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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性 被引量:9
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作者 孟晓光 甄里 +5 位作者 刘悦玫 侯利平 刘丹 李斌 欧阳伟民 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期343-348,共6页
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特... 评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。 展开更多
关键词 全柱成像毛细管等电聚焦 荷异质性 重组蛋白质药物 抗体 药学研究
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毛细管等电聚焦分离蛋白质 被引量:7
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作者 刘晓达 廖杰 +3 位作者 杨景庚 王全立 刘耀清 马立人 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期8-11,共4页
采用均匀设计法进行未涂壁石英毛细管等电聚焦研究,考察两性电解质、甲基纤维素、四甲基乙二胺和牛磺酸几种组分对等电聚焦的影响,确定出了比较合适的浓度范围。当中性蛋白质迁移通过检测窗后,在进样端施加一低气压,从而使酸性蛋白... 采用均匀设计法进行未涂壁石英毛细管等电聚焦研究,考察两性电解质、甲基纤维素、四甲基乙二胺和牛磺酸几种组分对等电聚焦的影响,确定出了比较合适的浓度范围。当中性蛋白质迁移通过检测窗后,在进样端施加一低气压,从而使酸性蛋白质得到很好的分离,适用于较宽的pI范围。方法的重复性好,为蛋白质分离鉴定提供一种有力的工具。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 蛋白质 均匀设计
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用于蛋白质分析的毛细管等电聚焦-电喷雾质谱接口的改进 被引量:3
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作者 许崇峰 宋浩威 +3 位作者 杨原 王谦 王洪海 许云敏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1035-1037,共3页
An important interface modification for capillary isoelectric focusing mass spectrometry(CIEF MS) is reported. A capillary needle with a sheath flow tube pre mounted in one device serves as both the CIEF cathodic end ... An important interface modification for capillary isoelectric focusing mass spectrometry(CIEF MS) is reported. A capillary needle with a sheath flow tube pre mounted in one device serves as both the CIEF cathodic end and the ESI interface. The needle was inserted into the cathode reservoir at the focusing stage, and then removed to the front of sampler orifice of MS at the detection stage. Therefore, the shut off of the high voltage is not necessary and a better focusing protein zone is maintained during the ESI stage. The optimization of the experimental condition has been investigated and the two dimensional image of the E. coli proteins has been obtained, which is comparable with that from a 2D gel. 展开更多
关键词 蛋白质 毛细管等电聚焦-质谱 接口 分离 鉴定 大肠杆菌 蛋白质组学
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毛细管等电聚焦-毛细管区带电泳二维蛋白质分离平台的构建及其性能 被引量:3
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作者 刘和春 杨春 +1 位作者 张维冰 张玉奎 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1451-1453,M010,共4页
A two-dimensional separation platform of capillary isoelectric focusing(CIEF)-capillary zone electrophoresis(CZE) for proteins was constructed by a microdialysis hollow fiber interface. The interface provided ease of ... A two-dimensional separation platform of capillary isoelectric focusing(CIEF)-capillary zone electrophoresis(CZE) for proteins was constructed by a microdialysis hollow fiber interface. The interface provided ease of fabrication,speed of mass delivering and convenience of column switching. Chrome c was selected to demonstrate the 2D separation systems feasibility and resolving performance. The 2D separation system was found to greatly increase the resolving power and overall peak capacity over those obtained for either dimension alone. 展开更多
关键词 微透析中空纤维膜接口 二维分离平台 毛细管等电聚焦 毛细管区带
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毛细管等电聚焦电泳技术进展 被引量:2
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作者 杨春 姬磊 +1 位作者 张维冰 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-125,共5页
介绍了毛细管等电聚焦电泳(CIEF)技术的发展和现状,特别对载体两性电解质、柱内表面处理和检测技术等方面的最新进展加以系统评述,并且对CIEF的定性能力、峰容量、重现性及其在生命科学方面的应用前景进行了讨论。引用文献59篇。
关键词 毛细管等电聚焦泳技术 毛细管 微分离技术 载体两性解质 管壁处理 进样 迁移 检测技术
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毛细管等电聚焦方法及其应用 被引量:2
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作者 刘晓达 王全立 马立人 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期400-404,共5页
讨论了毛细管等电聚焦中所涉及的问题,如分离机理、电渗、迁移方法、检测器及其应用。由于毛细管等电聚焦操作方式的多样性,使其可适用于不同的仪器条件。非交联丙烯酰胺涂层能很好地消除电渗和蛋白吸附;而采用未处理的毛细管时,动... 讨论了毛细管等电聚焦中所涉及的问题,如分离机理、电渗、迁移方法、检测器及其应用。由于毛细管等电聚焦操作方式的多样性,使其可适用于不同的仪器条件。非交联丙烯酰胺涂层能很好地消除电渗和蛋白吸附;而采用未处理的毛细管时,动态涂敷纤维素类亲水聚合物对碱性和中性蛋白亦能取得较好的分离效果。电荷耦合器件成像检测器尚待进一步发展才能成为常用的检测工具。对于复杂样品来说,仍需解决的问题是保证在较宽的pH范围内pI的线性。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 蛋白质 迁移方法 IEF
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新型毛细管等电聚焦驱动方法的建立及其应用 被引量:1
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作者 朱贵杰 杨春 +3 位作者 刘和春 张丽华 张维冰 张玉奎 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期654-656,共3页
A simple method for mobilizing the focused zones of capillary isoelectric focusing(CIEF) for single-point detectors was developed, in which a linear polyacrylamide(LPA) coated capillary was connected with an uncoated ... A simple method for mobilizing the focused zones of capillary isoelectric focusing(CIEF) for single-point detectors was developed, in which a linear polyacrylamide(LPA) coated capillary was connected with an uncoated capillary by an etched porous joint. The etched section allows electrical conductivity but blocks the hydrodynamic flow. The focused zones of mixed proteins was mobilized by this method successfully. Compared with the traditional gravity mobilization step, it was found that this method can mobilize the focused zones more effectively without sacrificing separation efficiency. 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 渗流驱动 蛋白质 多肽
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一步法和两步法毛细管等电聚焦测定蛋白质和多肽等电点的比较 被引量:3
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作者 高培峰 赵新颖 +2 位作者 贺木易 刘庆生 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期537-542,共6页
利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(cIEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI)。讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响。并对一步法和两步法进行了比较。对... 利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(cIEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI)。讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响。并对一步法和两步法进行了比较。对细胞色素C、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白和牛血清白蛋白以及6种多肽的分析结果表明:一步法步骤简单,分离速度快,可测定单一组分的pI,也能快速分离混合蛋白和多肽,但分离度较差,且不能同时准确测定各组分的pI;两步法步骤复杂,分析时间较长,但能够同时分离并准确测定混合样品中各组分的pI,所测的pI值与单一组分进行测定的结果基本一致。两种方法可相互结合、互为补充,可广泛应用于两性生物微粒等电点的快速和准确测定。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 一步法 两步法 蛋白质 多肽
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毛细管电泳-电喷雾质谱联用技术及其在蛋白质分析领域中的应用 被引量:4
9
作者 许崇峰 申华莉 +1 位作者 宋浩威 杨焜原 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期95-98,共4页
综述了毛细管电泳与电喷雾质谱联用的接口技术、分离模式及其在蛋白质分析领域中的应用 。
关键词 毛细管 毛细管等电聚焦 喷雾质谱 蛋白质组学 联用技术 蛋白质 分析
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毛细管电泳技术在单克隆抗体药物分析中的应用 被引量:13
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作者 陈泓序 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期195-208,共14页
单克隆抗体药物在生物制药行业占有重要地位,是生物医药领域发展的主要方向。因此,单克隆抗体药物的质量控制已成为全球生物制药企业及法规机构关注的热点,对单克隆抗体药物精确表征的需求日益增加。毛细管电泳技术具有分离效率高、分... 单克隆抗体药物在生物制药行业占有重要地位,是生物医药领域发展的主要方向。因此,单克隆抗体药物的质量控制已成为全球生物制药企业及法规机构关注的热点,对单克隆抗体药物精确表征的需求日益增加。毛细管电泳技术具有分离效率高、分析速度快、分离模式多、样品用量少等特点,已成为单克隆抗体药物分析和质量控制的重要手段。该文对毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管区带电泳等模式在单克隆抗体药物的纯度分析、等电点测定、电荷异质性分析和N-寡糖分析的应用进行综述,以期为国内单克隆抗体研究开发和生产的企事业单位提供技术参考。 展开更多
关键词 毛细管 毛细管凝胶 毛细管区带 毛细管等电聚焦 单克隆抗体药物 纯度 荷异质性 N-寡糖 综述
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单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证
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作者 董标 梁月琴 +1 位作者 王杰 董方霆 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期125-127,共3页
建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素... 建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体-白介素2融合蛋白 结构确证 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 肽图 毛细管等电聚焦
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