应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位

1

作者 周飞园 王璐 +6 位作者 梁芷妍 林璧慧 李佳恒 王宇 井多娜 张绪富 戴迎春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期383-388,共6页

目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位。方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。ELISA鉴定淘选所得噬菌体与... 目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位。方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用;阳性克隆测序后进行生物信息学分析,合成多肽鉴定其抗原性。结果:发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”,综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位,且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原(HBGAs)受体的结合。结论:“MG-DW”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段,可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。 展开更多

关键词 诺如病毒 12肽库 抗原模拟表位 单链可变片段抗体

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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位 被引量：6

2

作者 钟彦伟 成军 +5 位作者 王刚 洪源 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-36,共3页

为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑... 为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。 展开更多

关键词 噬菌体 丙型肝炎病毒 核心蛋白 模拟表位 抗原

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HCV高变区1串联模拟表位基因免疫研究 被引量：8

3

作者 赵军 李靖 +6 位作者 陈昊 舒翠莉 高蓉 李伯安 何卫平 迟淑萍 程云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2254-2257,共4页

目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)高变区 1(HVR1)串联模拟表位基因免疫在BALB c小鼠体内引起抗体产生的特点。方法　针对中国人群HCVHVR1位中 6个较保守的AA位点设计并合成多肽表位 ,从中筛选活性最好的肽 1、5、6、7构建含 4条多肽编码基... 目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)高变区 1(HVR1)串联模拟表位基因免疫在BALB c小鼠体内引起抗体产生的特点。方法　针对中国人群HCVHVR1位中 6个较保守的AA位点设计并合成多肽表位 ,从中筛选活性最好的肽 1、5、6、7构建含 4条多肽编码基因的表达载体。将HCVHVR1串联模拟表位表达载体对小鼠股四头肌直接免疫 ,采用ELISA法检测小鼠血清内抗体的产生 ,并将免疫血清与一系列基于本室对HVR1氨基酸序列的分析结果合成的多肽进行反应 ,分析免疫血清对这些多肽的交叉反应性。结果　免疫血清同编码的各合成肽都有较好的反应性 ,其中对肽 1反应最好。免疫血清同合成的 4条HVR1全序列多肽及其他非编码HVR1多肽有较好的反应性。结论　基因免疫能够在小鼠体内引起表位特异性抗体的产生。此串联表位设计引起的体液免疫反应对HCVHVR1合成肽有较好的交叉免疫反应。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位 基因免疫 交叉反应

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利用Sm抗原模拟表位肽构建狼疮样鼠模型 被引量：4

4

作者 谢红付 冯浩 +4 位作者 曾海燕 李吉 施为 易梅 伍斌 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-195,I0002,共6页

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合... 目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合噬菌体阳性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测小鼠血清IgG型抗Sm抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体和抗核抗体(ANA)水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积以及HE染色观察小鼠肾脏组织病理损伤情况。结果免疫筛选获得的5个ELISA强阳性的噬菌体克隆的氨基酸序列IR、SQ、PP出现频率增加;实验组小鼠血清中第28天出现Sm抗体、dsDNA抗体、ANA抗体,且滴度不断升高;第33天出现蛋白尿;肾脏可以检测到IgG型免疫复合物沉积及明显的肾脏病理改变。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论利用Sm抗原噬菌体模拟表位肽可成功构建狼疮样小鼠模型。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 Sm抗原 噬菌体肽库 模拟表位

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表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定 被引量：3

5

作者 孟繁平 丁杰 +3 位作者 喻召才 韩全利 郭长存 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期138-140,143,共4页

目的　　研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。　方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得Ｍ... 目的　　研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。　方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２　０００处有１条可与抗ＭＧ７　ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 胃肿瘤 模拟表位 减毒鼠伤寒杆菌 MG7-AG 胃癌 疫苗 研制 鉴定

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从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位 被引量：3

6

作者 孙林 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 黄金林 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期428-431,共4页

以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20... 以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 单克隆抗体 亲和筛选 模拟表位

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利用噬菌体随机肽库筛选Rh(D)血型抗原的模拟表位 被引量：4

7

作者 刘淑均 沈继龙 +2 位作者 卞茂红 张循善 闻慧琴 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第7期817-820,共4页

目的从纯化的人抗Rh(D)抗体阳性血清中筛选Rh(D)血型抗原模拟表位。方法用纯化的多克隆抗Rh(D)抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"过程筛选,随机挑取噬菌体克隆;用ELISA法检测其特异性及其与抗体的结合能... 目的从纯化的人抗Rh(D)抗体阳性血清中筛选Rh(D)血型抗原模拟表位。方法用纯化的多克隆抗Rh(D)抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"过程筛选,随机挑取噬菌体克隆;用ELISA法检测其特异性及其与抗体的结合能力。提取阳性克隆DNA并进行测序,推导外源多肽的氨基酸序列。凝集抑制试验检测噬菌体展示的多肽对Rh(D)血型抗原结合的模拟作用。结果经过3轮筛选和相应鉴定后得到6个抗Rh(D)抗体的特异性噬菌体克隆,其中4个克隆展示相同的氨基酸序列为PSQGYVILLDEK,命名为C2,另外2个克隆展示相同的氨基酸序列为TMLNRAHDFSEC,命名为C21。凝集抑制试验结果表明这两个多肽的噬菌体可以抑制Rh(D)抗原阳性红细胞的凝集作用。结论多肽PSQGYVILLDEK和TMLNRAH-DFSEC可以模拟Rh(D)血型抗原表位。 展开更多

关键词 噬菌体随机肽库 模拟表位 Rh(D)血型抗原

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噬菌体随机肽库淘选桔霉素模拟表位的研究 被引量：10

8

作者 黄思敏 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期67-70,共4页

目的:从噬菌体随机肽库中淘选模拟桔霉素表位的噬菌体粒子。方法:以抗桔霉素的单克隆抗体为配基,分别免疫亲和淘选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机7肽库和12肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序以分析... 目的:从噬菌体随机肽库中淘选模拟桔霉素表位的噬菌体粒子。方法:以抗桔霉素的单克隆抗体为配基,分别免疫亲和淘选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机7肽库和12肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序以分析插入的7肽和12肽的氨基酸序列。结果:经过3轮淘选,在7肽库中淘选到20株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,在12肽库中淘选到33株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合均能被桔霉素阻断,模拟表位的共有序列为X-组氨酸-赖氨酸-X-X-X-X,X为任意氨基酸。以7肽库中亲和力最强的克隆(P10)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为10～325ng/ml,检测下限为10ng/ml;以12肽库中亲和力最强的克隆(P1)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为10～439ng/ml,检测下限为10ng/ml。结论:噬菌体展示技术可成功淘选到桔霉素模拟表位,高度保守的His和Lys的存在,提示His和Lys在CIT与其配体的结合中可能起重要作用。 展开更多

关键词 噬菌体示肽库 模拟表位 桔霉素 单克隆抗体 免疫分析

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结核分枝杆菌抗原模拟表位肽的筛选及免疫活性鉴定 被引量：2

9

作者 张林波 王海燕 +3 位作者 刘香英 张丹丹 刘英嘉 温得中 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期664-668,766,共6页

目的:从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法:以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛... 目的:从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法:以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛选后得到的阳性克隆扩增后免疫BALB/c小鼠作为实验组;以TBS为阴性对照组,BCG为阳性对照组,采用间接ELISA方法检测抗体效价,MTT法检测淋巴细胞增殖能力。每组小鼠免疫3周后再鼻腔接种BCG,3周后无菌取左全肺研磨计算肺脏荷菌量,取右全肺制备病理切片观察肺脏病理变化。结果:经三轮筛选后阳性克隆得到富集,ELISA鉴定20个单克隆中有15个阳性克隆,阳性率为75%。免疫后实验组小鼠抗体水平高于BCG组(P<0.01)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验,经ConA、LPS、PPD刺激后实验组SI值均高于BCG组,但差异无显著性(P>0.05),与TBS组比较差异有显著性(P<0.01)。实验组、BCG组均观察到少量的淋巴细胞浸润,而TBS组肺泡结构消失,组织发生实变。肺脏荷菌量实验显示实验组肺脏荷菌量[(4.080±0.035)log CFU.mg-1)]低于TBS组[(4.360±0.110)log CFU.mg-1](P<0.01),但高于BCG组荷菌量[(3.980±0.023)log CFU.mg-1](P>0.05)。结论:成功筛选得到含有结核分枝杆菌抗原模拟表位的阳性克隆,这些阳性克隆能有效诱导小鼠产生比BCG更高的抗体效价和保护效应,对其进行进一步序列测定和功能分析将有助于结核病疫苗的开发。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 随机肽库 模拟表位 免疫分析

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利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位 被引量：3

10

作者 张扬 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期60-63,共4页

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛... 目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。 结论　实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。 展开更多

关键词 沙门氏菌 O9抗原 模拟表位 噬菌体展示肽库

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赭曲霉毒素A模拟表位的筛选及免疫学鉴定 被引量：2

11

作者 王耀 胡骁飞 +5 位作者 裴亚峰 赵东 刘运超 张改平 李志西 邓瑞广 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1271-1277,共7页

从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以EL... 从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,并以筛选的模拟表位建立赭曲霉毒素A的ELISA检测方法。经过4轮亲和筛选,共得到22株与OTA mAb特异结合的阳性噬菌体克隆,且该结合都能够被OTA标品阻断,DNA测序及多肽核心序列分析后,得到赭曲霉毒素A的模拟表位的主要序列为:MPLWXDL,X为任意氨基酸,以阳性噬菌体克隆建立的竞争ELISA检测方法,线性范围为250～8000pg/ml。基于制备的OTA mAb,利用噬菌体随机七肽库可成功筛选到赭曲霉毒素A的模拟表位,并能够替代OTA标品建立直接竞争模式的免疫学快速检测方法。 展开更多

关键词 噬菌体随机七肽库 赭曲霉毒素A 模拟表位 单克隆抗体

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噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位 被引量：2

12

作者 杨清浩 王祥卫 +1 位作者 金燕 张立新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1332-1334,共3页

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得... 目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。 展开更多

关键词 MCU1抗原 模拟表位 噬菌体随机7肽库 抗体

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囊虫抗原模拟表位的筛选和序列分析 被引量：3

13

作者 李天群 雷家慧 姜昌富 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期968-970,共3页

目的探讨能否从与兔抗蚯蚓血清免疫球蛋白(EIg)结合后的噬菌体12肽库中筛选囊虫抗原模拟表位。方法噬菌体12肽库经过EIg筛选1轮后,再以囊虫病患者血清免疫球蛋白(CIg)作为靶分子进行3轮吸附-洗脱-扩增,随机挑取24个蓝色噬菌斑扩增;分析... 目的探讨能否从与兔抗蚯蚓血清免疫球蛋白(EIg)结合后的噬菌体12肽库中筛选囊虫抗原模拟表位。方法噬菌体12肽库经过EIg筛选1轮后,再以囊虫病患者血清免疫球蛋白(CIg)作为靶分子进行3轮吸附-洗脱-扩增,随机挑取24个蓝色噬菌斑扩增;分析其抗原性及诊断囊虫病的价值;并测定核苷酸序列分析同源性。结果24个克隆中有17个克隆可与囊虫病患者混合血清发生免疫反应,其中6个A491值较高的克隆ELISA和囊虫抗原DotELISA的抗体阳性率无显著性差异(P>0.05);与其它寄生虫病的交叉反应率明显低于囊虫抗原(P<0.05),说明所获克隆具有诊断囊虫病的潜在价值。挑选其中2个克隆(C3、C5)测定核苷酸序列,结果显示这两个抗原模拟表位的氨基酸序列具有结构同源性。结论将EIg结合后的肽库作为源肽库经过3轮筛选,得到对囊虫病具有较高潜在诊断价值的抗原模拟表位。 展开更多

关键词 囊虫病 噬菌体肽库 模拟表位 血清免疫球蛋白

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赭曲霉毒素A模拟表位pⅧ噬菌体表达载体的构建 被引量：2

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作者 徐玲 裘雪梅 刘仁荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第17期307-309,共3页

目的:构建赭曲霉毒素A模拟表位pⅧ噬菌体表达载体。方法:从pⅢ噬菌体随机肽库筛选到的多个赭曲霉毒素A模拟表位中取亲和力最高的模拟表位,通过化学方法合成两条包含该模拟表位及核酸内切酶位点的核苷酸序列,退火成双链后与经过相应酶切... 目的:构建赭曲霉毒素A模拟表位pⅧ噬菌体表达载体。方法:从pⅢ噬菌体随机肽库筛选到的多个赭曲霉毒素A模拟表位中取亲和力最高的模拟表位,通过化学方法合成两条包含该模拟表位及核酸内切酶位点的核苷酸序列,退火成双链后与经过相应酶切的pC89S4噬菌体质粒相连,即插入该载体pⅧ前导肽和成熟氨基酸之间,转化进XL1-Blue感受态细胞中,经XbaⅠ、EcoRⅠ和BamHⅠ三种酶分别酶切初步筛选,测序鉴定。结果:质粒测序与合成的序列一致。结论:即得到高密度赭曲霉毒素A的模拟表位噬菌体展示载体。 展开更多

关键词 赭曲霉毒素A 噬菌体展示 pⅧ 模拟表位

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MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和原核表达 被引量：1

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作者 崔志刚 宋波 +2 位作者 张立新 路浩军 李春海 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1154-1156,共3页

目的从噬菌体随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位,构建MUC1模拟表位的原核表达载体。方法通过生物淘洗、基因测序和氨基酸序列比较,筛选出模拟表位,构建重组表达质粒PET-31b(+),用IPTG诱导表达,亲和层析纯化,W estern b lot鉴定其抗... 目的从噬菌体随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位,构建MUC1模拟表位的原核表达载体。方法通过生物淘洗、基因测序和氨基酸序列比较,筛选出模拟表位,构建重组表达质粒PET-31b(+),用IPTG诱导表达,亲和层析纯化,W estern b lot鉴定其抗原性。结果筛选到的模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力较强。成功构建了重组表达质粒,重组蛋白在BL21(DE3)p lysS中得到诱导表达,纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带,W estern印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论筛选到了MUC1的模拟表位,成功表达和纯化了MUC1模拟表位蛋白,为研究其在肿瘤疫苗方面的应用奠定基础。 展开更多

关键词 MUC1 噬菌体表面展示 模拟表位 克隆 表达

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利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮的模拟表位 被引量：13

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作者 何庆华 刘仁荣 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期241-243,共3页

目的:利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)模拟表位。方法:以抗ZEN单克隆抗体为配体,利用噬菌体七肽库淘选ZEN的模拟表位,采用了逐轮减少抗体包被浓度,交换使用封阻液中蛋白质种类的方法,经三轮淘选后,随机挑取20个克隆测... 目的:利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)模拟表位。方法:以抗ZEN单克隆抗体为配体,利用噬菌体七肽库淘选ZEN的模拟表位,采用了逐轮减少抗体包被浓度,交换使用封阻液中蛋白质种类的方法,经三轮淘选后,随机挑取20个克隆测序并以ELISA方法及竞争ELISA实验,以确定阳性克隆。结果:获得10种序列,ELISA显示其中两种序列为阳性克隆,抑制率达90%以上,其氨基酸序列分别为DAVILLM,HHCHWWH。结论:噬菌体展示技术可淘选到ZEN的模拟表位,淘选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学检测方法。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库:玉米赤霉烯酮:模拟表位:单克隆抗体

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利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展 被引量：1

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作者 裴亚峰 胡骁飞 +3 位作者 王耀 侯玉泽 张改平 邓瑞广 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期14-18,共5页

噬菌体随机肽库技术是将编码外源多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白结构基因的表达而表达,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性,是一种基因型与表达型的统一。近年来,噬菌体... 噬菌体随机肽库技术是将编码外源多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白结构基因的表达而表达,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性,是一种基因型与表达型的统一。近年来,噬菌体随机肽库技术被广泛应用于各种抗原的模拟表位筛选中,并取得了显著成果。综述了利用噬菌体随机肽库技术在抗原模拟表位筛选中的研究进展。 展开更多

关键词 噬菌体随机肽库 噬菌体展示技术 模拟表位 抗原

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麻痹性贝类毒素GTX2,3模拟表位的初步研究 被引量：1

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作者 向征 刘北一 +2 位作者 侯晓睿 向军俭 富宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期530-532,共3页

目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心EL... 目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心ELISA方法鉴定噬菌体克隆,竞争ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的特异性。对阳性克隆进行DNA测序并推导噬菌体所展示的氨基酸序列。竞争ELISA鉴定模拟GTX2,3表位的合成肽的特异性。结果:经过3轮筛选获得20株能与靶分子高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。序列分析表明DXLXPP为保守序列(X为任意氨基酸)。竞争ELISA检测表明,麻痹性贝类毒素GTX2,3可抑制阳性噬菌体克隆phage2与抗GTX2,3mAb结合。根据阳性序列合成的短肽可以抑制phage2与抗GTX2,3mAb的结合(IC50=13μg/mL)。结论:通过噬菌体肽库筛选技术,成功地获得麻痹性贝类毒素GTX2,3的模拟表位,并初步证实以此为基础合成的短肽能够准确和特异的模拟GTX2,3的表位。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库 麻痹性贝类毒素GTX2 3 模拟表位肽

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猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定 被引量：1

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作者 任晓峰 秦昭恒 +1 位作者 曹丽艳 葛旭颖 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期11-17,共7页

猪轮状病毒（Po RV）是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体（MAb）3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑... 猪轮状病毒（Po RV）是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体（MAb）3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA测序,10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列＂VPLGTDNGDIWV＂,而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对,结果表明,十二肽中有4个氨基酸（第167位P、第178位T、第179位D和第184位W）与VP7蛋白167-184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低Po RV与抗VP7单克隆抗体之间的作用,病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制Po RV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。 展开更多

关键词 猪轮状病毒 VP7蛋白 噬菌体筛选 模拟表位

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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽刺激小鼠脾淋巴细胞增殖

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作者 迟淑萍 汪辰 +5 位作者 戚扬 由莉越 孙杰 尹笛 李瑞生 程云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期856-857,共2页

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽在体外刺激小鼠经脾内直接免疫后脾淋巴细胞增殖的变化。方法:选用经7肽脾内直接注射免疫的小鼠,分离脾细胞后,脾细胞再经7肽刺激,应用单溶液细胞增殖检测方法,体外检测7肽在不同浓... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽在体外刺激小鼠经脾内直接免疫后脾淋巴细胞增殖的变化。方法:选用经7肽脾内直接注射免疫的小鼠,分离脾细胞后,脾细胞再经7肽刺激,应用单溶液细胞增殖检测方法,体外检测7肽在不同浓度和不同培养时间点,对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果:7肽刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后,实验组的脾淋巴细胞增殖反应与对照组相比有明显促进作用。结论:HCV高变区1模拟表位7肽在体外对脾内直接免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的促增殖作用。 展开更多

关键词 模拟表位 脾淋巴细胞 小鼠 增殖

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