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毒蕈碱胆碱能受体3在小细胞肺癌增殖和迁移中的调节作用 被引量:2
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作者 张淑香 谢灿茂 高桥和久 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1679-1683,共5页
目的:研究毒蕈碱胆碱能受体3(M3R)在人小细胞肺癌(SCLC)中的表达及其作用。方法:体外培养人SCLC细胞株SBC3和H82,RT-PCR和Western blotting法检测M3R的表达,MTT法和Boyden chamber法分别检测胆碱受体激动剂碘化乙酰胆碱(ACh)及M3R拮抗剂... 目的:研究毒蕈碱胆碱能受体3(M3R)在人小细胞肺癌(SCLC)中的表达及其作用。方法:体外培养人SCLC细胞株SBC3和H82,RT-PCR和Western blotting法检测M3R的表达,MTT法和Boyden chamber法分别检测胆碱受体激动剂碘化乙酰胆碱(ACh)及M3R拮抗剂4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine methiodide(4-DAMP)对SBC3细胞增殖和迁移的影响。结果:SBC3和H82细胞均表达M3R,SBC3细胞M3R蛋白相对表达强度是H82细胞的2.65倍。ACh浓度依赖性地刺激SBC3细胞增殖,10-4和10-3mol/L ACh在48h和72h作用明显(P<0.01)。4-DAMP浓度依赖性地阻断ACh对细胞增殖的刺激作用,48h时,10-5mol/L4-DAMP阻断ACh的作用(P<0.05),至72h,10-7、10-6mol/L(P<0.05)和10-5mol/L(P<0.01)4-DAMP都能阻断ACh的作用。无外源性ACh的情况下,10-6、10-5mol/L4-DAMP在48h都能明显地抑制细胞增殖(P<0.01),在72h,10-5mol/L4-DAMP的作用(P<0.01)强于10-6mol/L4-DAMP(P<0.05)。ACh浓度依赖性地增强SBC3细胞向人纤维结合蛋白(Fn)的迁移,10-4mol/L ACh增加细胞迁移约3倍,10-6、10-5mol/L4-DAMP几乎完全阻断10-4mol/LACh刺激的SBC3细胞迁移(P<0.01)。结论:人SCLC细胞表达M3R,M3R拮抗剂抑制SCLC细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 毒蕈碱胆碱能受体3 肺肿瘤 细胞增殖 细胞迁移
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毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究 被引量:6
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作者 张亮 宦宏波 +3 位作者 温旭东 杨大鹏 吴黎雳 夏锋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期509-514,共6页
目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲... 目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 肝细胞癌 毒蕈碱胆碱能受体M3 侵袭 转移 上皮-间质转化
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