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毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究 被引量：6
1
作者 张亮 宦宏波 +3 位作者 温旭东 杨大鹏 吴黎雳 夏锋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期509-514,共6页
目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲... 目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 肝细胞癌 毒蕈碱型胆碱能受体m3 侵袭 转移 上皮-间质转化
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血清毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体水平对甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断价值 被引量：4
2
作者 亚库甫·托合提 张凯楠 +4 位作者 赵辉 吾布里塔里甫·达吾提 张蕊 林仁勇 吕国栋 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2022年第17期2110-2114,共5页
背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗... 背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体(m3AchR-Ab)对AFP阴性HCC患者的诊断效能,并探索m3AchR-Ab对HCC患者的诊断价值。方法选取2011年11月至2015年9月入库于新疆医科大学第一附属医院标本库的257例患者血清样本,其中90例已确诊为HCC患者的血清样本为HCC组,89例已确诊为良性肝病(肝硬化及肝血管瘤等肝病)患者的血清样本为良性肝病组,78例健康受试者的血清样本为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测并比较3组血清m3AchR-Ab水平,分析血清m3AchR-Ab水平与HCC患者性别、年龄、HCC肿瘤大小(最大直径)和数量、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、乙肝表面抗原(HBsAg)的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC的诊断价值。结果HCC组血清m3AchR-Ab水平高于良性肝病组和对照组血清(P<0.05)。m3AchR-Ab水平与HCC肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和HBsAg相关(P<0.05)。血清m3AchR-Ab水平诊断AFP阴性HCC的ROC曲线下面积为0.69〔95%CI(0.54,0.83)〕,最佳截断值为74.00 ng/ml,灵敏度为64.00%,特异度为91.02%。血清m3AchR-Ab联合AFP水平诊断HCC的ROC曲线下面积为0.90〔95%CI(0.85,0.95)〕,灵敏度为90.00%,特异度为88.02%。结论血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC具有一定的诊断价值,且使用m3AchR-Ab和AFP联合诊断可提高HCC诊断效能,这可为未来研究新型HCC诊断标志物提供更多参考。 展开更多
关键词 肝肿瘤 甲胎蛋白类 毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体 生物标志物 灵敏度 特异度 影响因素分析 诊断
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毒蕈碱型M5受体亚型及生物学特性 被引量：4
3
作者 王丽韫 郑建全 +1 位作者 阮金秀 刘克良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期10-13,共4页
M5是最后一个被克隆出的乙酰胆碱毒蕈碱型受体亚型,具有G蛋白偶联受体家族的基本结构特征, 其信号转导方式既可以与G蛋白偶联,激活多种效应酶 (腺苷酸环化酶、磷脂酶C、磷脂酶A2 )产生相应的生物学效应,又可作用于离子通道来调节细胞间... M5是最后一个被克隆出的乙酰胆碱毒蕈碱型受体亚型,具有G蛋白偶联受体家族的基本结构特征, 其信号转导方式既可以与G蛋白偶联,激活多种效应酶 (腺苷酸环化酶、磷脂酶C、磷脂酶A2 )产生相应的生物学效应,又可作用于离子通道来调节细胞间的信号传递。M5生理作用主要与调节中枢NO的生成和DA的释放有关,可能为药物滥用成瘾、DA系统功能障碍性疾病、阿尔采末病、脑缺血等的药物治疗提供一个新靶标。 展开更多
关键词 毒蕈碱型m5受体亚型 信号传导途径 一氧化氮合酶 多巴胺能神经通路
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膀胱平滑肌细胞乙酰胆碱M_3受体干扰RNA慢病毒载体的构建
4
作者 尚振华 贾春松 +5 位作者 颜灏 王巨昆 王旭 崔波 王琦 欧彤文 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第3期398-403,共6页
目的构建膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)M_3型受体干扰RNA慢病毒载体。方法合成4条M_3受体干扰序列,构建GV118-sh-M_3慢病毒载体,测序验证序列。将GV118-sh-M_3慢病毒载体与质粒p Helper1.0、p Helper 2.0三个载体... 目的构建膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)M_3型受体干扰RNA慢病毒载体。方法合成4条M_3受体干扰序列,构建GV118-sh-M_3慢病毒载体,测序验证序列。将GV118-sh-M_3慢病毒载体与质粒p Helper1.0、p Helper 2.0三个载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用荧光法检测4组病毒滴度。体外原代培养BSMCs,4组GV118-sh-M_3慢病毒(KD1、KD2、KD3和KD4)转染BSMCs,观察绿色荧光蛋白表达并通过RT-PCR、Western blotting法检测各组干扰效率。结果成功构建4个GV118-sh-M_3慢病毒载体,测序结果符合设计序列。4组GV118-sh-M_3慢病毒滴度分别为2×10~8、6×10~8、5×10~8和5×10~8TU/m L。分别转染BSMCs后,KD1组绿色荧光蛋白表达量最高且干扰效率最高。结论成功包装并筛选了GV118-sh-M_3慢病毒载体,为后续进一步研究干扰M_3受体在神经源性膀胱中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 神经源性膀胱 m3型乙酰胆碱受体 慢病毒载体 RNA干扰
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莨菪烷类化合物拮抗M_3受体、抑制中性粒细胞弹性蛋白酶活性的研究 被引量：1
5
作者 蔡玉兴 刘慧中 +4 位作者 胡优敏 张建华 金玉杰 李宁 钮因尧 《上海交通大学学报（医学版）》 CSCD 北大核心 2017年第8期1059-1063,共5页
目的·设计、合成5个新莨菪烷类化合物,测试其拮抗M3受体、抑制中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的活性,初步分析2种活性的构效关系。方法·对莨菪烷母核的C-3α位、N原子进行结构改造,以3α-羟基莨菪烷(A0)为起始物,合成A1~A3、B1、C... 目的·设计、合成5个新莨菪烷类化合物,测试其拮抗M3受体、抑制中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的活性,初步分析2种活性的构效关系。方法·对莨菪烷母核的C-3α位、N原子进行结构改造,以3α-羟基莨菪烷(A0)为起始物,合成A1~A3、B1、C1。选取豚鼠气道环为测试样本,通过离体组织功能实验,测试目标物对M3受体的拮抗活性。利用NE催化底物PGlu-Pro-ValPNA的水解反应,测定有色产物硝基苯胺(PNA)的吸光度值[D(405 nm)],获得目标物对NE的抑制活性。结果·5个新化合物对M3受体都具有较强的拮抗作用,其中A2的拮抗活性最大,拮抗参数pA_2(M_3)=9.004;并且A2对NE具有较明显的抑制作用(抑制率Y_(A2)=20.29%)。结论·在莨菪烷母核的C-3α位引入强吸电子基团磺酰基和大体积疏水基团时,有利于同时提高化合物拮抗M_3受体、抑制NE的活性。 展开更多
关键词 莨菪烷 毒蕈碱型胆碱能受体 m3 受体拮抗剂 中性粒细胞弹性蛋白酶 构效关系
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M3受体遗传变异与血压钠钾反应性的关联研究 被引量：1
6
作者 张玺 胡桂霖 +21 位作者 牛泽家馨 杜鸣飞 邹婷 张晓玉 王兰 褚超 廖月圆 马琼 王丹 王科科 贾昊 陈晨 严瑜 孙月 郭统帅 张婕 高卫华 闫睿晨 高可 罗文婧 牟建军 汪洋 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期46-54,共9页
目的M3毒蕈碱乙酰胆碱受体(M3受体)由CHRM3基因编码,广泛分布于心血管系统并发挥重要的心脏调节作用。本研究旨在探讨M3受体遗传变异与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系。方法从中国陕西省农村地区招募来自124个家庭的333名受试者,经... 目的M3毒蕈碱乙酰胆碱受体(M3受体)由CHRM3基因编码,广泛分布于心血管系统并发挥重要的心脏调节作用。本研究旨在探讨M3受体遗传变异与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系。方法从中国陕西省农村地区招募来自124个家庭的333名受试者,经过3 d的基线观察后,依次进行7 d低盐饮食、7 d高盐饮食、7 d高盐补钾饮食。选取13个CHRM3基因单核苷酸多态性(SNP)位点进行相关分析。结果CHRM3基因SNP位点rs10802811与低盐期及高盐期舒张压及平均动脉压反应性显著相关,而rs6429147、rs373288072、rs114677844、rs663148与高盐期收缩压及平均动脉压反应性显著相关。此外,rs6692904与高盐补钾期收缩压、舒张压及平均动脉压反应性显著相关。结论M3受体基因多态性与血压钠钾反应性相关,提示M3受体基因可能参与血压盐敏感性及钾敏感性的形成。 展开更多
关键词 m3毒蕈碱乙酰胆碱受体 基因多态性 血压 盐 钾
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限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠 被引量：3
7
作者 高旭 马宁 +7 位作者 王大勇 张赫 张艳芬 徐亚 贺军 徐书会 霍亚丽 杜智敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期404-409,共6页
CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶... CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 毒蕈碱型乙酰胆碱受体m3亚型 遗传改变小鼠 纯合子
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Ca^(2+)-CaM在M_3R介导逼尿肌细胞收缩中作用的实验研究
8
作者 卢根生 任静 +2 位作者 宋波 熊恩庆 金锡御 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第23期2123-2124,共2页
目的　探讨Ca2 + CaM在M3 R介导逼尿肌细胞收缩中作用。方法　将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组 ,接种于 6孔培养板上培养 ,加入 10 -4mol/Lcarbachol和methoctramine ,采用Ca2 + 浓度和CaM活性检测试剂盒分别测定Ca2 + 浓度和... 目的　探讨Ca2 + CaM在M3 R介导逼尿肌细胞收缩中作用。方法　将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组 ,接种于 6孔培养板上培养 ,加入 10 -4mol/Lcarbachol和methoctramine ,采用Ca2 + 浓度和CaM活性检测试剂盒分别测定Ca2 + 浓度和CaM活性。结果　实验组中 ,[Ca2 + ]i和CaM的平均通道荧光对数值分别为 ( 3 2 6± 0 3 8)和 ( 2 87± 0 3 4) ,与对照组 [分别为 ( 2 0 6± 0 12 )、( 2 14± 0 2 4) ]相比 ,均有显著性的升高 (P <0 0 5 )。结论　Ca2 + CaM信号传导途径参与了M3 展开更多
关键词 逼尿肌细胞 毒蕈碱受体亚型 m3R 钙离子 钙调蛋白
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激活M1 AChR调控GluA1和GluA2改善高原低氧引起的大鼠记忆损伤
9
作者 冯江鹏 黄灵泉 +3 位作者 杨全余 嘎琴 李生花 靳国恩 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第6期703-712,共10页
目的:探索毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1(M1 AChR)能否调控离子型谷氨酸受体AMPA型亚基1(GluA1)和离子型谷氨酸受体AMPA型亚基2(GluA2)的表达,从而参与高原低氧对大鼠学习和记忆的影响。方法:将大鼠随机分为常氧组(Control)、高原低氧组(Hypox... 目的:探索毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1(M1 AChR)能否调控离子型谷氨酸受体AMPA型亚基1(GluA1)和离子型谷氨酸受体AMPA型亚基2(GluA2)的表达,从而参与高原低氧对大鼠学习和记忆的影响。方法:将大鼠随机分为常氧组(Control)、高原低氧组(Hypoxia)和高原低氧+TAK-071组[Hypoxia+TAK-071,TAK-071为M1AChR激动剂]。大鼠的学习和记忆能力采用Morris水迷宫实验进行检测,大鼠海马CA1和CA3区M1 AChR、GluA1和GluA2的分布和表达水平采用免疫组织化学染色进行测定,大鼠海马中M1 AChR、GluA1、p-GluA1(Ser845)、GluA2和p-GluA2(Ser880)的表达水平采用Western Blot进行测定,大鼠海马中M1 AChR、GluA1、GluA2、离子型谷氨酸受体NMDA型亚基2A(NR2A)、tau和β淀粉样蛋白(Aβ)mRNA的表达水平采用RT-qPCR进行测定。结果:Morris水迷宫实验结果显示,高原低氧会使大鼠在定位导航试验中的逃避潜伏期时长明显增加,大鼠在空间探索试验中在目标象限的停留时间明显缩短,TAK-071的干预能明显改善大鼠在空间探索试验中因高原低氧而损伤的记忆状况;在海马CA1和CA3区,GluA1、GluA2与M1 AChR的表达呈现良好的相关性;在海马组织中,GluA1、GluA2与其对应的磷酸化蛋白的表达相同步,TAK-071的干预能逆转因高原低氧而改变的GluA1、GluA2与M1 AChR表达的相关关系。TAK-071的干预能显著降低(P<0.05)因高原低氧而升高的M1 AChR、GluA1、GluA2、NR2A、tau和Aβ mRNA的表达水平。结论:激活M1 AChR能通过调控GluA1和GluA2及其磷酸化蛋白的表达改善高原低氧引起的大鼠记忆损伤。 展开更多
关键词 高原低氧 学习和记忆 毒蕈碱型乙酰胆碱受体m1 离子型谷氨酸受体AmPA型亚基1 离子型谷氨酸受体AmPA型亚基2 大鼠
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胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用 被引量：3
10
作者 刘艳 戚汉平 +7 位作者 解晶 赵华 陈巍 陈立朋 张秀菊 杜娟 蒋雅楠 李咏梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1447-1451,共5页
目的探讨胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用。方法大鼠和豚鼠分别注射乌头碱或哇巴因制备心律失常模型,观察预先给予低剂量(5 mg.kg-1)和高剂量(20 mg.kg-1)的胆碱对心律失常的保护作用。结果给予胆碱可明显对抗乌头碱或... 目的探讨胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用。方法大鼠和豚鼠分别注射乌头碱或哇巴因制备心律失常模型,观察预先给予低剂量(5 mg.kg-1)和高剂量(20 mg.kg-1)的胆碱对心律失常的保护作用。结果给予胆碱可明显对抗乌头碱或哇巴因所诱发的心律失常,表现为明显延迟心律失常的出现,推迟动物死亡时间等。高剂量胆碱对心律失常的保护作用优于低剂量。结论胆碱对心律失常具有保护作用,高剂量的作用优于低剂量。 展开更多
关键词 心律失常 胆碱 保护作用 4-DAmP m3型乙酰胆碱受体 乌头碱 哇巴因
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