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受激活调节正常T细胞表达和分泌因子及其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾的表达与定位
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作者 冯潇 程胖 +2 位作者 赵洁 肖岚 李臻 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期269-273,共5页
目的:观察受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTEs)与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾中的表达和定位。方法:采用免疫组织化学法检测成年大鼠附睾上皮RANTES及其受体的细胞定位,免疫荧光双标染色分别显示RANTES与CCR1、CCR5的细胞... 目的:观察受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTEs)与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾中的表达和定位。方法:采用免疫组织化学法检测成年大鼠附睾上皮RANTES及其受体的细胞定位,免疫荧光双标染色分别显示RANTES与CCR1、CCR5的细胞共定位情况。RT-PCR检测RANTES及其受体mRNA表达水平,免疫印迹检测RAN—TES及其受体的蛋白量。结果:RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾各段呈特异性表达。免疫印迹在大鼠附睾各段检测到RANTES及其受体CCR1、CCR5特异性蛋白条带。RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾上皮主要表达于基细胞。双重免疫荧光显示RANTES与CCR1、CCR5在附睾管基细胞共存。结论:RANTES可能通过自分泌或(和)旁分泌方式在大鼠附睾基细胞功能活动方面起重要作用。 展开更多
关键词 受激活调节正常t细胞表达和分泌因子 CCR1 CCR5 附睾 细胞 大鼠
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猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备
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作者 付明智 李新新 +1 位作者 刘雪威 李焕荣 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2556-2565,共10页
【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重... 【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析重组蛋白的诱导表达情况;重组菌经超声破碎以镍柱对重组蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备杂交瘤细胞,采用间接ELISA筛选和鉴定所制备单克隆抗体和亚类,利用Western blotting及间接免疫荧光(IFA)方法鉴定单克隆抗体的特异性。【结果】试验成功构建了pGEX-6P-1-SLPI、pET-28a-SLPI重组质粒,获得纯度较高的His-SLPI、GST-SLPI重组蛋白,分子质量分别为27和50 ku,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达;获得3株可稳定分泌抗猪SLPI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,9D10为IgG3亚类,9G11、10E2为IgG2b亚类;3株单克隆抗体均可与猪肠上皮细胞内的SLPI结合,9D10在细胞核中显示较强的荧光信号,而9G11、10E2在细胞浆和细胞核中均有荧光信号。【结论】本研究成功制备了重组His-SLPI和GST-SLPI蛋白,获得3株稳定分泌抗猪源SLPI单克隆抗体,特异性良好,为进一步研究猪源SLPI特性及其在黏膜免疫中的作用搭建技术平台。 展开更多
关键词 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI) 原核表达 单克隆抗体
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血清白介素6和T细胞激活分泌调节因子水平在腹主动脉瘤的表达及临床意义 被引量:1
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作者 李林 薛智军 +2 位作者 李强 陈啸 王豪夫 《菏泽医学专科学校学报》 2018年第1期4-6,37,共4页
目的探讨血清白介素6(IL-6)和T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在腹主动脉瘤的表达及其相关性。方法选取自2016年5月—2017年12月来我院就诊并确诊为腹主动脉瘤的患者40例作为研究组,同期门诊查体健康者40例作为对照组。采用酶联免疫法检... 目的探讨血清白介素6(IL-6)和T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在腹主动脉瘤的表达及其相关性。方法选取自2016年5月—2017年12月来我院就诊并确诊为腹主动脉瘤的患者40例作为研究组,同期门诊查体健康者40例作为对照组。采用酶联免疫法检测血清IL-6与RANTES水平、应用荧光定量PCR检测IL-6和RANTES m RNA的表达,分析血清IL-6与RANTES与临床病理参数的关系以及IL-6与RANTES相关性。结果两组血清IL-6浓度比较,差异有统计学意义(P<0.01);两组血清RANTES浓度比较,差异有统计学意义(P<0.01)。两组IL-6、RANTES m RNA相对表达比较,差异有统计学意义(P<0.01)。腹主动脉瘤中动脉瘤直径≥5.0 cm和有心血管疾病史患者IL-6、RANTES的表达高于动脉瘤直径<5.0 cm和无心血管疾病者,RANTES m RNA及浓度和IL-16呈正相关关系(r=0.521 6,P<0.005;r=0.6021,P<0.005)。结论腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES水平显著升高,且二者呈正相关性。 展开更多
关键词 腹主动脉瘤 白介素6 t细胞激活分泌调节因子
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CD4^+CD25^+调节性T细胞及转化生长因子-1在血小板输注无效患者中的表达和意义 被引量:5
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作者 陈小洁 苑召虎 +2 位作者 阳雪新 杨惠宽 罗淑兰 《中国医药导报》 CAS 2019年第16期80-83,共4页
目的研究CD4^+CD25^+调节性T细胞及转化生长因子-β1(TGF-β1)在血小板输注无效症(PTR)患者中的表达和意义。方法选取2017年4月~2018年4月广州市第一人民医院(以下简称“我院”)收治的重症再生障碍性贫血(SAA)发生PTR患者34例作为为研... 目的研究CD4^+CD25^+调节性T细胞及转化生长因子-β1(TGF-β1)在血小板输注无效症(PTR)患者中的表达和意义。方法选取2017年4月~2018年4月广州市第一人民医院(以下简称“我院”)收治的重症再生障碍性贫血(SAA)发生PTR患者34例作为为研究组。另取选取同期我院收治的SAA未发生PTR患者44例作为对照组。分别检测并比较两组患者CD4^+CD25^+调节性T细胞及血浆TGF-β1表达水平,并采用受试者工作特征曲线(ROC)分析上述两项指标在PTR中的诊断效能。结果输注前后研究组CD4^+CD25^+调节性T细胞表达水平低于对照组(P <0.05),且研究组血浆TGF-β1水平低于对照组(P <0.05)。经ROC曲线分析发现,CD4^+CD25^+调节性T细胞、TGF-β1联合检测诊断PTR的曲线下面积、敏感性、特异性高于上述两项指标单独检测(P <0.05)。结论 PTR患者CD4^+CD25^+调节性T细胞及TGF-β1水平均存在明显低表达,临床工作中可通过联合检测上述两项指标的表达情况,为临床PTR的防治提供参考依据。 展开更多
关键词 血小板输注无效症 CD4^+CD25^+调节性t细胞 转化生长因子-Β1 表达意义
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分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在不同分期的结肠癌组织中的表达
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作者 魏志江 刘桂英 贾汝福 《当代医药论丛》 2017年第19期44-45,共2页
目的 :探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在不同分期的结肠癌组织中的表达情况。方法 :择取2014年2月至2017年6月期间河北省沧州市中心医院收治的50例结肠癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学法对这些患者进行SLPI检测。分析SLPI... 目的 :探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在不同分期的结肠癌组织中的表达情况。方法 :择取2014年2月至2017年6月期间河北省沧州市中心医院收治的50例结肠癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学法对这些患者进行SLPI检测。分析SLPI在不同分期结肠癌组织中表达的情况。结果 :不同分期的结肠癌患者其癌组织中SLPI的表达水平存在一定的差异。Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平均低于Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :Ⅰ期结肠癌患者和Ⅱ期结肠癌患者癌组织中SLPI的表达水平均高于Ⅲ期结肠癌患者和Ⅳ期结肠癌患者。SLPI可作为鉴别结肠癌分期、预测结肠癌患者预后的重要指标。 展开更多
关键词 结肠癌 分期 表达 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子
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肺炎克雷伯杆菌分泌因子及活菌诱导人肺上皮细胞表达分泌IL-8的研究 被引量:1
6
作者 陈襄文 王芳 +4 位作者 周敏燕 冯云 黄宁 王伯瑶 吴琦 《四川生理科学杂志》 2004年第1期7-10,共4页
目的 :探讨肺炎克雷伯杆菌 (Klebsiellapneumoniae ,Kp)分泌因子及活菌诱导肺上皮细胞株表达和分泌IL 8的状况。方法 :用临床分离株Kp0 3 1 1 6、Kp0 3 1 83的细菌培养上清或活菌刺激肺上皮细胞株A5 49和SPC A 1 ,酶联免疫吸附实验 (ELI... 目的 :探讨肺炎克雷伯杆菌 (Klebsiellapneumoniae ,Kp)分泌因子及活菌诱导肺上皮细胞株表达和分泌IL 8的状况。方法 :用临床分离株Kp0 3 1 1 6、Kp0 3 1 83的细菌培养上清或活菌刺激肺上皮细胞株A5 49和SPC A 1 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测细胞IL 8表达量。结果 :①两株Kp培养上清分别刺激A5 49或SPC A 1后 ,IL 8表达量均有显著增高 (P <0 .0 1 ) ,且随上清刺激浓度增加而上升。②两株Kp及DH5 (活菌分别与SPC A 1共孵育 2h ,用庆大霉素杀死胞外菌 ,继续孵育 2 4h后两株Kp诱导细胞IL 8表达量均显著高于DH5α(P <0 .0 1 ) ,且随细菌数 /细胞数比例增大而上升。结论 :Kp分泌因子及活菌都能够诱导肺上皮细胞IL 8表达 ,而活菌上调IL 8的效应较培育上清分泌因子更显著 ,提示肺上皮细胞在Kp感染刺激的肺部炎症反应中起重要作用。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯杆菌 IL-8 分泌因子 活菌 细胞表达 SPC-A-1 酶联免疫吸附实验 细胞株A549 肺上皮细胞 人肺 肺部炎症反应 培养上清 上皮细胞 临床分离株 表达 庆大霉素 DH5Α 24h 细胞 细菌数 上升 孵育
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颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响 被引量:1
7
作者 黄东标 胡晓燕 +5 位作者 钱琤 陈燕 周晔 陈波 邓安梅 仲人前 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期173-175,共3页
目的探讨颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响。方法①在U937细胞中加入终浓度为100ng/ml的乙酰肉豆蔻佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA),刺激2d后,再加入不同组合的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、葡萄球菌... 目的探讨颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响。方法①在U937细胞中加入终浓度为100ng/ml的乙酰肉豆蔻佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA),刺激2d后,再加入不同组合的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、葡萄球菌的脂膜酸(lipoteichoic acid,LTA)、颗粒溶素(granulysin,GNLY),刺激培养4h后收集细胞上清,用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的含量。②在U937细胞或原代单核细胞中加入GNLY后,在37℃条件下,刺激4h,收集上清,以ELISA分析MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1,单核细胞趋化因子-1)和RANTES(reduced upon activation normal Texpression and secreted,正常T细胞活化时表达和分泌减少因子)的含量;收集细胞并抽提总RNA后,以实时荧光定量RT-PCR方法检测部分基因表达水平的改变。结果加入GNLY后,LPS诱导U937细胞分泌的TNF-α水平显著增加(P<0.05);U937细胞或单核细胞的MCP-1、RANTES的mRNA水平显著增加(P<0.05),上清液中MCP-1和RANTES水平也增加(P<0.05)。结论GNLY可促进LPS诱导单核细胞分泌TNF-α,本身可刺激单核细胞表达MCP-1、RANTES增高,这为以后进一步研究颗粒溶素的作用机制打下了基础。 展开更多
关键词 颗粒溶素 单核细胞 单核细胞趋化因子-1 正常t细胞活化时表达和分泌减少因子 肿瘤坏死因子
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缺氧时视网膜血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α及其mRNA的时序性表达(英文) 被引量:4
8
作者 邓爱军 姜德咏 《国际眼科杂志》 CAS 2005年第2期225-228,共4页
目的:探讨在缺氧状态下视网膜血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)及其m RNA 表达的时空规律。方法:对分离的牛视网膜血管内皮细胞分别进行常规和CoCl2模拟缺氧培养,采用免疫组化和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测不同缺氧时间HIF-... 目的:探讨在缺氧状态下视网膜血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)及其m RNA 表达的时空规律。方法:对分离的牛视网膜血管内皮细胞分别进行常规和CoCl2模拟缺氧培养,采用免疫组化和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测不同缺氧时间HIF-1α及其mRNA的表达。结果:正常对照组HIF-1α有极低表达,在缺氧1h时表达量显著上升,4h 达到高峰,16h后下降。与对照组比较,各缺氧组HIF-1α的表达均有显著性差异(P<0.01)。但各缺氧组HIF-1αmRNA的表达无明显差异。结论:视网膜血管内皮细胞在缺氧早期HIF-1α表达有短暂、迅速的增加,但其mRNA的表达无明显变化,提示缺氧可以促进视网膜血管内皮细胞HIF-1α的表达,但不是在基因的转录水平。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子-1Α 血管内皮细胞 时序性表达 HIF-1α 逆转录多聚酶链反应 mRNA表达 缺氧状态下 CoCl2 正常对照组 显著性差异 缺氧培养 牛视网膜 缺氧时间 免疫组化 转录水平 表达 表达
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p53、p21^(WAF1)、MDM2在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义 被引量:1
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作者 吴江 张晓华 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第17期69-69,共1页
关键词 NK/t细胞淋巴瘤 p53蛋白 P21WAF1 MDM2 细胞周期抑制因子 DNA修复 抑癌基因 细胞生长 表达 恶性度
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克雷伯杆菌分泌因子及菌体成分在细胞内、外刺激肺上皮细胞分泌IL-8的研究 被引量:1
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作者 周敏燕 王国兴 +3 位作者 冯云 黄宁 王伯瑶 吴琦 《四川生理科学杂志》 2005年第1期1-3,共3页
目的:通过比较肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae,Kp)分泌因子及菌体成分对经过digitonin处理和未处理的肺上皮细胞株IL8分泌的影响,进一步了解克雷伯杆菌诱导肺上皮细胞炎症反应的信号转导机制。方法:实验分为两组,一组使用能使细... 目的:通过比较肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae,Kp)分泌因子及菌体成分对经过digitonin处理和未处理的肺上皮细胞株IL8分泌的影响,进一步了解克雷伯杆菌诱导肺上皮细胞炎症反应的信号转导机制。方法:实验分为两组,一组使用能使细胞膜通透性增加的温和去污剂digitonin处理,而另一组不处理。分别用Kp03183的细菌培养上清和超声处理的菌体成分刺激肺上皮细胞株A549,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞IL8表达水平。并用RT-PCR的方法检测肺上皮细胞胞内模式识别受体NOD1的表达。结果:Kp培养上清对未经digitonin处理的细胞IL8分泌无明显增强作用,与对照相比差异无显著意义(p>0.05),菌体成分能刺激IL8分泌增加(P<0.01),但增高不超过一倍。经digitonin处理使细胞膜通透性增加后,Kp培养上清及菌体成分刺激细胞IL8的作用都增强,菌体成分刺激IL8效果更为显著,为对照的3倍,而培养上清作用相对较弱。RT-PCR检测结果表明,肺上皮细胞表达胞内模式识别受体NOD1。结论:菌体成分是诱导炎症反应更有效的刺激物,肺炎克雷柏杆菌侵入肺上皮细胞可能是引发细胞炎症反应的始动环节。肺上皮细胞表达胞内模式识别受体NOD1,它是否参与肺上皮细胞识别肺炎克雷伯杆菌菌体成分,值得进一步的研究。 展开更多
关键词 分泌因子 体成分 上皮细胞分泌 肺炎克雷伯杆菌 细胞 外刺激 模式识别受体 酶联免疫吸附实验 IL-8分泌 细胞膜通透性 肺上皮细胞 细胞株A549 肺炎克雷柏杆菌 培养上清 信号转导机制 炎症反应 Rt-PCR 细胞表达 上皮细胞
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转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因瘤苗治疗T细胞淋巴瘤的实验研究
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作者 高全立 马保根 +4 位作者 刘吉宝 李玉富 范瑞华 耿丽 胡杰英 《河南医学研究》 CAS 2004年第3期210-213,共4页
目的:探讨转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophge colong stimulating factor,GM-CSF)基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法:将小鼠GM-CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆... 目的:探讨转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophge colong stimulating factor,GM-CSF)基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法:将小鼠GM-CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆,经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM-CSF的RMA克隆,该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力。结果:获得了高表达GM-CSF的RMA克隆,将其用丝裂霉素灭活后免疫小鼠使小鼠使小鼠产生了抗肿瘤免疫保护力。结论:转GM-CSF基因瘤苗可作为有效的抗肿瘤瘤苗。 展开更多
关键词 治疗 瘤苗 细胞巨噬细胞集落刺激因子 GM-CSF 丝裂霉素 t细胞淋巴瘤 基因 克隆细胞 单个细胞 表达
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自身免疫甲状腺疾病Th_1/Th_2类细胞因子的漂移及其意义 被引量:1
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作者 李全忠 江新宇 文世林 《山东医药》 CAS 北大核心 2002年第36期55-56,共1页
为了探讨自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病的始动原因,明确AITD Th_1/Th_2相关细胞因子群谱的特征,我们以IFN-γ、IL-2和TNF-α代表Th1类细胞因子,IL-4、IL-6、IL-10代表Th2类细胞因子,采用逆转录酶链聚和反应(RT-PCR)的方法检测了34例Gr... 为了探讨自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病的始动原因,明确AITD Th_1/Th_2相关细胞因子群谱的特征,我们以IFN-γ、IL-2和TNF-α代表Th1类细胞因子,IL-4、IL-6、IL-10代表Th2类细胞因子,采用逆转录酶链聚和反应(RT-PCR)的方法检测了34例Graves’病(GD)和24例桥本氏甲状腺炎(HT)的Th_1/Th_2类细胞因子的mRNA表达。现报告如下。 展开更多
关键词 细胞因子 表达 甲状腺 粒子肉 分泌 th1/th2 抗甲状腺药 AItD
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毛细支气管炎患儿T细胞亚群、ICAM-1和RANTES检测的临床意义 被引量:3
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作者 张松林 邹丽萍 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第45期46-47,共2页
目的探讨T细胞亚群、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)在毛细支气管炎(简称毛支)发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测30例毛支患儿、26例支气管肺炎患儿及26例正常儿童外周血T细胞亚群、... 目的探讨T细胞亚群、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)在毛细支气管炎(简称毛支)发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测30例毛支患儿、26例支气管肺炎患儿及26例正常儿童外周血T细胞亚群、ICAM-1表达情况,ELISA法测定其血清RANTES水平。结果毛支组CD4+/CD8+高于肺炎组及对照组(P均<0.05);毛支组ICAM-1表达高于肺炎组及对照组(P<0.05或<0.01),肺炎组ICAM-1表达高于对照组(P<0.05);毛支组和肺炎组RANTES水平高于对照组(P<0.01或<0.05)。毛支组ICAM-1与RANTES呈正相关(r=0.732,P<0.01)。结论T细胞亚群、ICAM-1及RANTES的异常表达参与了毛支的发病过程。 展开更多
关键词 细支气管炎 流式细胞 t细胞亚群 细胞间黏附分子-1 调节激活正常t细胞表达和分泌的细胞因子
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粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中表达的研究进展 被引量:1
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作者 何磊 于凤波 +1 位作者 王永峰 杭太俊 《天津药学》 2011年第2期57-59,共3页
粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factors,G-CSF)是存在于正常人体、刺激骨髓细胞集落形成的集落刺激因子的一种。本文综述了G-CSF的发现和临床应用概况,重点调研其表达研究进展。
关键词 大肠杆菌 细胞集落刺激因子 分泌表达
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VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能
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作者 贺俊 王慧明 姚航平 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第3期281-286,共6页
目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂... 目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入M C 3T 3-E 1细胞。细胞经G 418加压有限稀释筛选,采用EL ISA法、W estern b lot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV 304)的增殖活性影响。结果:通过基因测序表明获得的VEGF 165和VEGF 121与G eneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF 165/pcDNA 3.1(+)质粒和VEGF 121/pcDNA 3.1(+)质粒,EL ISA及W estern b lot检测结果均表明VEGF 165和VEGF 121基因转染M C 3T 3-E 1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV 304细胞生长。结论:基因转染的M C 3T 3-E 1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子类/代谢 血管内皮生长因子类/遗传 3t3细胞 基因表达 转染 质粒
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MRG15在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达
16
作者 靳三全 《国际眼科杂志》 CAS 2015年第3期411-413,共3页
目的:研究MRG15(死亡因子相关基因)在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)、正常晶状体上皮细胞的表达差异。方法:性成熟的健康雌性SD大鼠40只,随机分为研究组、对照组,每组20只,研究组切除双侧卵巢、低浓度萘长间隔给药,建立... 目的:研究MRG15(死亡因子相关基因)在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)、正常晶状体上皮细胞的表达差异。方法:性成熟的健康雌性SD大鼠40只,随机分为研究组、对照组,每组20只,研究组切除双侧卵巢、低浓度萘长间隔给药,建立围绝经期ARC模型;对照组常规饲养。以消减杂交改良法克隆MRG15,并对其cDNA片段应用地高辛标记制作探针。获取两组大鼠晶状体前囊膜切片后,再通过原位杂交法明确晶状体上皮细胞的表达差异。结果:克隆出的MRG15通过BamH1和EcoR1酶切以及琼脂糖电泳,可获取长为639bp的cDNA片段。GeneBank对比显示,其同源性达到99.0%。原位杂交显示,ARC患者及正常晶状体上皮细胞内均可见MRG15表达。研究组阳性细胞百分率与对照组相较,有统计学差异(P<0.05)。研究组积分指数与对照组相较,有统计学差异(P<0.05)。结论:MRG15在ARC和正常晶状体上皮细胞中均有表达,并且ARC较正常晶状体上皮细胞表达增高,这可能与MRG15对晶状体上皮细胞中一部分关键基因的转录产生抑制效应有关,通过降低晶状体上皮细胞的功能,使其出现衰老样改变,进而形成白内障,临床应对此进行更进一步的研究。 展开更多
关键词 死亡因子 相关基因 年龄相关性白内障 正常晶状体 上皮细胞 表达
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食管鳞状细胞癌组织中CyclinD1的表达变化及意义 被引量:1
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作者 赵醒 赵宇阳 +5 位作者 王军 赵杨 刘莎莎 刘海旺 程玉 李春辉 《山东医药》 CAS 2014年第39期103-104,共2页
食管癌是人类常见的恶性肿瘤,在消化道肿瘤中仅次于胃癌而居第2位。有学者研究发现,任何肿瘤的发生都与正常细胞的调控周期失调有关。CyclinD1是细胞周期调节因子之一[1],是G1期细胞周期素,可能与多种肿瘤的发生密切相关。本研究... 食管癌是人类常见的恶性肿瘤,在消化道肿瘤中仅次于胃癌而居第2位。有学者研究发现,任何肿瘤的发生都与正常细胞的调控周期失调有关。CyclinD1是细胞周期调节因子之一[1],是G1期细胞周期素,可能与多种肿瘤的发生密切相关。本研究观察了Cy-clinD1在食管鳞状细胞癌组织中的表达水平,并探讨其意义,旨在为临床提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌组织 CYCLIND1 表达变化 细胞周期调节因子 G1期细胞周期素 恶性肿瘤 消化道肿瘤 正常细胞
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IgA肾病肾小球系膜细胞P27与PCNA表达的意义 被引量:1
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作者 郑京 乔瑞英 +5 位作者 张洪生 阮诗玮 王智 洪江淮 丘余良 陈淑娇 《中国中西医结合肾病杂志》 2005年第7期416-417,共2页
关键词 IGA肾病 PCNA表达 增殖细胞核抗原(PCNA) P27 肾小球系膜细胞增殖 细胞周期调控蛋白 增生性肾小球肾炎 肾小球系膜区 常规病理检查 肾小球疾病 发病机制 分泌因子 MC增殖 近期疗效 治疗策略 免疫性 亲和力 特异性 肾活检
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HIF-1α质粒转染NIH_3T_3细胞的体外实验
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作者 李建勇 王彬尧 +3 位作者 王长谦 厉锦华 李慧丽 胡大一 《中国心血管病研究》 CAS 2005年第6期459-461,共3页
目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1)在NIH3T3细胞的体外表达。方法首先构建真核表达质粒,以脂质体为介导,体外转染细胞,经RT-PCR,Westernblot,ELISA检测基因在mRNA、蛋白质等方面的表达。结果半定量RT-PCR证实在NIH3T3细胞表达外源基因,Weste... 目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1)在NIH3T3细胞的体外表达。方法首先构建真核表达质粒,以脂质体为介导,体外转染细胞,经RT-PCR,Westernblot,ELISA检测基因在mRNA、蛋白质等方面的表达。结果半定量RT-PCR证实在NIH3T3细胞表达外源基因,Westernblot检测到外源HIF-1蛋白质表达,ELISA试验证明表达的基因产物具有生物活性。结论PcDNA3-HIF1真核表达质粒能够有效地在体外表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础。 展开更多
关键词 NIH3t3细胞 HIF-1Α 体外实验 Western 真核表达质粒 ELISA检测 低氧诱导因子 BLOt检测 体外表达 蛋白质表达 转染细胞 mRNA 外源基因 细胞表达 生物活性 基因产物 目的基因 动物实验 PCR 脂质体 半定量 Rt
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卵母细胞产生的生长因子在卵泡发育中的作用
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作者 吴琰婷 黄荷凤 徐键 《国外医学(计划生育分册)》 2005年第4期182-185,共4页
卵巢能够规律的产生优势卵泡,卵泡正常发育和排卵是女性妊娠的基础。已知卵泡刺激素(FSH)是卵泡发生的重要调节因子,而过去几年中发现卵母细胞产生的生长因子可以通过自分泌和旁分泌途径调节FSH的作用,因而可知卵巢的生长因子是控制女... 卵巢能够规律的产生优势卵泡,卵泡正常发育和排卵是女性妊娠的基础。已知卵泡刺激素(FSH)是卵泡发生的重要调节因子,而过去几年中发现卵母细胞产生的生长因子可以通过自分泌和旁分泌途径调节FSH的作用,因而可知卵巢的生长因子是控制女性生育的重要因子,这些因子的发现使人们对卵巢的生理观念发生了重大的变化。就卵母细胞产生的生长因子在卵泡发育中的生理作用,以及GDF-9和BMP-15对卵泡发育的作用做一综述。 展开更多
关键词 生长因子 卵泡发育 卵母细胞 卵泡刺激素(FSH) GDF-9 正常发育 调节因子 卵泡发生 分泌途径 重要因子 生理作用 卵巢 分泌 女性
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