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题名TALENs新型模块组装法及活性鉴定方法
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作者
高敬
魏迪
池振奋
张癸荣
张万明
聂凌云
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机构
河北北方学院
中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所
中国科学院北京基因组研究所
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期220-228,共9页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31371346)
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文摘
旨在提供一种新型的转录激活样效应子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)模块组装法(Unit assembly,UA)及活性鉴定方法。利用TALE-NT 2.0在线工具在线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA)设计TALENs识别位点和剪切位点,借助p EGFP-N1质粒将该段靶序列随机整合于HEK293F核基因组中,构建HEK293F-T1细胞系,用于TALENs活性鉴定。依据转录激活样效应子(Transcription activator-like effectors,TALEs)自然单元模块序列,设计出一种新型的人工TALEs偏单元;根据TALENs识别位点,选取相应一单元模块,利用UA法组装;并设计出含有相应双酶切位点的TALEs串联模块序列和TALENs载体序列,定向连接后瞬时转染HEK293F-T1细胞系。结果显示,新型模块组装法定向组装TALEs模块,克隆效率高且瞬时转染后可看到清晰的套峰。结果表明,新型模块组装方法提高了TALENs构建过程中的克隆效率,并且不受末位0.5模块的RVD(repeat-variable diresidue)限制,增加了靶序列设计的灵活性。
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关键词
转录激活样效应子核酸酶
模块组装法
线粒体DNA
HEK293F-T1
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Keywords
transcription activator-like effector nucleases
unit assembly
mitochondrial DNA
HEK293F-T1
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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