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番茄LeABI3基因的克隆与植物过量表达载体的构建 被引量:1
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作者 范晶 刘永胜 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第5期33-35,共3页
从番茄成熟种子中提取总RNA,反转录得到cDNA。根据GenBank中番茄LeABI3基因序列设计引物,通过PCR方法获得了番茄LeABI3基因的2个转录本,其中转录本1序列比GenBank中LeABI3基因编码区序列多出30 bp,含1个1 740 bp的开放阅读框,编码579个... 从番茄成熟种子中提取总RNA,反转录得到cDNA。根据GenBank中番茄LeABI3基因序列设计引物,通过PCR方法获得了番茄LeABI3基因的2个转录本,其中转录本1序列比GenBank中LeABI3基因编码区序列多出30 bp,含1个1 740 bp的开放阅读框,编码579个氨基酸;转录本2比GenBank中LeABI3基因编码区序列也多出30 bp,同时在编码区内另一个位置因剪接而缺失了122 bp的核苷酸序列。通过替换掉植物过量表达载体PB I121上的GUS编码区序列,将序列无缺失的转录本1连接到PB I121上,对所获得的重组质粒进行双酶切,结果表明植物过量表达载体PB I121-LeABI3构建成功。 展开更多
关键词 番茄 LeABI3基因 序列 植物过量表达载体
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番茄LeNHX3基因的克隆与植物过量表达载体的构建 被引量:1
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作者 范晶 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第6期47-49,共3页
从番茄幼苗中提取RNA,根据TIGR基因索引数据库中番茄LeNHX3基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX3基因的cDNA序列,包含一个1 614 bp的开放阅读框,编码537个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质... 从番茄幼苗中提取RNA,根据TIGR基因索引数据库中番茄LeNHX3基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX3基因的cDNA序列,包含一个1 614 bp的开放阅读框,编码537个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质粒进行双酶切鉴定,结果表明植物过量表达载体PBI121-LeNHX3已构建成功。 展开更多
关键词 番茄 LeNHX3基因 植物过量表达载体
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番茄LeNHX1基因植物过量表达载体的构建及表达分析
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作者 范晶 雷常安 +4 位作者 黄明远 刘超 梁梓 陈丽萍 王永建 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期94-97,101,共5页
从番茄幼苗中提取RNA,根据NCBI中番茄LeNHX1基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX1基因的cDNA序列,包含一个1 605 bp的开放阅读框,编码534个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质粒进行双酶切鉴定... 从番茄幼苗中提取RNA,根据NCBI中番茄LeNHX1基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX1基因的cDNA序列,包含一个1 605 bp的开放阅读框,编码534个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质粒进行双酶切鉴定,结果表明,植物过量表达载体PBI121-LeNHX1已构建成功。半定量RT-PCR结果表明LeNHX1基因在根、茎和叶中均表达,盐、低温和脱落酸的诱导能提高LeNHX1基因的表达量,推测番茄LeNHX1基因在逆境应答中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 番茄 LeNHX1基因 植物过量表达载体
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水稻OsRop4基因的克隆及其植物过量表达载体的构建
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作者 范晶 黄明远 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第10期2337-2340,共4页
根据NCBI中水稻OsRop4基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了水稻的OsRop4基因的3个转录本,其中1个转录本序列与GenBank中该基因的序列相同,含1个648bp的开放阅读框,编码215个氨基酸,另外两个转录本分别在编码序列内部缺失了64bp和104bp的... 根据NCBI中水稻OsRop4基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了水稻的OsRop4基因的3个转录本,其中1个转录本序列与GenBank中该基因的序列相同,含1个648bp的开放阅读框,编码215个氨基酸,另外两个转录本分别在编码序列内部缺失了64bp和104bp的核苷酸序列。将这3种转录本分别与植物过量表达载体PHB相连,对所获得的重组质粒进行双酶切。鉴定结果表明,植物过量表达载体PHB-OsRop4构建成功,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 OsRop4基因 植物过量表达载体
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枸杞LbMYB103基因克隆及转化拟南芥的研究
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作者 郑蕊 岳思君 +2 位作者 王丽娟 钱贻崧 代金霞 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1722-1727,共6页
以枸杞品种‘宁杞1号’花药为材料,采用RT-PCR技术,分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框(ORF)的cDNA片段,碱基序列与已知基因HQ415755完全一致。运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103,利用基因枪... 以枸杞品种‘宁杞1号’花药为材料,采用RT-PCR技术,分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框(ORF)的cDNA片段,碱基序列与已知基因HQ415755完全一致。运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103,利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白(GFP)的过表达载体转入洋葱表皮细胞,将LbMYB103基因定位在细胞核。实时荧光定量PCR分析发现,LbMYB103基因在花药中优势表达,果实中表达量较低,在根、茎和叶中均未检测到其转录本,推测LbMYB103基因可能在花药发育过程中起重要作用。通过根癌农杆菌介导法将pMDC83-LbMYB103转入拟南芥(Col-0),经筛选获得T1代抗性再生植株52棵,PCR鉴定有41棵阳性植株,收获T1代种子,经抗性筛选获得T2代抗性植株29棵,PCR鉴定有23棵阳性植株。实时荧光定量PCR分析表明,LbMYB103在拟南芥植株的基因组中正常表达。表型观察发现T1和T2代拟南芥花药发育异常,花发育迟缓,果荚短小无种子,进一步表明LbMYB103可能与植物的育性有关。该结果为进一步开展枸杞遗传转化,深入研究LbMYB103基因在枸杞花药发育过程中可能发挥的调控功能奠定了基础。 展开更多
关键词 枸杞 LbMYB103 植物过量表达载体 拟南芥 遗传转化
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