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反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响
被引量：
2
1
作者
周燕琼
张艳美
+4 位作者
高分飞
黄展勤
陈一村
郑燕珊
石刚刚
《中国临床药理学与治疗学》
CAS
CSCD
2015年第1期14-18,共5页
目的：研究反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN）抑制早期生长反应基因1（early growth response gene-1,Egr-1）表达对内皮细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤的影响。方法：采用新生大鼠进行心脏微血...
目的：研究反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN）抑制早期生长反应基因1（early growth response gene-1,Egr-1）表达对内皮细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤的影响。方法：采用新生大鼠进行心脏微血管内皮细胞（cardiac microvascular endothelial cells,CMECs）原代培养,取3~4代的CMECs建立缺氧复氧模型。细胞随机分为6组：对照（Con）组、缺氧复氧组（A/R）、溶剂组（LIP）、反义寡核苷酸转染组（AS）、正义寡核苷酸转染组（S）和错配寡核苷酸转染组（Sc）。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及内皮细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量,观察内皮细胞损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,观察内皮细胞炎症反应水平;Western-blot法检测培养内皮细胞中Egr-1的蛋白表达水平;显微镜下观察细胞形态学改变并计算存活率。结果：A/R造成内皮细胞内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF-α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予AS-ODN可抑制Egr-1蛋白的表达,减轻内皮细胞的损伤及炎症反应程度,提高细胞存活率。结论：AS-ODN抑制培养内皮细胞Egr-1的表达,并降低A/R损伤,提示Egr-1与缺氧复氧所致的心脏微血管内皮细胞损伤密切相关。
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关键词
反义寡核苷酸
心脏微血管内皮细胞
缺
氧复氧损伤
EGR-1
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职称材料
S1PR5激动与过表达通过调控氧化应激增强脑微血管内皮细胞屏障功能抵抗氧糖剥夺/复氧复糖损伤
2
作者
王静娴
任自敬
周佩洋
《南方医科大学学报》
北大核心
2025年第7期1451-1459,共9页
目的 探讨鞘氨醇1-磷酸受体5(S1PR5)对氧糖剥夺及复氧复糖(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响及相关机制。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,使用OGD/R诱导屏障功能障碍,分别使用S1PR5特异性激动剂A971432、敲低S...
目的 探讨鞘氨醇1-磷酸受体5(S1PR5)对氧糖剥夺及复氧复糖(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响及相关机制。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,使用OGD/R诱导屏障功能障碍,分别使用S1PR5特异性激动剂A971432、敲低S1PR5的siRNA及过表达S1PR5的慢病毒进行干预。设置对照组:bEnd.3正常培养;OGD/R组:bEnd.3进行OGD/R;A971432组:OGD/R组+A971432;siNC组:转染siNC+OGD/R;siS1PR5组:转染siS1PR5+OGD/R;OE NC组:感染慢病毒LV5-NC+OGD/R;OE S1PR5组:感染慢病毒LV5-S1PR5+OGD/R。RT-qPCR法分别检测敲低或过表达S1PR5的效率;采用CCK-8检测在不同培养条件下bEnd.3细胞的活力;采用FITC-dextran渗透法检测内皮屏障渗透性;采用细胞免疫荧光法检测蛋白的定位及表达;DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平;Western blotting法检测蛋白的表达水平。结果 CCK-8结果显示激动S1PR5可以增加OGD/R下调的细胞活力(P<0.0001),FITC-dextran渗透法结果显示激动和过表达S1PR5可减少FITC-dextran的渗漏(P<0.001),而敲低S1PR5增加FITC-dextran的渗漏(P<0.001)。Western blotting及免疫荧光结果显示,与OGD/R组相比,激动和过表达S1PR5可以增加屏障蛋白ZO-1(P<0.05)、Occludin(P<0.05)的表达,而敲低S1PR5会下调ZO-1和Occludin(P<0.05)的表达。ROS检测结果显示,激动和过表达S1PR5能减少ROS的产生,而敲低S1PR5会增加ROS产生。Western blotting检测发现过表达S1PR5可以增加抗氧化蛋白Nrf2(P<0.0001)、HO-1(P<0.0001)、SOD2(P<0.01)的表达。结论 S1PR5受体的激动剂干预及基因过表达可显著改善OGD/R模型诱导的活力减少及通透性增加,而基因敲低S1PR5则加剧OGD/R诱导的功能损伤,其机制可能与减少ROS,上调抗氧化蛋白表达相关。
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关键词
鞘氨醇1-磷酸受体5
血脑屏障功能障碍
氧
化应激
氧
糖剥夺/
复
氧
复
糖
损伤
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职称材料
题名
反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响
被引量：
2
1
作者
周燕琼
张艳美
高分飞
黄展勤
陈一村
郑燕珊
石刚刚
机构
汕头大学医学院药理教研室
汕头大学医学院第二附属医院
出处
《中国临床药理学与治疗学》
CAS
CSCD
2015年第1期14-18,共5页
基金
国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金资助项目(U0932005)
国家自然科学基金资助项目(81173048
+3 种基金
81072633
30901810)
中央财政支持地方高校发展专项资金
汕头市科技计划项目(汕府科[2014)62号]
文摘
目的：研究反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN）抑制早期生长反应基因1（early growth response gene-1,Egr-1）表达对内皮细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤的影响。方法：采用新生大鼠进行心脏微血管内皮细胞（cardiac microvascular endothelial cells,CMECs）原代培养,取3~4代的CMECs建立缺氧复氧模型。细胞随机分为6组：对照（Con）组、缺氧复氧组（A/R）、溶剂组（LIP）、反义寡核苷酸转染组（AS）、正义寡核苷酸转染组（S）和错配寡核苷酸转染组（Sc）。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及内皮细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量,观察内皮细胞损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,观察内皮细胞炎症反应水平;Western-blot法检测培养内皮细胞中Egr-1的蛋白表达水平;显微镜下观察细胞形态学改变并计算存活率。结果：A/R造成内皮细胞内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF-α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予AS-ODN可抑制Egr-1蛋白的表达,减轻内皮细胞的损伤及炎症反应程度,提高细胞存活率。结论：AS-ODN抑制培养内皮细胞Egr-1的表达,并降低A/R损伤,提示Egr-1与缺氧复氧所致的心脏微血管内皮细胞损伤密切相关。
关键词
反义寡核苷酸
心脏微血管内皮细胞
缺
氧复氧损伤
EGR-1
Keywords
antisense oligodeoxynucleotides
cardiac microvascular endothelial cells
anoxia/reoxygenation injury
Egr-1
分类号
R965.2 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
S1PR5激动与过表达通过调控氧化应激增强脑微血管内皮细胞屏障功能抵抗氧糖剥夺/复氧复糖损伤
2
作者
王静娴
任自敬
周佩洋
机构
湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院神经内科
出处
《南方医科大学学报》
北大核心
2025年第7期1451-1459,共9页
基金
湖北省自然科学基金(2021CFB567)
湖北医药学院研究生创新项目(YC2023048)。
文摘
目的 探讨鞘氨醇1-磷酸受体5(S1PR5)对氧糖剥夺及复氧复糖(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响及相关机制。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,使用OGD/R诱导屏障功能障碍,分别使用S1PR5特异性激动剂A971432、敲低S1PR5的siRNA及过表达S1PR5的慢病毒进行干预。设置对照组:bEnd.3正常培养;OGD/R组:bEnd.3进行OGD/R;A971432组:OGD/R组+A971432;siNC组:转染siNC+OGD/R;siS1PR5组:转染siS1PR5+OGD/R;OE NC组:感染慢病毒LV5-NC+OGD/R;OE S1PR5组:感染慢病毒LV5-S1PR5+OGD/R。RT-qPCR法分别检测敲低或过表达S1PR5的效率;采用CCK-8检测在不同培养条件下bEnd.3细胞的活力;采用FITC-dextran渗透法检测内皮屏障渗透性;采用细胞免疫荧光法检测蛋白的定位及表达;DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平;Western blotting法检测蛋白的表达水平。结果 CCK-8结果显示激动S1PR5可以增加OGD/R下调的细胞活力(P<0.0001),FITC-dextran渗透法结果显示激动和过表达S1PR5可减少FITC-dextran的渗漏(P<0.001),而敲低S1PR5增加FITC-dextran的渗漏(P<0.001)。Western blotting及免疫荧光结果显示,与OGD/R组相比,激动和过表达S1PR5可以增加屏障蛋白ZO-1(P<0.05)、Occludin(P<0.05)的表达,而敲低S1PR5会下调ZO-1和Occludin(P<0.05)的表达。ROS检测结果显示,激动和过表达S1PR5能减少ROS的产生,而敲低S1PR5会增加ROS产生。Western blotting检测发现过表达S1PR5可以增加抗氧化蛋白Nrf2(P<0.0001)、HO-1(P<0.0001)、SOD2(P<0.01)的表达。结论 S1PR5受体的激动剂干预及基因过表达可显著改善OGD/R模型诱导的活力减少及通透性增加,而基因敲低S1PR5则加剧OGD/R诱导的功能损伤,其机制可能与减少ROS,上调抗氧化蛋白表达相关。
关键词
鞘氨醇1-磷酸受体5
血脑屏障功能障碍
氧
化应激
氧
糖剥夺/
复
氧
复
糖
损伤
Keywords
sphingosine 1-phosphate receptor 5
blood-brain barrier dysfunction
oxidative stress
oxygen-glucose deprivation and reoxygenation
分类号
R743 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响
周燕琼
张艳美
高分飞
黄展勤
陈一村
郑燕珊
石刚刚
《中国临床药理学与治疗学》
CAS
CSCD
2015
2
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下载PDF
职称材料
2
S1PR5激动与过表达通过调控氧化应激增强脑微血管内皮细胞屏障功能抵抗氧糖剥夺/复氧复糖损伤
王静娴
任自敬
周佩洋
《南方医科大学学报》
北大核心
2025
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