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Calu-3细胞气液界面培养及暴露研究的初探
被引量：
3
1
作者
李银霞
盛云华
+1 位作者
胡玥
唐黎明
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1914-1919,共6页
目的探索Calu-3细胞气液界面(air-liquid interface,ALI)培养条件,及其在暴露系统中暴露洁净空气的耐受性。方法在Calu-3细胞3阶段培养:培养瓶扩增、液液培养至长满Transwell膜、ALI培养后,通过细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electri...
目的探索Calu-3细胞气液界面(air-liquid interface,ALI)培养条件,及其在暴露系统中暴露洁净空气的耐受性。方法在Calu-3细胞3阶段培养:培养瓶扩增、液液培养至长满Transwell膜、ALI培养后,通过细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electrical resistant,TEER)的测定和紧密连接蛋白ZO-1的表达来确定细胞屏障状态;利用气液界面暴露系统将Calu-3细胞暴露在洁净空气中,暴露1、2、3、4、5、6 h,以培养箱培养的细胞作为对照,检测暴露后Calu-3细胞的活性、TEER的变化,确定基于ALI培养的Calu-3细胞在体外暴露系统中的单次最长暴露时间。结果Calu-3细胞液液培养(8±1)d长满Transwell膜,屏障形成,转为ALI培养,在ALI培养的1~18 d内屏障完整,状态稳定,可以用于暴露实验;Calu-3细胞的活性在洁净空气暴露6 h之后明显下降(P<0.01),TEER在洁净空气暴露4、5、6 h之后明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论ALI培养1~18 d的Calu-3细胞可以用于气液界面暴露实验;综合细胞活性和TEER的变化,Calu-3细胞在暴露系统中暴露洁净空气的单次最长暴露时间为3 h。
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关键词
气
液
界面
暴露系统
气液界面培养
Calu-3细胞
紧密连接
细胞跨上皮电阻
暴露时间
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职称材料
培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究
被引量：
1
2
作者
金玲
陈剑
+3 位作者
吴静
徐锦堂
周清
赵松滨
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期265-268,共4页
目的应用培养的兔羊膜上皮细胞(AECs)体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔(27～28孕周)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养液培...
目的应用培养的兔羊膜上皮细胞(AECs)体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔(27～28孕周)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养液培养、传代,利用免疫组织化学单克隆抗体AE1/AE3、AE5检测培养的AECs中细胞角蛋白ck3/12的表达;将体外培养的2～3代兔AECs种植在新鲜兔角膜基质上,利用气-液界面培养法使之复层化,体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,进行光学显微镜和扫描电镜观察,并进行免疫组织化学测定。结果体外培养的兔AECs呈现单克隆抗体AE1/AE3、AE5表达阳性,AECs在新鲜兔角膜基质上能形成形态类似于正常角膜上皮细胞的3～5层复层结构,且复层化后的上皮细胞单克隆抗体AE5表达阳性。结论应用培养的AECs能成功构建类似角膜表层的复层上皮细胞-角膜基质移植材料,AECs可能成为重建角膜表层的一种新的细胞来源。
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关键词
羊膜上皮细胞
角膜上皮细胞
细胞
培养
气
-
液
界面
培养
法
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职称材料
猪肺炎支原体不同毒力菌株对猪气管上皮3D细胞的损伤差异与机制分析
被引量：
1
3
作者
冯艳艳
王海燕
+7 位作者
刘蓓蓓
韦艳娜
张珍珍
白昀
倪博
邵国青
雷治海
冯志新
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期378-387,共10页
为更真实地探究猪肺炎支原体(Mhp)不同毒力菌株对猪气管上皮细胞(STEC)的致病性差异与机制,通过气液界面培养技术(ALI),建立了传代STEC细胞系3D分化培养模型及Mhp在此细胞上的感染模型。将相同剂量的Mhp强毒株NJ株、中等毒力菌株AH株和...
为更真实地探究猪肺炎支原体(Mhp)不同毒力菌株对猪气管上皮细胞(STEC)的致病性差异与机制,通过气液界面培养技术(ALI),建立了传代STEC细胞系3D分化培养模型及Mhp在此细胞上的感染模型。将相同剂量的Mhp强毒株NJ株、中等毒力菌株AH株和弱毒株168L株分别感染3D培养的猪气管上皮细胞,分别通过单层细胞跨膜电阻检测、Alamar Blue检测、乳酸脱氢酶(LDH)释放检测等试验测定细胞单层完整性与细胞活性,并通过激光共聚焦和荧光分光光度计测定感染后48h的细胞MUC5B黏液蛋白的分泌量,从细胞生长特性、活性和黏液分泌功能方面比较不同毒力Mhp菌株感染对STEC分化细胞的影响。研究还从细胞氧化系统方面,比较检测各感染组细胞内NO和内源性ROS分泌量,进一步探索Mhp的致病机制。结果表明:强毒株NJ株和中等毒力AH株组纤毛有明显的变粗、破损和脱落现象,而弱毒株168L株组对纤毛的影响较小;Mhp菌株感染后细胞单层跨膜电阻显著下降,且电阻下降程度与菌株毒力呈正相关。Alamar Blue检测试验、乳酸脱氢酶(LDH)释放检测结果均表明,Mhp NJ株与AH株感染后均可以显著降低细胞活性,且在感染后48h最明显。Mhp菌株感染后还可促进分化细胞分泌MUC5B黏蛋白,菌株毒力越强,刺激黏蛋白分泌的量也越多。氧化应激检测结果显示,除Mhp弱毒菌株168L株外,中等毒力菌株AH株和强毒株NJ株感染3D分化的STEC细胞后,可显著刺激细胞分泌NO和内源性ROS,显著引起细胞的氧化应激反应。而经NAC抗氧化处理后,强毒株NJ株、中等毒力AH株和弱毒株168L株组细胞ROS和黏液分泌量均显著降低,细胞活性和电阻值均显著升高。本研究通过更接近体内环境的3D分化细胞感染模型证明,Mhp感染可对宿主细胞的生长特性与活性产生损伤,且损伤的程度与毒力呈正相关;而这种损伤机制与Mhp菌株引起感染细胞氧化应激的能力密切相关。
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关键词
猪肺炎支原体
猪
气
管上皮细胞
气
液
交
界面
培养
损伤机制
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职称材料
题名
Calu-3细胞气液界面培养及暴露研究的初探
被引量：
3
1
作者
李银霞
盛云华
胡玥
唐黎明
机构
复旦大学药学院
中国医药工业研究总院
上海市食品药品检验研究院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1914-1919,共6页
基金
上海市科学技术委员会“科技创新行动计划”(No 19DZ2202700)。
文摘
目的探索Calu-3细胞气液界面(air-liquid interface,ALI)培养条件,及其在暴露系统中暴露洁净空气的耐受性。方法在Calu-3细胞3阶段培养:培养瓶扩增、液液培养至长满Transwell膜、ALI培养后,通过细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electrical resistant,TEER)的测定和紧密连接蛋白ZO-1的表达来确定细胞屏障状态;利用气液界面暴露系统将Calu-3细胞暴露在洁净空气中,暴露1、2、3、4、5、6 h,以培养箱培养的细胞作为对照,检测暴露后Calu-3细胞的活性、TEER的变化,确定基于ALI培养的Calu-3细胞在体外暴露系统中的单次最长暴露时间。结果Calu-3细胞液液培养(8±1)d长满Transwell膜,屏障形成,转为ALI培养,在ALI培养的1~18 d内屏障完整,状态稳定,可以用于暴露实验;Calu-3细胞的活性在洁净空气暴露6 h之后明显下降(P<0.01),TEER在洁净空气暴露4、5、6 h之后明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论ALI培养1~18 d的Calu-3细胞可以用于气液界面暴露实验;综合细胞活性和TEER的变化,Calu-3细胞在暴露系统中暴露洁净空气的单次最长暴露时间为3 h。
关键词
气
液
界面
暴露系统
气液界面培养
Calu-3细胞
紧密连接
细胞跨上皮电阻
暴露时间
Keywords
air-liquid interface exposure system
air-liquid interface culture
Calu-3 cells
tight junctions
cell trans-epithelium electrical resistant
exposure time
分类号
R122.7 [医药卫生—环境卫生学]
R322.3 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R99 [医药卫生—毒理学]
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职称材料
题名
培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究
被引量：
1
2
作者
金玲
陈剑
吴静
徐锦堂
周清
赵松滨
机构
暨南大学附属第一医院眼科
暨南大学医学院眼科研究室
出处
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期265-268,共4页
基金
国家自然科学基金(30872808)
广东省重大科技计划基金(2003A3020104)
国务院侨办重点学科基金(51205004)资助
文摘
目的应用培养的兔羊膜上皮细胞(AECs)体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔(27～28孕周)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养液培养、传代,利用免疫组织化学单克隆抗体AE1/AE3、AE5检测培养的AECs中细胞角蛋白ck3/12的表达;将体外培养的2～3代兔AECs种植在新鲜兔角膜基质上,利用气-液界面培养法使之复层化,体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,进行光学显微镜和扫描电镜观察,并进行免疫组织化学测定。结果体外培养的兔AECs呈现单克隆抗体AE1/AE3、AE5表达阳性,AECs在新鲜兔角膜基质上能形成形态类似于正常角膜上皮细胞的3～5层复层结构,且复层化后的上皮细胞单克隆抗体AE5表达阳性。结论应用培养的AECs能成功构建类似角膜表层的复层上皮细胞-角膜基质移植材料,AECs可能成为重建角膜表层的一种新的细胞来源。
关键词
羊膜上皮细胞
角膜上皮细胞
细胞
培养
气
-
液
界面
培养
法
Keywords
amniotic epithelial cells
corneal epithelial cells
cell culture
air-lifting method
分类号
R779.65 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
猪肺炎支原体不同毒力菌株对猪气管上皮3D细胞的损伤差异与机制分析
被引量：
1
3
作者
冯艳艳
王海燕
刘蓓蓓
韦艳娜
张珍珍
白昀
倪博
邵国青
雷治海
冯志新
机构
南京农业大学动物医学院
江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期378-387,共10页
基金
江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(14)2040)
国家自然科学基金面上项目(31370208)
文摘
为更真实地探究猪肺炎支原体(Mhp)不同毒力菌株对猪气管上皮细胞(STEC)的致病性差异与机制,通过气液界面培养技术(ALI),建立了传代STEC细胞系3D分化培养模型及Mhp在此细胞上的感染模型。将相同剂量的Mhp强毒株NJ株、中等毒力菌株AH株和弱毒株168L株分别感染3D培养的猪气管上皮细胞,分别通过单层细胞跨膜电阻检测、Alamar Blue检测、乳酸脱氢酶(LDH)释放检测等试验测定细胞单层完整性与细胞活性,并通过激光共聚焦和荧光分光光度计测定感染后48h的细胞MUC5B黏液蛋白的分泌量,从细胞生长特性、活性和黏液分泌功能方面比较不同毒力Mhp菌株感染对STEC分化细胞的影响。研究还从细胞氧化系统方面,比较检测各感染组细胞内NO和内源性ROS分泌量,进一步探索Mhp的致病机制。结果表明:强毒株NJ株和中等毒力AH株组纤毛有明显的变粗、破损和脱落现象,而弱毒株168L株组对纤毛的影响较小;Mhp菌株感染后细胞单层跨膜电阻显著下降,且电阻下降程度与菌株毒力呈正相关。Alamar Blue检测试验、乳酸脱氢酶(LDH)释放检测结果均表明,Mhp NJ株与AH株感染后均可以显著降低细胞活性,且在感染后48h最明显。Mhp菌株感染后还可促进分化细胞分泌MUC5B黏蛋白,菌株毒力越强,刺激黏蛋白分泌的量也越多。氧化应激检测结果显示,除Mhp弱毒菌株168L株外,中等毒力菌株AH株和强毒株NJ株感染3D分化的STEC细胞后,可显著刺激细胞分泌NO和内源性ROS,显著引起细胞的氧化应激反应。而经NAC抗氧化处理后,强毒株NJ株、中等毒力AH株和弱毒株168L株组细胞ROS和黏液分泌量均显著降低,细胞活性和电阻值均显著升高。本研究通过更接近体内环境的3D分化细胞感染模型证明,Mhp感染可对宿主细胞的生长特性与活性产生损伤,且损伤的程度与毒力呈正相关;而这种损伤机制与Mhp菌株引起感染细胞氧化应激的能力密切相关。
关键词
猪肺炎支原体
猪
气
管上皮细胞
气
液
交
界面
培养
损伤机制
Keywords
Mycoplasma hyopneumoniae
swine tracheal epithelial cells
air-liquid interface culture
pathogenic mechanism
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Calu-3细胞气液界面培养及暴露研究的初探
李银霞
盛云华
胡玥
唐黎明
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
3
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职称材料
2
培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究
金玲
陈剑
吴静
徐锦堂
周清
赵松滨
《眼科研究》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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下载PDF
职称材料
3
猪肺炎支原体不同毒力菌株对猪气管上皮3D细胞的损伤差异与机制分析
冯艳艳
王海燕
刘蓓蓓
韦艳娜
张珍珍
白昀
倪博
邵国青
雷治海
冯志新
《畜牧兽医学报》
CAS
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北大核心
2018
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