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构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞
1
作者
李彬
鲍文蕾
+5 位作者
张涛
侯鑫
郭旭东
王潇
王志钢
刘东军
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期141-145,共5页
旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因...
旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。
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关键词
内蒙古白绒山羊
淋巴样增强因子-1
毛囊特异性表达载体
稳定转染
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职称材料
绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达
被引量：
4
2
作者
于永生
王晓阳
+2 位作者
朴庆林
罗晓彤
金海国
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第6期64-67,共4页
本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP...
本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP6-1基因启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊提供了条件。
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关键词
辽宁绒山羊
毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因
毛囊特异性表达载体
转基因体细胞
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职称材料
题名
构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞
1
作者
李彬
鲍文蕾
张涛
侯鑫
郭旭东
王潇
王志钢
刘东军
机构
内蒙古大学生命科学学院哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期141-145,共5页
基金
转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(2008ZX08008-002)
文摘
旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。
关键词
内蒙古白绒山羊
淋巴样增强因子-1
毛囊特异性表达载体
稳定转染
Keywords
Inner Mongolia cashmere goat Lymphoid enhancer factor 1 Follicle specific expression vector Stable transfection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达
被引量：
4
2
作者
于永生
王晓阳
朴庆林
罗晓彤
金海国
机构
吉林省农业科学院畜牧科学分院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第6期64-67,共4页
基金
转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08008-002)
文摘
本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP6-1基因启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊提供了条件。
关键词
辽宁绒山羊
毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因
毛囊特异性表达载体
转基因体细胞
Keywords
Liaoning Cashmere goat
keratin type Ⅱ intermediate filament gene
follicle-specific expression vector
transgenic somatic cell
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞
李彬
鲍文蕾
张涛
侯鑫
郭旭东
王潇
王志钢
刘东军
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达
于永生
王晓阳
朴庆林
罗晓彤
金海国
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011
4
在线阅读
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职称材料
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