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橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析
被引量：
2
1
作者
廖小淼
何其光
+6 位作者
刘耀
徐良向
周晓韵
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2019年第5期932-938,共7页
HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡...
HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsHog1基因,构建GST-CsHog1融合表达载体,利用SDS-PAGE和WesternBlot检测蛋白表达情况。结果表明:橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因大小1383 nt,编码459个氨基酸,包含5个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域;聚类分析显示橡胶树炭疽菌的CsHog1基因编码的氨基酸序列与黄瓜炭疽菌的ClOsc1(Hog1同源基因)同源性最高。所构建的蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG0.3、0.5、0.8、1.0 mmol/L;温度16、25、28℃)均可较好诱导表达,GST-CsHog1融合蛋白大小约为70 ku。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。
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关键词
橡胶树
橡胶树炭疽菌
Hog1基因
蛋白纯化
原核表达
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职称材料
利用酵母双杂交技术筛选炭疽菌中与CsSSK1相互作用的蛋白质
被引量：
4
2
作者
方思齐
李泽栋
+6 位作者
王记圆
何其光
李潇
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期198-204,共7页
炭疽菌(Colletotrichum siamense)是橡胶树等多种热带作物炭疽病的主要病原。双组分系统(two component system)在病原真菌中参与菌体对外界环境变化的适应、耐药性和毒力的调控。该系统包括感受器和应答调节蛋白,SSK1(SLF-interacting ...
炭疽菌(Colletotrichum siamense)是橡胶树等多种热带作物炭疽病的主要病原。双组分系统(two component system)在病原真菌中参与菌体对外界环境变化的适应、耐药性和毒力的调控。该系统包括感受器和应答调节蛋白,SSK1(SLF-interacting SKP1-like1)是双组分系统中的应答调节蛋白。为了了解炭疽菌中SSK1互作蛋白,本研究克隆获得橡胶树炭疽菌的一个应答调节蛋白编码基因CsSSK1,大小为2750 bp,cDNA大小为2190 bp,编码729个氨基酸,包含1个内含子,具有1个cheY同系物接收结构域和10个复杂结构。并利用酵母双杂交技术,在橡胶树炭疽菌cDNA文库中对CsSSK1互作蛋白进行筛选,共筛选到10个互作蛋白,分别为转酮醇酶、金属内酰胺酶、锌乙醇脱氢酶、泛素亚型X1、微管蛋白以及5个未知或假定蛋白。该结果为进一步研究CsSSK1的功能、互作蛋白及调节机制提供基础。
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关键词
橡胶树炭疽菌
双组分系统
应答调节蛋白SSK1
互作蛋白
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职称材料
题名
橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析
被引量：
2
1
作者
廖小淼
何其光
刘耀
徐良向
周晓韵
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
机构
海南大学植物保护学院
热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2019年第5期932-938,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.31760499
No.31560495)
现代农业产业技术体系建设专项资金项目(No.CARS-33-GW-BC1)
文摘
HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsHog1基因,构建GST-CsHog1融合表达载体,利用SDS-PAGE和WesternBlot检测蛋白表达情况。结果表明:橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因大小1383 nt,编码459个氨基酸,包含5个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域;聚类分析显示橡胶树炭疽菌的CsHog1基因编码的氨基酸序列与黄瓜炭疽菌的ClOsc1(Hog1同源基因)同源性最高。所构建的蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG0.3、0.5、0.8、1.0 mmol/L;温度16、25、28℃)均可较好诱导表达,GST-CsHog1融合蛋白大小约为70 ku。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。
关键词
橡胶树
橡胶树炭疽菌
Hog1基因
蛋白纯化
原核表达
Keywords
rubber tree
Colletotrichum siamense
Hog1 gene
protein purification
prokaryotic expression
分类号
S794.1 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
利用酵母双杂交技术筛选炭疽菌中与CsSSK1相互作用的蛋白质
被引量：
4
2
作者
方思齐
李泽栋
王记圆
何其光
李潇
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
机构
海南大学植物保护学院/热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期198-204,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.31760499,No.31560495)
现代农业产业技术体系建设专项资金项目(No.CARS-33-BC1)。
文摘
炭疽菌(Colletotrichum siamense)是橡胶树等多种热带作物炭疽病的主要病原。双组分系统(two component system)在病原真菌中参与菌体对外界环境变化的适应、耐药性和毒力的调控。该系统包括感受器和应答调节蛋白,SSK1(SLF-interacting SKP1-like1)是双组分系统中的应答调节蛋白。为了了解炭疽菌中SSK1互作蛋白,本研究克隆获得橡胶树炭疽菌的一个应答调节蛋白编码基因CsSSK1,大小为2750 bp,cDNA大小为2190 bp,编码729个氨基酸,包含1个内含子,具有1个cheY同系物接收结构域和10个复杂结构。并利用酵母双杂交技术,在橡胶树炭疽菌cDNA文库中对CsSSK1互作蛋白进行筛选,共筛选到10个互作蛋白,分别为转酮醇酶、金属内酰胺酶、锌乙醇脱氢酶、泛素亚型X1、微管蛋白以及5个未知或假定蛋白。该结果为进一步研究CsSSK1的功能、互作蛋白及调节机制提供基础。
关键词
橡胶树炭疽菌
双组分系统
应答调节蛋白SSK1
互作蛋白
Keywords
Colletotrichum siamense
two component system
response regulatory protein SSK1
interaction protein
分类号
S763.7 [农业科学—森林保护学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析
廖小淼
何其光
刘耀
徐良向
周晓韵
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2019
2
在线阅读
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职称材料
2
利用酵母双杂交技术筛选炭疽菌中与CsSSK1相互作用的蛋白质
方思齐
李泽栋
王记圆
何其光
李潇
刘文波
张宇
林春花
缪卫国
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021
4
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