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皮蝇素A基因的克隆及其毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
王艳华
殷宏
+1 位作者
罗建勋
蒋锡仕
《动物医学进展》
CSCD
2007年第9期15-18,共4页
提取采自甘肃玛曲皮蝇一期幼虫的总RNA,合成cDNA,根据设计的特异引物,利用PCR技术扩增出皮蝇素A(Hypodermin A,HA)基因片段,用XhoⅠ、XbaⅠ消化,将消化后的目的基因HA纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPICZa连接并转化,...
提取采自甘肃玛曲皮蝇一期幼虫的总RNA,合成cDNA,根据设计的特异引物,利用PCR技术扩增出皮蝇素A(Hypodermin A,HA)基因片段,用XhoⅠ、XbaⅠ消化,将消化后的目的基因HA纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPICZa连接并转化,获得重组表达质粒pPICZa-HA,经PCR、酶切、测序表明,目的基因插入位置、方向和阅读框正确。
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关键词
皮蝇素A
克隆
毕赤酵母表达载体
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职称材料
大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
1
2
作者
孙文秀
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第19期8895-8897,共3页
[目的]构建大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体。[方法]利用PCR方法从大豆疫霉菌cDNA中扩增多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因,用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9K,然后用T4连接酶将目的基因...
[目的]构建大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体。[方法]利用PCR方法从大豆疫霉菌cDNA中扩增多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因,用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9K,然后用T4连接酶将目的基因克隆到pPIC9K载体中构建此载体。[结果]扩增的大豆疫霉菌pspg1基因成熟肽片段大小为1 250 bp。用基因特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200 bp的片段。而用载体特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200和1 700 bp两条带,多出来的400 bp恰好符合载体部分的大小。将此特异性片段PCR扩增回收,序列测定发现大豆疫霉pspg1基因已经成功地插入到表达载体中。[结论]该研究为进一步研究大豆疫霉菌pspg1基因在毕赤酵母中高效表达奠定了基础。
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关键词
大豆疫霉菌
多聚半乳糖醛酸酶
毕赤酵母表达载体
构建
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职称材料
重组山羊FSH基因在毕赤酵母中的高效表达
3
作者
杨欢利
毛英姿
丁家桐
《黑龙江动物繁殖》
2011年第5期12-15,共4页
为探讨快速高效表达山羊FSH(促卵泡素)基因的方法,将获得的FSHα,β亚基基因克隆到毕赤酵母快速表达载体pPICZαA中,然后将构建的载体线性化处理后,电击转化至毕赤酵母GS115中,经Zeocin抗生素筛选后获得阳性菌落,经甲醇诱导表达后进行SD...
为探讨快速高效表达山羊FSH(促卵泡素)基因的方法,将获得的FSHα,β亚基基因克隆到毕赤酵母快速表达载体pPICZαA中,然后将构建的载体线性化处理后,电击转化至毕赤酵母GS115中,经Zeocin抗生素筛选后获得阳性菌落,经甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE和Western–blot分析。结果表明:pPICZαA载体可以快速正确的表达FSH,分子量为27KD,放射免疫法测定表达上清,表达量为20.155 mIU/mL,显著高于本实验室在细胞中的表达。
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关键词
山羊
FSH基因
毕赤酵母表达载体
表达
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职称材料
题名
皮蝇素A基因的克隆及其毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
王艳华
殷宏
罗建勋
蒋锡仕
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
西南民族大学
出处
《动物医学进展》
CSCD
2007年第9期15-18,共4页
基金
欧盟项目INCO-DEV-牛皮蝇病控制计划(ICA4-CT-2000-30036)
文摘
提取采自甘肃玛曲皮蝇一期幼虫的总RNA,合成cDNA,根据设计的特异引物,利用PCR技术扩增出皮蝇素A(Hypodermin A,HA)基因片段,用XhoⅠ、XbaⅠ消化,将消化后的目的基因HA纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPICZa连接并转化,获得重组表达质粒pPICZa-HA,经PCR、酶切、测序表明,目的基因插入位置、方向和阅读框正确。
关键词
皮蝇素A
克隆
毕赤酵母表达载体
Keywords
Hypodermin A
Cloning
Pichia pastoris expression plasmid
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S852.743 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
1
2
作者
孙文秀
机构
长江大学生命科学学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第19期8895-8897,共3页
基金
长江大学博士创新基金项目
文摘
[目的]构建大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体。[方法]利用PCR方法从大豆疫霉菌cDNA中扩增多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因,用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9K,然后用T4连接酶将目的基因克隆到pPIC9K载体中构建此载体。[结果]扩增的大豆疫霉菌pspg1基因成熟肽片段大小为1 250 bp。用基因特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200 bp的片段。而用载体特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200和1 700 bp两条带,多出来的400 bp恰好符合载体部分的大小。将此特异性片段PCR扩增回收,序列测定发现大豆疫霉pspg1基因已经成功地插入到表达载体中。[结论]该研究为进一步研究大豆疫霉菌pspg1基因在毕赤酵母中高效表达奠定了基础。
关键词
大豆疫霉菌
多聚半乳糖醛酸酶
毕赤酵母表达载体
构建
Keywords
Phytophthora sojae
Polygalaeturonase
Pichia expression vector
Construction
分类号
S435.651 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
重组山羊FSH基因在毕赤酵母中的高效表达
3
作者
杨欢利
毛英姿
丁家桐
机构
浙江省台州医院生殖中心
扬州大学动物科学与技术学院
出处
《黑龙江动物繁殖》
2011年第5期12-15,共4页
文摘
为探讨快速高效表达山羊FSH(促卵泡素)基因的方法,将获得的FSHα,β亚基基因克隆到毕赤酵母快速表达载体pPICZαA中,然后将构建的载体线性化处理后,电击转化至毕赤酵母GS115中,经Zeocin抗生素筛选后获得阳性菌落,经甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE和Western–blot分析。结果表明:pPICZαA载体可以快速正确的表达FSH,分子量为27KD,放射免疫法测定表达上清,表达量为20.155 mIU/mL,显著高于本实验室在细胞中的表达。
关键词
山羊
FSH基因
毕赤酵母表达载体
表达
Keywords
goat follicular-stimulating hormone gene
Pichia pastoris vector
expression
分类号
S826.3 [农业科学—畜牧学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
皮蝇素A基因的克隆及其毕赤酵母表达载体的构建
王艳华
殷宏
罗建勋
蒋锡仕
《动物医学进展》
CSCD
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体的构建
孙文秀
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
重组山羊FSH基因在毕赤酵母中的高效表达
杨欢利
毛英姿
丁家桐
《黑龙江动物繁殖》
2011
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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引证文献
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