基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较 被引量：8

1

作者 潘丽英 王承健 +3 位作者 袁江北 张英 黄琳娟 王仲孚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期237-243,共7页

以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环... 以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的N-糖链进行了定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2和正常细胞系L02中共检测到26种N-糖链,与L02相比,HepG2的大多数高甘露糖型糖链、唾液酸化糖链和岩藻糖基化糖链的数量都明显升高,其中有15种糖链在数量上具有极显著性差异(p<0.01),1种糖链具有显著性差异(p<0.05).本研究为进一步探索肝癌中各类N-糖链的表达特点及发现早期肝癌糖链标志物提供了参考. 展开更多

关键词 原发性肝癌细胞(HepG2) 正常肝细胞(l02) N-糖链 电喷雾电离质谱

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人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的O-糖链的比较分析 被引量：2

2

作者 潘丽英 顾笑 +4 位作者 王承健 强珊 黄琳娟 张英 王仲孚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1275-1281,共7页

以培养的原发性肝细胞癌Hep G2细胞和正常肝细胞L02为研究对象,用细胞裂解液提取总蛋白,然后采用Carlson还原性β-消除法释放O-糖链,以阳离子交换柱结合C18柱纯化分离O-糖链,用电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对O-糖链进行序... 以培养的原发性肝细胞癌Hep G2细胞和正常肝细胞L02为研究对象,用细胞裂解液提取总蛋白,然后采用Carlson还原性β-消除法释放O-糖链,以阳离子交换柱结合C18柱纯化分离O-糖链,用电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对O-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的O-糖链进行定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系Hep G2中检测到10种O-糖链,正常细胞系L02中检测到9种O-糖链,其中9种O-糖链是2种细胞系中共有的,但Hep G2中存在癌细胞中特有的缩短的O-糖链N1A1(Neu Ac-Gal NAc,sialyl Tn抗原).t检验结果表明,Hep G2与L02相比,在检测到的10种O-糖链中有5种的含量具有极显著性差异(P<0.01),2种的含量具有显著性差异(P<0.05). 展开更多

关键词 原发性肝癌细胞HepG2 正常人肝细胞l02 O-糖链 电喷雾电离质谱

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NADH对辐射诱导正常肝细胞株L02损伤时细胞凋亡的影响 被引量：1

3

作者 刘发全 张积仁 +1 位作者 徐小平 李鹏 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第8期599-601,共3页

目的研究抗氧化剂NADH对5.0 GyX射线照射正常细胞的防护作用.方法处理组于5.0 Gy X射线照射后立即加入NADH,一次给药,剂量为100～600 μg/ml,分别观察培养6、12、24 h后凋亡细胞率及p53和Bcl-2蛋白表达,并且与照射后加入RPMI 1640组和... 目的研究抗氧化剂NADH对5.0 GyX射线照射正常细胞的防护作用.方法处理组于5.0 Gy X射线照射后立即加入NADH,一次给药,剂量为100～600 μg/ml,分别观察培养6、12、24 h后凋亡细胞率及p53和Bcl-2蛋白表达,并且与照射后加入RPMI 1640组和假照射组比较.结果NADH抑制细胞凋亡率呈剂量依赖性,在浓度为400～600 μg/ml时达平台,并且能够上调Bcl-2蛋白表达,下p53蛋白表达,差异非常显著(P＜0.01).结论NADH对受照L02肝细胞有明显的防护作用,但其作用机制还需进一步研究. 展开更多

关键词 NADH 辐射防护 细胞凋亡 肝细胞 l02肝细胞 辐射损伤防护剂

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瘦素对缺氧复氧L02肝细胞凋亡及Fas／FasL表达的影响 被引量：4

4

作者 周少丽 魏涧琦 +2 位作者 李晓芸 黑子清 陈规划 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1147-1150,共4页

目的:观察瘦素(leptin)对缺氧复氧人正常肝细胞(L02)凋亡的影响。方法:将L02细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组(IR组)和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素(分别为100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和1 600μg/L)干预组,以... 目的:观察瘦素(leptin)对缺氧复氧人正常肝细胞(L02)凋亡的影响。方法:将L02细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组(IR组)和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素(分别为100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和1 600μg/L)干预组,以流式细胞仪分析、DNA缺口末端标记(TUNEL)试验、荧光定量PCR等方法观察leptin对L02肝细胞凋亡、Fas/FasLmRNA表达的影响。结果:(1)与正常对照组相比,IR组细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率增加(P<0.01),加用不同浓度瘦素干预组的细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率与IR组相比明显下降(P<0.05);(2)与正常对照组相比,IR组L02细胞中Fas/FasLmRNA表达明显上调(P<0.01);加用不同浓度瘦素干预组与IR组相比,Fas/FasLmRNA表达下降,以400μg/L瘦素作用明显,结果有显著差异(P<0.05)。结论:瘦素能减轻缺氧复氧培养L02肝细胞的凋亡,其机制可能与其下调细胞中Fas/FasLmRNA的表达有关。 展开更多

关键词 细胞凋亡 肝 缺氧-复氧 l02细胞 瘦素 FAS/FASl

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三七总皂甙对脂肪变性L02肝细胞TG含量及LXRα mRNA表达的影响 被引量：5

5

作者 程少冰 杨钦河 +4 位作者 张玉佩 杨环文 谢芳 薛川松 欧健 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1151-1155,共5页

目的:观察三七总皂甙(PNS)对脂肪变性L02肝细胞内甘油三酯(TG)含量及肝X受体α(LXRα)mRNA表达的影响,探讨其对脂肪变性肝细胞的降脂作用及机制。方法:采用50%小牛血清诱导L02肝细胞48 h建立肝细胞脂肪变性模型,采用MTT法测定PNS作用于... 目的:观察三七总皂甙(PNS)对脂肪变性L02肝细胞内甘油三酯(TG)含量及肝X受体α(LXRα)mRNA表达的影响,探讨其对脂肪变性肝细胞的降脂作用及机制。方法:采用50%小牛血清诱导L02肝细胞48 h建立肝细胞脂肪变性模型,采用MTT法测定PNS作用于脂肪变性肝细胞的适宜浓度,随后将其分为5组,模型组、自然恢复组、PNS低剂量组(10 mg.L-1)、PNS高剂量组(50 mg.L-1),并设正常组,除模型组继续予含50%小牛血清的RPMI-1640培养基培养外,余组均改予含10%小牛血清培养。药物作用24 h后,油红O染色观察肝细胞内脂滴变化,全自动生化仪检测肝细胞内TG含量,运用RT-PCR法检测肝细胞内LXRα mRNA的表达。结果:与正常组比较,油红O染色示模型组肝细胞内橘红色脂滴明显增加,并出现脂滴融合现象,模型组TG含量明显升高(P<0.01)。PNS治疗24 h后,PNS各治疗组与自然恢复组比较,肝细胞内TG含量均明显减少(P<0.05),以低剂量组下降更为显著(P<0.01);油红O染色显示,PNS低剂量组肝细胞内脂滴数减少最为明显。与正常组比较,模型组肝细胞LXRαmRNA的表达明显上调(P<0.01);与自然恢复组比较,PNS各治疗组肝细胞LXRα mRNA的表达量均有下降,以低剂量组下降显著(P<0.05)。结论:PNS能显著降低脂肪变性肝细胞内TG含量,减轻肝细胞脂肪变性。LXRα mRNA的高表达与肝细胞脂肪蓄积密切相关,PNS可能是通过下调LXRαmRNA的表达来改善肝细胞的脂肪变性。 展开更多

关键词 三七总皂甙 甘油三酯类 肝X受体Α 脂肪变性 l02细胞 肝疾病 非酒精性脂肪性

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ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性中的表达变化 被引量：2

6

作者 王涛 雷增杰 +6 位作者 王斌 李青 王春华 熊吉 赖姝婕 刘琴 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期89-94,共6页

目的研究ZCWCC1蛋白在人L02肝细胞脂肪变性中的表达变化并探讨其机制。方法培养中加用500μmol/L的油酸处理L02肝细胞,建立肝细胞脂肪变性体外模型,采用油红染色评价脂质蓄积程度,采用免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察ZCWCC1蛋白在L02肝... 目的研究ZCWCC1蛋白在人L02肝细胞脂肪变性中的表达变化并探讨其机制。方法培养中加用500μmol/L的油酸处理L02肝细胞,建立肝细胞脂肪变性体外模型,采用油红染色评价脂质蓄积程度,采用免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性时的表达改变,以Western blot对其进行半定量评价,并使用赖氨酸蛋白酶抑制剂N-乙基马来酰亚胺(N-Ethylmaleimide,NEM)及蛋白酶体抑制剂MG132对ZCWCC1蛋白表达变化的相关机制进行初步探讨。结果油红染色及细胞甘油三酯含量测定证明L02肝细胞脂肪变性体外模型成功建立,激光共聚焦显微镜观察发现ZCWCC1蛋白主要定位在胞核内,其荧光信号随油酸诱导时间延长而减弱,Western blot检测结果显示,ZCWCC1表达水平也随油酸诱导时间延长(0、3、6、12、24、48 h)而降低[(56 283±303)、(56 753±539)、(55 561±996)、(56 257±326)、(48 339±712)、(43 022±2 198),P<0.01]。NEM处理可使ZCWCC1降解增加,MG132处理可逆转ZCWCC1在L02肝细胞脂肪变性中的下降趋势。结论 ZCWCC1蛋白在L02肝细胞的脂肪变性过程中表达下降,可能与泛素-蛋白酶体途径有关。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 脂肪变性 l02肝细胞 ZCWCC1 泛素-蛋白酶体途径

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辅酶NADH抑制人肝细胞株L02化疗凋亡损伤的作用 被引量：2

7

作者 徐萌 张积仁 王淑娟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期200-202,共3页

为研究辅酶NADH对顺铂 (DDP)诱导的肝细胞凋亡的抑制作用及其分子机制 ,采用透射和扫描电镜检测肝细胞超微结构改变 ,碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率 ,RT PCR检测p5 3和bcl 2基因表达变化 ,并用紫外分光光度法测定凋亡分子caspas... 为研究辅酶NADH对顺铂 (DDP)诱导的肝细胞凋亡的抑制作用及其分子机制 ,采用透射和扫描电镜检测肝细胞超微结构改变 ,碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率 ,RT PCR检测p5 3和bcl 2基因表达变化 ,并用紫外分光光度法测定凋亡分子caspase 3和caspase 8活性水平的改变。结果显示 ,与DDP组比较 ,NADH/DDP组典型凋亡超微形态改变不明显 ,细胞凋亡率明显下降 ,p5 3基因表达下降 ,bcl 2基因表达上升 ,caspase 3和caspase 8活性维持在低水平。 展开更多

关键词 辅酶类 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 脱噬作用 顺铂 肝细胞株 NADH 化疗 l02 细胞凋亡

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丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球对肝细胞L-02的生长抑制作用 被引量：2

8

作者 任非 陈建海 +1 位作者 杨西晓 姜耀东 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1126-1130,共5页

目的　研究丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球 (MMC PBCA MNPS)、PBCA MNPS和MF(磁流体 )以及MMC对正常人肝细胞株 (L 0 2细胞 )生长抑制作用的影响。方法　用乳化聚合法分别制备了PBCA MNPS与MMC PBCA MNPS;采用MTT比色法研究了... 目的　研究丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球 (MMC PBCA MNPS)、PBCA MNPS和MF(磁流体 )以及MMC对正常人肝细胞株 (L 0 2细胞 )生长抑制作用的影响。方法　用乳化聚合法分别制备了PBCA MNPS与MMC PBCA MNPS;采用MTT比色法研究了不同浓度的MMC PBCA MNPS、PBCA MNPS、MF与MMC对L 0 2细胞生长抑制作用的影响 ;用自动生化仪测定了乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -0 3 ,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -19基金项目 :国家“863”资助项目 ( 2 0 0 2AA2 14 12 1) ;广东省攻关资助项目 ( 2 0 0 2C3 0 10 3 )作者简介 :任　非 ( 1974-) ,女 ,博士 ,研究方向 :生物药剂学 ,Tel:0 2 0 6164 1888 872 3 6,E mail:renfeisky @tom .com ;陈建海 ( 1947-) ,男 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :生物高分子材料 ,生物药剂学不同浓度的MMC PBCA MNPS对L 0 2细胞的相对抑制率(RIR % )为 :10 0 %、15 1%、2 5 1%、32 1%、39 9%与 4 5 0 % ;不同浓度的PBCA MNPS的RIR %依次为 :1 8%、5 2 %、10 0 %、12 9%、15 1%与 2 9 9% ;不同MMC浓度的RIR %依次为 :2 2 1%、35 1%、4 6 1%、6 2 0 %、80 1%与 88 9%。MF不仅不抑制L 0 2细胞的生长 ,还有利于细胞的生长。按照相对生长率 (RGR % ) ,MMC PBCA 展开更多

关键词 丝裂霉素C 聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球 MTT比色法 乳酸脱氢酶(lDH) 正常人肝细胞株l-02

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Smad7基因过表达对L02肝细胞株增殖的影响 被引量：1

9

作者 陈颖伟 陈源文 +1 位作者 王连升 李定国 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期103-106,共4页

目的观察外源Smad7基因对L0 2肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L0 2肝细胞 ,以RT PCR和Western blot检测外源Smad7基因表达情况 ,MTT法检测L0 2肝细胞增殖活性 ,流式细胞仪检测其细胞周... 目的观察外源Smad7基因对L0 2肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L0 2肝细胞 ,以RT PCR和Western blot检测外源Smad7基因表达情况 ,MTT法检测L0 2肝细胞增殖活性 ,流式细胞仪检测其细胞周期变化。结果AdSmad7体外感染L0 2肝细胞后 ,Smad7mRNA和蛋白水平均显著上调。转化生长因子 β(TGFβ)可抑制L0 2细胞增殖 ,诱导其凋亡。导入外源Smad7可拮抗TGFβ的作用。结论利用AdSmad7导入外源Smad7基因可间接促进肝细胞增殖 。 展开更多

关键词 SMAD7基因 肝细胞增殖 增殖 过表达 体外感染 凋亡 l02细胞 外源 蛋白水平 利用

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过表达MORC2通过下调p53含量抑制L02肝细胞脂肪变性

10

作者 王涛 雷增杰 +6 位作者 王斌 李青 王春华 刘琴 魏艳玲 王军 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期962-967,共6页

目的研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制。方法利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2,qRT-PCR及Western blot鉴定过表达效果后,对L02肝细胞进行脂肪变性诱导,测定细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比... 目的研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制。方法利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2,qRT-PCR及Western blot鉴定过表达效果后,对L02肝细胞进行脂肪变性诱导,测定细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比较过表达前后L02肝细胞的脂肪蓄积程度;利用芯片技术对过表达MORC2前后的基因表达谱进行检测与Pathway分析,筛选过表达MORC2时发生变化的通路并选择对脂代谢有调控作用的p53进行研究;Western blot检测在L02肝细胞脂肪变性诱导时过表达MORC2对p53蛋白含量的影响;在过表达MORC2的基础上对L02肝细胞过表达p53,qRT-PCR及Western blot鉴定p53过表达效果后,通过TG测定观察过表达p53对过表达MORC2改变的L02肝细胞脂肪蓄积程度产生的影响。结果 qRT-PCR及Western blot证明过表达MORC2成功;过表达MORC2的L02肝细胞在脂肪变性诱导后TG含量较MORC2正常表达的L02肝细胞明显降低(P<0.01);基因表达谱芯片及Pathway分析显示脂代谢调控相关的p53通路在过表达MORC2后发生变化;Western blot显示过表达MORC2后,L02肝细胞中p53蛋白水平在脂肪变性诱导前后均降低;qRT-PCR及Western blot验证p53过表达成功,且过表达p53可部分解除MORC2对L02肝细胞脂肪变性的缓解作用。结论过表达MORC2可通过下调p53从而缓解肝细胞脂肪变性。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 脂肪变性 l02肝细胞 MORC2 P53

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NADH在辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤中的防护作用

11

作者 刘发全 张积仁 李鹏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期203-205,共3页

为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用 ,将L0 2肝细胞经 5 0Gy照射后加入不同浓度 (0～ 6 0 0 μg/ml)的NADH ,培养 6、12、2 4h ,观察细胞凋亡率并检测 3组Fas,Bax ,Bcl 2蛋白表达 ,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果表明 ... 为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用 ,将L0 2肝细胞经 5 0Gy照射后加入不同浓度 (0～ 6 0 0 μg/ml)的NADH ,培养 6、12、2 4h ,观察细胞凋亡率并检测 3组Fas,Bax ,Bcl 2蛋白表达 ,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果表明 ,辐射可以诱导细胞凋亡损伤 ,NADH抑制细胞辐射诱导的凋亡呈剂量依赖性 ,并可以上调Bcl 2蛋白和下调Fas、Bax蛋白表达。提示NADH对L0 2肝细胞有明显的抗辐射凋亡损伤作用 ,其作用机制可能与Fas、Bcl 展开更多

关键词 还原型类酰胺腺嘌呤二核苷酸 辐射防护 脱噬作用 肝细胞株 l02细胞 NADH

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NADH抗紫外线诱导的肝细胞株L02凋亡

12

作者 刘发全 张积仁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期232-234,共3页

目的研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02(照射剂量为200J/m2),实验组加/对照组不加NADH(400μg/ml)培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,DNA凝胶电... 目的研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02(照射剂量为200J/m2),实验组加/对照组不加NADH(400μg/ml)培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,DNA凝胶电泳观察DNA断裂片断,流式细胞仪检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果NADH可明显抑制紫外线诱导的肝细胞凋亡,并且能够上调Bcl-2蛋白表达,下调p53、Bax蛋白表达。经紫外线照射后的肝细胞存在自身修复。结论NADH能够抗紫外线诱导的细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2,下调p53、Bax表达有关。 展开更多

关键词 NADH 细胞凋亡 紫外线 肝细胞株l02 肝癌 诱导

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何首乌中大黄素对L02肝细胞CYP亚酶表达及细胞毒性的影响 被引量：23

13

作者 汪美汐 王宇光 +6 位作者 徐焕华 张照研 马增春 肖成荣 谭洪玲 汤响林 高月 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1543-1548,共6页

目的研究何首乌中大黄素(emodin)对L02肝细胞CYP450酶主要亚型表达的影响,探讨其对L02肝细胞的细胞毒性机制。方法不同浓度的Emodin处理L02细胞,通过MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度,Real time PCR法检测Emodin各... 目的研究何首乌中大黄素(emodin)对L02肝细胞CYP450酶主要亚型表达的影响,探讨其对L02肝细胞的细胞毒性机制。方法不同浓度的Emodin处理L02细胞,通过MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度,Real time PCR法检测Emodin各给药组CYP450酶亚型mRNA表达的变化。结果 MTS结果显示,随着Emodin浓度的增加,呈现明显的细胞损伤效应,细胞的存活率逐渐降低并呈现浓度和时间依赖性;同时,LDH释放率在给药48 h时相比于空白组均明显增高。在基因水平上,与空白组相比,Emodin能明显提高CYP450各亚型mRNA表达,并可剂量依赖性诱导CYP1A1、CYP1B1的表达。结论何首乌中大黄素对人正常肝细胞具有明显损伤作用,并能诱导CYP450酶mRNA表达。 展开更多

关键词 何首乌 大黄素 CYP450 肝损伤 l02肝细胞 ABT mRNA表达

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化学修饰L02肝细胞膜生物亲和材料快速筛选大黄降血脂活性成分 被引量：1

14

作者 边惠琴 武晓玉 +4 位作者 夏鹏飞 段文达 杨飞霞 李娇娇 赵磊 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2022年第3期375-382,共8页

为增加细胞膜生物亲和材料使用寿命,建立以APTES修饰硅胶为载体的L02细胞膜生物亲和材料,并将其应用于大黄降血脂活性成分的快速筛选。采用油酸刺激L02肝细胞,建立肝脂肪变性模型;硅胶与APTES、戊二醛发生反应,在硅胶表面引入醛基,游离... 为增加细胞膜生物亲和材料使用寿命,建立以APTES修饰硅胶为载体的L02细胞膜生物亲和材料,并将其应用于大黄降血脂活性成分的快速筛选。采用油酸刺激L02肝细胞,建立肝脂肪变性模型;硅胶与APTES、戊二醛发生反应,在硅胶表面引入醛基,游离醛基与细胞膜上富含的氨基通过共价键连接;扫描电镜和红外光谱进行表征;对大黄30%乙醇提取液进行吸附,HPLC分析吸附结果。通过扫描电镜证实材料表面覆盖有一层细胞膜,红外光谱也出现3442、2942 cm^(-1)的-NH键特征吸收峰,表明材料制备成功;HPLC分析表明:11种化学成分被特异性吸附,分别为:芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚及2种未知成分。制备的化学修饰L02肝细胞膜生物亲和材料能够延长使用次数,也可用于大黄及其他中药降血脂活性成分的快速筛选。 展开更多

关键词 生物亲和材料 化学修饰 大黄 l02肝细胞 高血脂

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NADH对L02细胞Bcl-2、Bax、P53、CD95及CD95L表达的影响 被引量：5

15

作者 徐小平 王瑜 +3 位作者 李开宗 窦科峰 刘发全 张积仁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期460-462,共3页

目的　研究抗氧化剂NADH对体外培养的正常人肝细胞系L0 2缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法　实验分组 :将培养的L0 2细胞分为 :缺血再灌注损伤组 (I R) ,缺血再灌注损伤 +NADH(I R +NADH)及对照组 (未经处理的L0 2细胞 )。... 目的　研究抗氧化剂NADH对体外培养的正常人肝细胞系L0 2缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法　实验分组 :将培养的L0 2细胞分为 :缺血再灌注损伤组 (I R) ,缺血再灌注损伤 +NADH(I R +NADH)及对照组 (未经处理的L0 2细胞 )。用流式细胞仪观察细胞处理后6、12、18及 2 4h细胞的凋亡率及 12h时 ,Bcl 2、Bax、P5 3、CD95及CD95L的表达 ,并以透射电镜观察细胞凋亡的超微结构。结果　NADH可明显抑制缺血再灌注损伤细胞的凋亡 ,并能上调Bcl 2表达 ,下调Bax、P5 3、CD95及CD95L的表达 ,与I R组相比较差异显著 (P <0 .0 5 )。透射电镜下可见典型的凋亡细胞的特征。结论　NADH对缺血再灌注损伤诱导的L0 2肝细胞有明显地保护作用。其作用机制可能与通过调节Bcl 2、Bax、P5 3。 展开更多

关键词 NADH 缺血再灌注损伤 凋亡 流式细胞仪 抗氧化剂 l02细胞 Bcl-2 Bax P53 CD95 CD95l 肝细胞

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三氯生和三氯卡班对人体肝细胞DNA损伤的研究 被引量：43

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作者 李林朋 马慧敏 +4 位作者 胡俊杰 黎玉华 王艺陪 盛国英 傅家谟 《生态环境学报》 CSCD 北大核心 2010年第12期2897-2901,共5页

三氯生(TCS)和三氯卡班(TCC)作为优良的抗菌和消毒剂,在药物和个人护理用品中广泛使用。近几年来,TCS和TCC在各种环境介质和生物体中被频繁检出,并引起国内外环境科学工作者的重点关注。目前,有关TCS和TCC对水生生物的毒性研究已有大量... 三氯生(TCS)和三氯卡班(TCC)作为优良的抗菌和消毒剂,在药物和个人护理用品中广泛使用。近几年来,TCS和TCC在各种环境介质和生物体中被频繁检出,并引起国内外环境科学工作者的重点关注。目前,有关TCS和TCC对水生生物的毒性研究已有大量的报道,其对人体健康危害的报道仍较少。为了评估TCS和TCC对人体的遗传毒性,利用彗星实验研究两种污染物对正常人肝细胞(L02)DNA的损伤效应。结果发现:三氯生和三氯卡班皆能引起人体肝细胞的DNA损伤,并呈现显著的剂量-效应关系和时间效应关系。相比于TCS而言,L02细胞对TCC更为敏感,在低暴露剂量(2.38μmol.L-1)下就可以引起DNA断裂损伤。该结果有助于进一步揭示TCS和TCC对人体毒害的机制,更全面的评估两种污染物对人体健康的风险。 展开更多

关键词 三氯生 三氯卡班 彗星实验 正常人肝细胞(l02) DNA损伤

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何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响 被引量：1

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作者 杨红莉 孙震晓 《中华中医药学刊》 CAS 2014年第10期2494-2496,I0019,共4页

目的:观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用。方法:采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度... 目的:观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用。方法:采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度血清对两种细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察各浓度血清作用后两种细胞的形态变化;测定含药血清作用于两种细48 h后,细胞培养液转氨酶活性变化。结果:何首乌含药血清对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的活力没有明显影响。两种细胞含药血清组与空白血清组相比,细胞形态都没有发生明显改变,细胞培养液转氨酶活性(ALT、AST)也没有显著差异(P>0.05)。结论:何首乌含药血清对体外培养的两种人源肝细胞活性均没有明显影响。 展开更多

关键词 何首乌水提物 人正常肝l02细胞 人肝癌HEPG2细胞 MTT 形态学 转氨酶

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基于CaSR表达及AKT磷酸化水平的花旗泽仁改善胰岛素抵抗作用机制 被引量：1

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作者 张义 于鹏洋 +2 位作者 郑思琦 孙丽英 葛鹏玲 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期44-49,共6页

目的基于CaSR表达及AKT磷酸化水平考察花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立IR L02肝细胞模型,并通过葡萄糖消耗实验对细胞模型进行鉴定。采用免疫荧光法和qRT-PCR技术检测CaSR表达的细胞定位以及... 目的基于CaSR表达及AKT磷酸化水平考察花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立IR L02肝细胞模型,并通过葡萄糖消耗实验对细胞模型进行鉴定。采用免疫荧光法和qRT-PCR技术检测CaSR表达的细胞定位以及CaSR mRNA表达,同时采用Western blot技术检测CaSR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达。结果高浓度胰岛素诱导后的L02肝细胞模型葡萄糖消耗量和摄取率明显下降(P<0.01)。免疫荧光实验结果表明,模型对照组的CaSR分布较稀疏,相对应的,给予花旗泽仁后的CaSR分布较密集。通过qRT-PCR实验发现,模型对照组的CaSR mRNA表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,花旗泽仁组、阳性对照组中CaSR mRNA表达明显上调(P<0.01)。同时Western blot检测结果表明,模型对照组的CaSR和磷酸化AKT(Thr308和Ser473)蛋白表达显著下降(P<0.01),与模型对照组比较,花旗泽仁组、阳性对照组中CaSR和磷酸化AKT(Thr308和Ser473)蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论该实验证明了花旗泽仁通过影响PI3K通路改善胰岛素抵抗,可能与通过调节CaSR,激活PI3K/AKT信号通路AKT上的2个(Thr308,Ser473)磷酸化位点的蛋白表达有关。 展开更多

关键词 花旗泽仁 胰岛素抵抗 CASR AKT l02肝细胞

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