桐 +1 位作者 金建勤 曾峰玉 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期358-361,共4页

本文研究了各种影响酶促反应速度的因素对从猪、牛肾中分离得到的氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ的影响，结果表明，酶促反应的最适条件为：Ｎ－乙酰－ＤＬ－Ａｌａ的浓度为０．２ｍｏｌ／Ｌ，酶用量７００ｕ／ｍｍｏｌ底物... 本文研究了各种影响酶促反应速度的因素对从猪、牛肾中分离得到的氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ的影响，结果表明，酶促反应的最适条件为：Ｎ－乙酰－ＤＬ－Ａｌａ的浓度为０．２ｍｏｌ／Ｌ，酶用量７００ｕ／ｍｍｏｌ底物，反应温度３７℃，ｐＨ７．０，反应时间５ｈ。牛肾氨基酰化酶和猪肾氨基酰化酶的拆分率和Ｄ－Ａｌａ得率最高分别为９０％和８４％；８９．７％和６６．１％，表明牛肾氨基酰化酶的拆分率和得率均优于猪肾氨基酰化酶。 展开更多

关键词 氨基酰化酶 DL-Ala 牛肾 猪肾 拆分 制备

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氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸 被引量：2

8

作者 刘鹏刚 张飞 +2 位作者 刘均忠 李天童 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期345-347,359,共4页

用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:p... 用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。 展开更多

关键词 氨基酰化酶 固定化细胞 DL-丙氨酸 L-丙氨酸 D-丙氨酸 拆分 生物工程

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固定化米曲霉氨基酰化酶拆分DL-茶氨酸 被引量：3

9

作者 吴晓燕 刘茜 焦庆才 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第4期107-111,共5页

研究固定化米曲霉Aspergillus oryzae AS3.381氨基酰化酶细胞拆分DL-茶氨酸制备L-茶氨酸的最佳工艺条件。将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用固定化米曲霉细胞立体专一性去乙酰化,可以获得L-茶氨酸,并分析固定化条件对比酶活的... 研究固定化米曲霉Aspergillus oryzae AS3.381氨基酰化酶细胞拆分DL-茶氨酸制备L-茶氨酸的最佳工艺条件。将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用固定化米曲霉细胞立体专一性去乙酰化,可以获得L-茶氨酸,并分析固定化条件对比酶活的影响。结果显示:最适固定化条件为戊二醛浓度0.5%、交联时间2 h、温度55°C、pH8.0、底物0.2 mol/L、菌液比12 g菌体/100 mL戊二醛溶液,此时拆分率可达98%以上。菌体重复操作7批次,固定化细胞仍保留最高酶活的75%。与直接利用游离菌体转化相比,本法具有反应温度高、酶活高且稳定、能反复利用、酶活损失少等优点。 展开更多

关键词 L-茶氨酸 N-乙酰-DL-茶氨酸 氨基酰化酶 固定化细胞 光学拆分

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米曲霉氨基酰化酶的双水相萃取研究 被引量：4

10

作者 谢志东 何炳林 姜坪 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1993年第1期60-64,共5页

本文利用聚乙二醇和磷酸盐组成的水溶液双相系统,从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取氨基酰化酶。通过实验对影响氨基酰化酶分配的各参数进行了研究,确定了最适体系:PEC-1540 10％(W/V),K_2HPO_418％(W/V),pH8.5;PEG-154010％(W/V),K_2... 本文利用聚乙二醇和磷酸盐组成的水溶液双相系统,从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取氨基酰化酶。通过实验对影响氨基酰化酶分配的各参数进行了研究,确定了最适体系:PEC-1540 10％(W/V),K_2HPO_418％(W/V),pH8.5;PEG-154010％(W/V),K_2HPO_412％(W/V),NaCl 0.5mol/L,pH8.5。二步萃取收率90％,纯化倍数9。为实验室和工业上采用双水相系统萃取氨基酰化酶提供了一个新方法。 展开更多

关键词 米曲霉 氨基酰化酶 双水相系统

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水稻氨基酰化酶的分离纯化与性质分析 被引量：4

11

作者 施华芳 黄伟达 +1 位作者 李宏杰 孙崇荣 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第1期54-58,共5页

氨基酰化酶（N－acylamino－acidamidohydrolase或acylaseⅠ，EC3．5．1．14）是专一水解N-酰基化L-氨基酸的蛋白酶．从水稻黄化苗得到的抽提液，经过硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤，纯化得到了该酶，比活达到1... 氨基酰化酶（N－acylamino－acidamidohydrolase或acylaseⅠ，EC3．5．1．14）是专一水解N-酰基化L-氨基酸的蛋白酶．从水稻黄化苗得到的抽提液，经过硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤，纯化得到了该酶，比活达到100U／mg蛋白，在无还原剂存在的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显单一条带，分子量为40kD．而凝胶层析分析表明活性分子的分子量约90kD，因此可推测它的活性分子由两个亚基通过非共价键作用组合而成．进一步研究此酶的性质，在所测的五种乙酰化氨基酸中，最适底物为N-乙酰-L-甲硫氨酸．该酶的最适温度为50℃，最适pH为7．0～8．0．Co2＋和Zn2＋能增强酶活性，但烷基化试剂对酶活性没有影响。 展开更多

关键词 水稻 氨基酰化酶 分离 纯化 性质

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L-氨基酰化酶产生菌的筛选及其固态发酵工艺 被引量：3

12

作者 房峻 李江华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期71-74,共4页

从13株米曲霉菌株中筛选到一株产氨基酰化酶活力较高的米曲霉(Aspergillus oryzae)WO607,以米曲霉WO607为生产菌固态发酵生产氨基酰化酶,较适的培养基组成和培养条件为:麸皮7.0 g,豆饼粉3.0 g,蛋白胨0.3 g,水11 mL,pH值6.5,发酵温度28℃... 从13株米曲霉菌株中筛选到一株产氨基酰化酶活力较高的米曲霉(Aspergillus oryzae)WO607,以米曲霉WO607为生产菌固态发酵生产氨基酰化酶,较适的培养基组成和培养条件为:麸皮7.0 g,豆饼粉3.0 g,蛋白胨0.3 g,水11 mL,pH值6.5,发酵温度28℃,发酵周期约48 h.在此条件下,米曲霉WO607的氨基酰化酶产率为400 U/g左右. 展开更多

关键词 氨基酰化酶 米曲霉 筛选 固态发酵

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培养基组成对米曲霉产氨基酰化酶的影响 被引量：2

13

作者 王霞 刘丽华 +2 位作者 张霞 王祎 张同祥 《化学与生物工程》 CAS 2010年第4期67-70,共4页

氨基酰化酶是一类能够水解N-酰基-DL-氨基酸上酰胺键的酶。通过单因素实验和正交实验,对米曲霉产氨基酰化酶的培养基组成进行了优化,以提高其产量。确定较优培养基组成为:麸皮2%、尿素1.5%、磷酸二氢钠0.3%、硫酸镁0.35%、Tween-80 0.1%... 氨基酰化酶是一类能够水解N-酰基-DL-氨基酸上酰胺键的酶。通过单因素实验和正交实验,对米曲霉产氨基酰化酶的培养基组成进行了优化,以提高其产量。确定较优培养基组成为:麸皮2%、尿素1.5%、磷酸二氢钠0.3%、硫酸镁0.35%、Tween-80 0.1%,在此培养基上得到的氨基酰化酶单位酶活可提高到440.51μmol.g-1.h-1。 展开更多

关键词 米曲霉 氨基酰化酶 正交实验 培养基

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稀土和硫酸二乙酯联合诱变米曲霉产氨基酰化酶的研究 被引量：2

14

作者 刘丽华 刘丽萍 +1 位作者 李文彬 王霞 《化学与生物工程》 CAS 2009年第11期43-46,共4页

为获得高产氨基酰化酶的米曲霉菌株,选用稀土硝酸镧和硫酸二乙酯对米曲霉菌株CICC-2339进行联合诱变,经摇瓶发酵筛选到氨基酰化酶高产菌株SDESLa,其酶活为39.63μmol.g-1.h-1,较出发菌株提高了39.50%,诱变效果显著。

关键词 米曲霉 氨基酰化酶 联合诱变

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微水相中氨基酰化酶催化拆分反应的研究 被引量：1

15

作者 刘隽 郑忠亮 +1 位作者 左振宇 邹国林 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期143-145,共3页

研究了氨基酰化酶在微水相中催化拆分N-乙酰-DL-苯丙氨酸的反应。结果表明,氨基酰化酶在有机介质中能保持较高的活性,其活性和反应体系中溶剂的疏水性(lgP)、水含量、pH、温度等密切相关。在适当控制以上条件的情况下,酶活力随lgP的增... 研究了氨基酰化酶在微水相中催化拆分N-乙酰-DL-苯丙氨酸的反应。结果表明,氨基酰化酶在有机介质中能保持较高的活性,其活性和反应体系中溶剂的疏水性(lgP)、水含量、pH、温度等密切相关。在适当控制以上条件的情况下,酶活力随lgP的增高而增大;在异戊醇为介质的反应体系中,水含量为3·2%、pH为7·0、温度为64℃左右的条件下,酶有最大的催化活力。 展开更多

关键词 氨基酰化酶 微水相 拆分反应

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米曲霉氨基酰化酶纯化方法的研究 被引量：2

16

作者 张媛媛 张伟国 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2006年第5期46-48,54,共4页

比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果。分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化,结果发现:有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法。采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U/mg,纯... 比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果。分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化,结果发现:有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法。采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U/mg,纯化倍数为3.26;通过乙醇二次沉淀,得到的酶液比酶活为93.22U/mg,纯化倍数为3.10,而采用盐析法纯化的酶液的比酶活为56.01U/mg,纯化倍数为2.06。从酶的纯化效果方面考虑,丙酮沉淀法最佳,但从工业生产的可行性方面考虑,乙醇沉淀法较好。 展开更多

关键词 氨基酰化酶 硫酸铵沉淀 乙醇沉淀 丙酮沉淀

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氨基酰化酶Ⅰ的必需半胱氨酸巯基 被引量：4

17

作者 周海梦 王希成 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第6期702-706,共5页

本文用DTNB和IAM修饰了猪肾氨基酰化酶Ⅰ的半胱氨酸巯基,用Koshland和邹承鲁作图法定量处理的结果都表明,酶分子中有二个巯基为酶的必需巯基。

关键词 酶 氨基酰化酶 必需基团 化学修饰

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聚氨酯泡沫塑料固定氨基酰化酶Ⅰ的研究 被引量：1

18

作者 宋锡瑾 王杰 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期562-564,594,共4页

以聚醚多元醇和甲苯二异氰酸酯(TDI)为原料,选用氨基酰化酶I作为模型酶,采用一步发泡法,将酶固定在软质聚氨酯泡沫塑料(FPUF)上,并对其进行表征.研究结果表明,在发泡过程中加入一定量的惰性蛋白质,对酶蛋白有一定的屏蔽效果,降低了被TD... 以聚醚多元醇和甲苯二异氰酸酯(TDI)为原料,选用氨基酰化酶I作为模型酶,采用一步发泡法,将酶固定在软质聚氨酯泡沫塑料(FPUF)上,并对其进行表征.研究结果表明,在发泡过程中加入一定量的惰性蛋白质,对酶蛋白有一定的屏蔽效果,降低了被TDI损伤的概率,客观上对酶分子起到保护作用,使固定化后的酶活力收率有所提高.测得FPUF对蛋白质的负载率高达100%,固定化酶活力收率为81.03%,该固定化酶的最适pH值为6.8,与最适pH值为7的酶液相比,略向酸性偏移;最适反应温度与游离酶相似,在50～70℃.将固定化酶用于拆分乙酰-DL-甲硫氨酸的试验,体现了较好的连续使用稳定性,其半衰期为404.3 min. 展开更多

关键词 聚氨酯泡沫塑料 氨基酰化酶Ⅰ 固定化 乙酰-DL-甲硫氨酸

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截流荧光法研究米曲霉氨基酰化酶的快速胍变性动力学 被引量：1

19

作者 王道宾 姜坪 +2 位作者 何炳林 林华宽 陈荣悌 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第5期571-577,共7页

用荧光光谱法、截流荧光法和酶活力测定法研究了在盐酸胍溶液中米曲霉氨基酰化酶变性动力学。我们发现在4.8mol/L盐酸胍溶液作用下(0.05mol/L磷酸缓冲溶液,pH7.4,25℃),氨基酰化酶二聚体解离成单亚基过程是一个十分快速的过程,反应速率... 用荧光光谱法、截流荧光法和酶活力测定法研究了在盐酸胍溶液中米曲霉氨基酰化酶变性动力学。我们发现在4.8mol/L盐酸胍溶液作用下(0.05mol/L磷酸缓冲溶液,pH7.4,25℃),氨基酰化酶二聚体解离成单亚基过程是一个十分快速的过程,反应速率常数k为3361l/s,即约需3ms时间完成;而单亚基分子的构象变化需要约20min方能到达平衡态,这是一个逐渐变化的缓慢过程。酶分子在胍作用下的失活现象同酶分子的结构变化紧密相关,在胍浓度大于4mol/L时酶完全失活。在高浓度盐酸胍下酶失活主要是因为酶二聚体迅速解离成单亚基的过程和单亚基构象逐渐变化的缓慢过程。双亚基解离常数大小标志着酶分子亚基间作用力的强弱。 展开更多

关键词 米曲霉 氨基酰化酶 截流荧光法

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大肠杆菌氨基酰化酶拆分-DL-Met的研究 被引量：2

20

作者 田宏现 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第7期34-37,53,共5页

报道了利用大肠杆菌氨基酰化酶Ⅰ拆分消旋体生产L氨基酸的研究结果。大肠杆菌氨基酰化酶Ⅰ ,在培养 2 0～ 2 2小时 ,酶活力可达到 89.2 μmol/ml·h- 1。用它拆分DL Met ,其最适反应温度为 6 0℃ ,最适 pH值为 7.0 ,最适底物浓度为 ... 报道了利用大肠杆菌氨基酰化酶Ⅰ拆分消旋体生产L氨基酸的研究结果。大肠杆菌氨基酰化酶Ⅰ ,在培养 2 0～ 2 2小时 ,酶活力可达到 89.2 μmol/ml·h- 1。用它拆分DL Met ,其最适反应温度为 6 0℃ ,最适 pH值为 7.0 ,最适底物浓度为 0 .2 5～ 0 .2 75mol/L ,催化动力学过程不符合米式方程。 0 .0 4mol /L的Co2 + 对酶有较好的激活作用 ,活力提高 展开更多

关键词 大肠杆菌 氨基酰化酶 L-氨基酸 拆分 蛋氨酸消旋体 酶活力 米式方程 催化动力学 工业化生产

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