酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ在乳腺癌组织中的表达水平及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响

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作者 谷静 闫雷 黄剑 《临床检验杂志》 2025年第3期227-232,共6页

目的 探讨酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)在乳腺癌组织中的表达水平及其对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测96例乳腺癌患者癌组织中YWHAZ基因的表达水平... 目的 探讨酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)在乳腺癌组织中的表达水平及其对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测96例乳腺癌患者癌组织中YWHAZ基因的表达水平;采用Pearson法分析癌组织中YWHAZ的表达水平与患者临床病理参数及预后的关系;通过CCK-8法、[JP2]细胞划痕试验、Transwell试验验证下调YWHAZ对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,采用Western blot检测上皮-间[JP]质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达水平的变化。结果 三阴性乳腺癌(2.659±0.214,t=2.815,P=0.012)和非三阴性乳腺癌(1.822±0.165,t=5.079,P=0.001)患者癌组织中YWHAZ的表达水平较癌旁组织均显著上调;乳腺癌组织中YWHAZ的表达水平与血管浸润、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、病理分型以及复发情况有关(P<0.05);在乳腺癌TNM[JP1]Ⅰ[JP]~[JP1]Ⅳ[JP]期患者中,高水平YWHAZ患者的无复发生存率(χ^(2)=31.10,P<0.0001)和总体生存率(χ^(2)=18.99,P<0.0001)较低水平YWHAZ患者均显著缩短;YWHAZ水平是乳腺癌患者预后较差的独立危险因素;下调YWHAZ能够抑制MCF-7细胞增殖(F=10.73,P=0.0004)、迁移(t=20.88,P=0.0023)和侵袭(t=13.72,P=0.0002)能力;Western blot证实下调YWHAZ表达后,E-cadherin蛋白水平升高(4.478±0.832,t=8.45,P=0.0137),但Vimentin蛋白水平下调(0.549±0.143,t=6.86,P=0.0206)。结论 YWHAZ异常高表达与乳腺癌发生、发展以及不良预后密切相关,下调YWHAZ能够抑制乳腺癌细胞系MCF-7增殖、迁移、侵袭以及EMT进展。 展开更多

关键词 乳腺癌 酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ 迁移 侵袭 上皮-间质转化

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犬尿氨酸3单加氧酶抑制剂对慢性脑低灌注大鼠的认知功能影响及机制研究 被引量：1

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作者 王荣杰 韩彦青 +2 位作者 王敏 王志荣 吴慧慧 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期298-301,共4页

目的观察犬尿氨酸3单加氧酶(KMO)抑制剂对慢性脑低灌注大鼠模型认知功能的影响及其相关代谢产物变化情况。方法选取成年健康雄性SD大鼠45只,随机分成假手术组、手术组、抑制剂组,每组15只。手术组和抑制剂组行血管性认知障碍模型制备。... 目的观察犬尿氨酸3单加氧酶(KMO)抑制剂对慢性脑低灌注大鼠模型认知功能的影响及其相关代谢产物变化情况。方法选取成年健康雄性SD大鼠45只,随机分成假手术组、手术组、抑制剂组,每组15只。手术组和抑制剂组行血管性认知障碍模型制备。假手术组和手术组生理盐水灌胃,抑制剂组KMO抑制剂灌胃。Western Blot检测血细胞及海马区脑组织KMO活性。结果与手术组比较,抑制剂组第1、2、4、5天逃避潜伏期时间明显缩短,平台象限游泳距离百分比明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,手术组大鼠血细胞和海马区KMO活性明显升高(0.297±0.012 vs 0.147±0.017,0.880±0.029 vs 0.690±0.035,P<0.05);抑制剂组大鼠血细胞KMO活性明显低于手术组(0.177±0.023 vs 0.297±0.012,P<0.05)。与手术组比较,抑制剂组大鼠血清和海马区犬尿喹啉酸水平明显升高,大鼠血清KMO、3-羟基犬尿氨酸及血清和海马区喹啉酸水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论KMO抑制剂可改善血管性认知障碍大鼠的认知功能,机制可能是升高犬尿喹啉酸,降低喹啉酸实现的。 展开更多

关键词 犬尿氨酸3-单加氧酶 认知障碍 犬尿烯酸 海马 结扎术

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犬尿喹啉酸及3-羟基犬尿氨酸与阿尔茨海默病的相关性研究 被引量：1

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作者 王晓丹 刘帅 +3 位作者 张莹 相蕾 刘萍 纪勇 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期855-857,共3页

目的探讨犬尿氨酸(KYN)通路主要代谢产物犬尿喹啉酸(KYNA)和3-羟基犬尿氨酸(3-HK)与AD的关系,以及KYN通路限速酶犬尿氨酸3-单加氧酶(KMO)基因多态性与AD的相关性。方法选取AD患者198例为AD组和健康体检者192例为对照组,采用简易智能状... 目的探讨犬尿氨酸(KYN)通路主要代谢产物犬尿喹啉酸(KYNA)和3-羟基犬尿氨酸(3-HK)与AD的关系,以及KYN通路限速酶犬尿氨酸3-单加氧酶(KMO)基因多态性与AD的相关性。方法选取AD患者198例为AD组和健康体检者192例为对照组,采用简易智能状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、日常生活活动能力量表(ADL)、临床痴呆评定量表(CDR)评估,检测各组KMOrs2275163、rs1053230等位基因频率和基因型频率。结果AD组MMSE和MoCA评分明显低于对照组,ADL和CDR评分明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。AD组血浆KYN水平明显低于对照组,KYNA、3-HK及3-HK/KYN明显高于对照组[(1.2±0.2)mmol/L vs(1.3±0.2)mmol/L,P=0.043;(40.0±8.8)nmol/L vs(28.4±9.2)nmol/L,P=0.036;(108.5±14.6)nmol/L vs(35.2±5.6)nmol/L,P=0.011;(94.3±11.9)vs(28.9±9.5),P=0.016]。对照组与AD组rs2275163、rs1053230等位基因频率及基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论KYN通路代谢产物水平在AD患者中发生变化,在AD发病过程中可能发挥作用,可能成为AD诊断的血清学标志物。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 犬尿氨酸 犬尿氨酸3-单加氧酶 基因频率

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Arg188Gln(G/A)突变对犬尿氨酸酶活性的影响

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作者 沈杰 陈闻东 +2 位作者 姬开达 高平进 朱鼎良 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期643-648,共6页

目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性。方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU基因Arg188Gln位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和... 目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性。方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU基因Arg188Gln位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型和突变型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,蛋白质印迹法检测KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法检测HEK293细胞的KYNU活性。结果:野生型和突变型pcDNA-KYNU重组质粒在HEK293细胞中均能表达有活性的KYNU,KYNU的米氏常数分别为(9.833±0.513)μmol/L和(29.900±0.265)μmol/L,最大酶促反应速率分别为(0·700±0.096)nmol·mg^(-1)·min^(-1)和(0.084±0.003)nmol·mg^(-1)·min^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:Arg188Gln(G/A)突变可以减弱KYNU的活性。 展开更多

关键词 犬尿氨酸/分析 犬尿氨酸3-单加氧酶/分析 基因 突变 高血压/病 因学 载体蛋白质类

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异养硝化菌Alcaligenes faecalis strain NR的硝化性能及其酶活性 被引量：5

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作者 安强 赵彬 何义亮 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期774-779,共6页

从膜生物反应器的活性污泥中分离出一株异养硝化细菌Alcaligenes faecalis strain NR,采用柠檬酸三钠为碳源、氯化铵为氮源研究其硝化性能,通过超声波破碎法对调控其硝化过程的2个关键酶——氨单加氧酶(AMO)和羟胺氧化酶(HAO)进行粗提,... 从膜生物反应器的活性污泥中分离出一株异养硝化细菌Alcaligenes faecalis strain NR,采用柠檬酸三钠为碳源、氯化铵为氮源研究其硝化性能,通过超声波破碎法对调控其硝化过程的2个关键酶——氨单加氧酶(AMO)和羟胺氧化酶(HAO)进行粗提,考察影响其提取率的主要因素(功率、工作与间歇时间、菌液浓度和总工作时间),并采用正交实验进行优化.结果表明:菌株NR具有产生亚硝酸盐和硝酸盐的能力;在30℃和120 r/min的好氧条件下,当NH_4^+-N浓度为20、40和60 mg/L时,菌株NR在24 h内对NH_4^--N的去除率分别为94.8%、93.5%和94.5%;粗酶提取的最佳工作条件为菌液光密度1.876,总工作时间600 s,工作和间歇时间4、6 s,功率300 W;在好氧条件下,测得AMO和HAO的酶比活力分别为0.011和0.016 U/mg protein. 展开更多

关键词 异养硝化 氨单加氧酶 羟胺氧化酶 超声波破碎 硫酸铵分级沉淀

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转iaaM基因高衣分棉花新种质材料创制 被引量：12

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作者 王国宁 张桂寅 +7 位作者 吴立强 王省芬 李志坤 张艳 吴金华 柯会锋 孟成生 马峙英 《中国棉花》 2014年第7期27-31,共5页

通过配制9个杂交组合,将iaaM基因转育到综合性状较优的棉花（Gossypium hirsutum L.）品系中.对F1与F2的分析,证实iaaM基因能够显著改良衣分和马克隆值,同时对子指、铃重、单株结铃数等产量性状和纤维长度、纤维强度等纤维品质未造成负... 通过配制9个杂交组合,将iaaM基因转育到综合性状较优的棉花（Gossypium hirsutum L.）品系中.对F1与F2的分析,证实iaaM基因能够显著改良衣分和马克隆值,同时对子指、铃重、单株结铃数等产量性状和纤维长度、纤维强度等纤维品质未造成负面影响.通过系谱法选育获得6个衣分高、马克隆值优良的新品系,其衣分和马克隆值分别在43.23％～47.93％和3.76～4.20.试验为棉花育种改良提供了新的种质材料. 展开更多

关键词 棉花 色氨酸单加氧酶基因iaaM 高衣分

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植物生长素合成酶iaaM基因在烟草韧皮部的特异表达对其发育的影响 被引量：1

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作者 彭彦 王亚红 +1 位作者 黄丽华 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期32-35,F0003,共5页

为探讨生长素过度合成对植物韧皮部发育的影响,利用韧皮部特异表达的拟南芥蔗糖合成酶基因启动子与色氨酸单加氧酶基因(iaaM)重组,构建载体,通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法将其转入烟草,获得了转化的烟草植株。大多转基因烟草都表现出... 为探讨生长素过度合成对植物韧皮部发育的影响,利用韧皮部特异表达的拟南芥蔗糖合成酶基因启动子与色氨酸单加氧酶基因(iaaM)重组,构建载体,通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法将其转入烟草,获得了转化的烟草植株。大多转基因烟草都表现出叶片卷曲、植株生长异常的生长素过度表型。转基因烟草植株生长较野生型烟草(对照)植株明显迟缓,但其茎横切面韧皮部细胞显著增多,排列更加紧密整齐,木质部也较早开始分化。转基因烟草茎段有大量不定根分化,其根部则在韧皮部薄壁细胞处诱生大量根原基,在不定根上有大量侧根和根毛的分化。 展开更多

关键词 烟草 色氨酸单加氧酶基因 韧皮部 过表达

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海洋异养硝化菌株的快速筛选 被引量：1

8

作者 王光玉 孙洋洋 +1 位作者 陈雷 张健 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期61-66,共6页

目前尚缺乏有效地系统分离获得异养硝化菌的方法,为此,利用海洋养殖废水,采用前期自养后期异养的混养富集方法,获得具有异养脱氮能力的菌群.通过异养培养基分离获得纯菌株,利用特异性引物扩增分离菌株的氨单加氧酶(AMO)基因amoA和周质... 目前尚缺乏有效地系统分离获得异养硝化菌的方法,为此,利用海洋养殖废水,采用前期自养后期异养的混养富集方法,获得具有异养脱氮能力的菌群.通过异养培养基分离获得纯菌株,利用特异性引物扩增分离菌株的氨单加氧酶(AMO)基因amoA和周质硝酸盐还原酶(NAR)亚基基因napA,快速筛选具有潜在异养硝化或异养硝化好氧反硝化能力的菌株.通过氮素转化试验确认菌株的氮代谢特性.共分离获得异养细菌22株,其中11株细菌amoA基因呈阳性,7株细菌amoA基因和napA基因同时显阳性,氮素转化试验证明9株细菌具有异养脱氮能力. 展开更多

关键词 混养富集 异养硝化细菌 好氧反硝化细菌 氨单加氧酶基因(amoA) 周质硝酸盐还原酶亚基基因

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导入iaaM与ipt双价基因的转基因大豆检测及表达效果研究

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作者 皮照兴 廉玉利 李依娜 《辽宁工业大学学报（自然科学版）》 2016年第6期401-404,共4页

大豆是我国的重要的油料作物和经济作物,但其单产却远远低于欧美国家,因此提高其单产育种对国民的生产实践具有重要的意义。主要通过GUS组织化学染色分析、PCR检测、Southern blot检测技术对转iaa M与ipt双价基因的T1代转基因大豆进行检... 大豆是我国的重要的油料作物和经济作物,但其单产却远远低于欧美国家,因此提高其单产育种对国民的生产实践具有重要的意义。主要通过GUS组织化学染色分析、PCR检测、Southern blot检测技术对转iaa M与ipt双价基因的T1代转基因大豆进行检测,结果表明有5个株系iaa M和ipt基因以单拷贝的形式整合进了大豆基因组。采用半定量RT-PCR检测表明有4个株系外源双价基因高效表达。最后经产量性状考种结果表明:有3个株系的表现较好,其中株系4增产12.85%。 展开更多

关键词 转基因 色氨酸单加氧酶 异戊烯基转移酶 大豆

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烟草和拟南芥表皮毛中特异表达iaaM后的遗传效应 被引量：4

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作者 谢德雄 潘嘉立 +4 位作者 赵燕 黄丽华 黄妤 陈金军 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期284-289,共6页

利用色氨酸单加氧酶基因iaaM与拟南芥表皮毛特异表达GL2基因启动子重组后,构建了在植物表皮毛细胞中特异表达iaaM基因的重组基因载体;采用根癌农杆菌叶盘转化法将重组基因转化到烟草WS38(对照)中,筛选和鉴定出了6株转化烟草植株;将该重... 利用色氨酸单加氧酶基因iaaM与拟南芥表皮毛特异表达GL2基因启动子重组后,构建了在植物表皮毛细胞中特异表达iaaM基因的重组基因载体;采用根癌农杆菌叶盘转化法将重组基因转化到烟草WS38(对照)中,筛选和鉴定出了6株转化烟草植株;将该重组基因以根癌农杆菌花序浸渍法转至拟南芥(Colombia ecotype,对照),筛选出9株拟南芥转化植株,并对稳定转化的转基因植株表皮毛进行观察。结果表明:转基因烟草表皮毛较对照植株显著增长,其长度最长为对照的2.2倍,但转基因拟南芥表皮毛长度与对照间无显著差异。对烟草幼叶进行生长素浓度检测,转iaaM基因烟草吲哚乙酸含量显著提高,说明iaaM在烟草表皮毛细胞中表达,使其合成和积累更多的生长素;转基因拟南芥和烟草表皮毛密度均较对照显著增加,证明植物表皮毛发育模式中GL2表达的特异性受细胞内生长素的影响。 展开更多

关键词 烟草 拟南芥 色氨酸单加氧酶基因 表皮毛 生长素 遗传效应

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吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007吲哚-3-乙酰胺IAA合成功能及其依赖途径鉴定 被引量：2

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作者 刘婉慧 陈飞飞 +3 位作者 叶建仁 王朝恩 康熠 付欢欢 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期121-129,共9页

【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合... 【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以B.pyrrocinia JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】B.pyrrocinia JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明B.pyrrocinia JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。 展开更多

关键词 吡咯伯克霍尔德氏菌 吲哚-3-乙酸 吲哚-3-乙酰胺途径 色氨酸2-单加氧酶基因 吲哚乙酰胺水解酶基因

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