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基于miR-223/NLRP3轴研究柚皮素对氧诱导视网膜病变中小胶质细胞活化的影响 被引量：4
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作者 楚瑞雪 孙先桃 王惠 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期46-52,共7页
目的基于微小RNA(miR)-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴探讨柚皮素(NAR)对氧诱导视网膜病变(OIR)中小胶质细胞活化的影响。方法150只7日龄(P7)C57BL/6J幼鼠分为常氧组、OIR组、NAR组、NAR+阴性对照组、NAR+miR-223拮抗... 目的基于微小RNA(miR)-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴探讨柚皮素(NAR)对氧诱导视网膜病变(OIR)中小胶质细胞活化的影响。方法150只7日龄(P7)C57BL/6J幼鼠分为常氧组、OIR组、NAR组、NAR+阴性对照组、NAR+miR-223拮抗剂组,每组30只。除常氧组外,其余各组幼鼠及其母鼠在P7~P12移至氧气体积分数(75±2)%封闭氧箱中,连续5 d,P12返回正常氧环境中;常氧组在正常氧环境中常规饲养。NAR组幼鼠腹腔注射100 mg/(kg·d)NAR,NAR+阴性对照组在NAR基础上P12尾静脉注射2.5 mg/kg miR-223拮抗剂阴性对照,NAR+miR-223拮抗剂组在NAR基础上P12尾静脉注射2.5 mg/kg miR-223拮抗剂,常氧组、OIR组每天腹腔注射等体积CMC、P12尾静脉注射等体积生理盐水。实时荧光定量PCR(RT-qRCR)检测视网膜中miR-223水平;幼鼠眼底行荧光素眼底血管造影(FFA);苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜形态;免疫荧光检测视网膜中小胶质细胞标志物钙离子结合蛋白-1(Iba-1)情况;Western blot检测视网膜中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18蛋白表达情况。结果OIR组出现血管破裂,荧光漏在视网膜中,视网膜泛白,血管出现收缩,视网膜厚度变厚、细胞排列松散,部分出现细胞缺失现象、血管新生现象;NAR组、NAR+阴性对照组血管破裂现象缓解,视网膜泛白现象减轻,但视网膜细胞仍松散;NAR+miR-223拮抗剂组血管破裂,荧光漏在视网膜中,视网膜泛白明显,视网膜细胞松散严重、细胞缺失明显。与常氧组相比,OIR组视网膜中miR-223水平降低(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平升高(P<0.05);与OIR组相比,NAR组、NAR+阴性对照组视网膜中miR-223水平升高(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平降低(P<0.05);分别与NAR组、NAR+阴性对照组相比,NAR+miR-223拮抗剂组视网膜中miR-223水平降低(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平升高(P<0.05)。结论NAR能够升高miR-223的表达进而抑制NLRP3炎症体的表达,从而缓解小胶质细胞过度活化现象,实现对OIR的缓解。 展开更多
关键词 微小rna-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3轴 柚皮素 氧诱导视网膜病变 小胶质细胞活化
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褪黑素调控MEG3/miR-223/NLRP3轴对流感病毒感染小鼠模型肺损伤的影响 被引量：3
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作者 靳莉 徐超 +1 位作者 张华 李振华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2528-2533,共6页
目的:探究褪黑素(MT)调控母体表达基因3(MEG3)/微小RNA-223(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对流感病毒感染小鼠模型肺损伤的保护情况。方法:50只小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、MT低、中、高剂量组,每组10... 目的:探究褪黑素(MT)调控母体表达基因3(MEG3)/微小RNA-223(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对流感病毒感染小鼠模型肺损伤的保护情况。方法:50只小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、MT低、中、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组以5×105 EID50剂量给予H7N9病毒悬浮液滴鼻,对照组给予等体积磷酸缓冲液滴鼻。造模后当天MT低、中、高剂量组分别腹腔注射15、30、60 mg/kg MT,对照组、模型组腹腔注射等体积生理盐水。末次给药24 h处死小鼠进行实验。所有小鼠检测肺指数;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态;ELISA检测肺组织中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、IFN-β水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠肺组织中MEG3 mRNA、miR-223水平;蛋白免疫印迹检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白水平。生物信息学预测和双荧光素酶实验检测MEG3与miR-223、miR-223与NLRP3的靶向关系。结果:病理结果显示模型组小鼠肺组织肺泡壁充血明显、腔内出现明显的炎症渗出及炎症细胞浸润明显;MT(低、中、高)剂量组随着MT剂量的升高,小鼠肺组织肺泡壁充血现象、腔内炎症渗出及炎症细胞浸润现象均得到改善。与对照组相比,模型组肺指数、肺组织中趋化因子、炎症因子、抗病毒因子、MEG3水平,NLRP3通路蛋白水平升高(P<0.05),miR-223水平降低(P<0.05);添加MT后抗病毒因子升高明显,其余指标均有所改善。miR-223与MEG3、NLRP3均存在靶向调控关系。结论:MT能够缓解H7N9流感病毒感染小鼠的肺损伤,可能与调控MEG3/miR-223/NLRP3轴缓解炎症有关。 展开更多
关键词 褪黑素 母体表达基因3/微小rna-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3轴 流感病毒感染 肺损伤
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硼替佐米调节miR-223/NLRP3轴对脂多糖诱导的人单核细胞炎症反应的影响 被引量：5
3
作者 莫湘涛 张依山 李勇军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1482-1486,共5页
目的:探讨硼替佐米(BTZ)调节微小RNA-233(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞炎症反应的影响。方法:从类风湿性关节炎(RA)患者外周血中分离、纯化单核细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA... 目的:探讨硼替佐米(BTZ)调节微小RNA-233(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞炎症反应的影响。方法:从类风湿性关节炎(RA)患者外周血中分离、纯化单核细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测单核细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,并根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选LPS的最佳诱导时间和BTZ的最佳处理浓度。实验分为对照组、LPS诱导组和BTZ组。RT-qPCR法测定各组单核细胞中miR-223水平;Western blot法测定单核细胞中NLRP3、caspase-1、细胞因子信号抑制物1(SOCS1)和含SH2结构域的肌醇磷酸酶1(SHIP-1)水平。结果:成功从RA患者外周血中分离、纯化出单核细胞,其呈类球形,分布均匀;经LPS诱导24 h后,细胞多呈梭形、聚集状。根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选出LPS的最佳诱导时间为24 h,BTZ的最佳处理浓度为50 nmol/L。与对照组相比,LPS诱导组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著降低(P<0.05),NLRP3和caspase-1水平显著升高(P<0.05);与LPS诱导组相比,BTZ组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著升高(P<0.05),NLRP3和caspase-1水平显著降低(P<0.05)。结论:BTZ可能通过阻断miR-223/NLRP3轴活化,减少LPS诱导的人单核细胞炎症因子的分泌。 展开更多
关键词 硼替佐米 微小rna-223 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 类风湿性关节炎 单核细胞
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