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梅迪-维斯纳病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 张太翔 凌宗帅 +8 位作者 孙涛 袁涛 徐彪 梁成珠 刘文鹏 孙军 王洪兵 肖越强 杨慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期163-165,共3页
为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105~5.0×101拷贝范围内定... 为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105~5.0×101拷贝范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝。对羊的其他病毒核酸均无扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高,特异性好,在MVV的快速检测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
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梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒多联实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
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作者 徐军 孙志华 +4 位作者 刘娟 孟茹 戴莉 段晓东 叶志辉 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第4期448-451,共4页
利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用... 利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果显示:设计的引物敏感性和特异性较好,该多联实时荧光定量PCR方法中梅迪-维斯纳病毒Tm值为89~90℃,羊痘病毒Tm值为91~92℃,对其他供试的菌株则为阴性,并且该方法对梅迪-维斯纳病毒的DNA最低检出量为25拷贝/μL,羊痘病毒为40拷贝/μL,两病原都存在时为80拷贝/μL。研究结果表明本实验建立的方法可用于同时检测梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒,为动物检疫提供了一种有效的检测方法。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 羊痘病毒 多联实时荧光定量PCR
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梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性 被引量:1
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作者 古努尔·吐尔逊 王登峰 +5 位作者 杨学云 魏玉荣 李建军 孟肖潇 洪都孜·波拉提 吴建勇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期978-983,共6页
为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节... 为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)分离株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,构建gag基因重组表达载体并转入BL21(DE3)宿主菌进行诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting确定其大小、分布和反应原性。结果显示,MVV gag蛋白氨基酸序列与中国CAEV分离株的相似性为74.7%~74.9%,它的11个抗原表位与CAEV gag蛋白的12个抗原表位存在较高的序列相似性,推测其可作为中国SRLVs血清学诊断的通用蛋白质标记物;SDS-PAGE检测结果显示,重组gag蛋白大小约为55000,主要以包涵体形式存在,Western blotting显示该蛋白可与MVV和CAEV感染动物血清发生免疫反应,证实了蛋白序列分析结果。该研究结果可为研制中国SRLVs通用血清学检测技术方法奠定基础。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 GAG蛋白 原核表达 交叉反应原性 抗原表位
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梅迪-维斯纳病毒研究进展 被引量:1
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作者 张念章 储岳峰 +3 位作者 赵萍 高鹏程 贺英 逯忠新 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期104-107,共4页
梅迪-维斯纳病毒又称绵羊进行性肺炎病毒,是绵羊进行性肺炎的病原,属于逆转录病毒科、慢病毒属。其致病过程与人类免疫缺陷病毒(HIV)相似,因此可以作为HIV感染的动物的研究模型。论文综述了梅迪-维斯纳病毒的病原学,阐述了致病机理、免... 梅迪-维斯纳病毒又称绵羊进行性肺炎病毒,是绵羊进行性肺炎的病原,属于逆转录病毒科、慢病毒属。其致病过程与人类免疫缺陷病毒(HIV)相似,因此可以作为HIV感染的动物的研究模型。论文综述了梅迪-维斯纳病毒的病原学,阐述了致病机理、免疫逃避机理及引起宿主的免疫反应,并对未来的防控研究工作进行展望。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 病原学 致病机理 免疫学
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内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒全基因组序列的测定与分析 被引量:4
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作者 赵玲 王振玲 +4 位作者 史晓娜 段续接 张良 李慧萍 刘淑英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1140-1145,共6页
为了解内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的分子结构特征和遗传变异情况,本研究利用Illumina Hiseq 4000二代测序技术对MVV阳性绵羊病肺组织进行病毒全基因组测定,并对全基因组特征、gag和env及其编码的氨基酸序列进行系统进化分析。... 为了解内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的分子结构特征和遗传变异情况,本研究利用Illumina Hiseq 4000二代测序技术对MVV阳性绵羊病肺组织进行病毒全基因组测定,并对全基因组特征、gag和env及其编码的氨基酸序列进行系统进化分析。结果显示,获得全长9193 bp的MVV全基因组序列,命名为NM1111,并上传GenBank获得基因登录号MW248464;全基因组、gag和env核苷酸序列与参考株的相应核苷酸序列的同源性分别为75.8%~81.4%、77.1%~86.8%和67.7%~75.5%;基于gag序列的系统进化分析,NM1111与A2型MVV聚为一支,属于A2型;Gag蛋白的主要同源区(MHR)存在D^(296)E的突变,Env蛋白变异程度较大,表面蛋白V4区存在氨基酸插入,SU5抗原表位在氨基端有一个完全保守的基序(VRAYTYGV),在羧基端有一个高度可变的基序。本研究提供了中国地区首个绵羊MVV完整序列,为中国地区MVV分子生物学特性研究提供基础参考。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 二代测序技术 GAG ENV 遗传变异
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梅迪-维斯纳病毒Gag蛋白原核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量:4
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作者 张彦红 肖盛中 +4 位作者 李岩 杨艳 姜蒙蒙 蒙亚琦 盛金良 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期25-28,共4页
Gag蛋白是梅迪-维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪-维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠埃希菌将含Gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的Gag蛋白,进一步进行ELISA条件的... Gag蛋白是梅迪-维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪-维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠埃希菌将含Gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的Gag蛋白,进一步进行ELISA条件的优化。所建立的方法敏感性试验显示在阳性血清1∶3 200倍稀释时仍能检出,其组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对162份临床血清样品进行检测,同时用购自法国IDVET公司的间接ELISA进行比较,符合率达到89.65%。应用该方法对新疆地区1个种羊场和1个育肥羊场的294份羊血清样品进行了检测,结果显示MVV抗体阳性率分别为10.5%和1.77%,表明种羊场中MVV感染率高于育肥羊场,该研究结果可为MVV抗体检测试剂盒的开发提供支持。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 GAG蛋白 间接酶联免疫吸附试验
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梅迪-维斯纳病毒实时荧光RPA检测方法的建立 被引量:3
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作者 刘然 张琳 +2 位作者 陈思旭 史晓娜 刘淑英 《中国动物检疫》 CAS 2023年第3期90-96,130,共8页
为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测,根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,建立了MVV的实时荧光RPA检测方法,并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示:该方法最佳... 为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测,根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,建立了MVV的实时荧光RPA检测方法,并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示:该方法最佳反应温度为39℃,用时短,20 min即可完成检测;灵敏度高,检测下限可达10-1pg/μL,比常规PCR检测结果灵敏约104倍;特异性强,与小反刍兽疫病毒、羊败血性链球菌、牛肠道病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、肺炎支原体等继发呼吸系统症状病原无交叉反应;重复性好,对于相同质量浓度的模板DNA检测变异系数均小于10%;可有效检测出MVV,与PCR结果一致。综上所述,本研究建立的MVV荧光RPA检测方法适用于MVV的临床快速检测,可为该病的诊断及防控提供依据。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 荧光RPA检测 快速检测 性能评价
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绵羊梅迪-维斯纳病毒CA-TM融合蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 陈思旭 张培 +2 位作者 史晓娜 刘然 刘淑英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1290-1297,共8页
为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体检测方法,本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白(CA)和MVV跨膜蛋白(TM)的抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因,构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM,将其转化大肠杆菌... 为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体检测方法,本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白(CA)和MVV跨膜蛋白(TM)的抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因,构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM,将其转化大肠杆菌BL21后诱导蛋白表达并纯化,经SDS-PAGE检测结果显示,得到重组CA-TM蛋白(rCA-TM),r CA-TM以包涵体形式表达。以获得的rCA-TM作为包被抗原,采用方阵法优化各反应条件,建立了MVV间接ELISA检测方法。利用该方法检测羊临床常见病原阳性血清,结果显示,除MVV阳性血清以外,口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体等绵羊临床常见病原的阳性血清均为阴性,特异性较强,且该方法能识别感染MVV病畜体内产生的CA蛋白和TM蛋白抗体。将MVV阳性血清2倍倍比稀释(1:500~1:32 000)后,分别利用建立的MVV间接ELISA方法及商品化MVV抗体ELISA试剂盒检测,结果显示商品化MVV抗体ELISA试剂盒最低可检测出1:40 00倍稀释的阳性血清,而本研究建立的间接ELISA方法最低可检测出1:16 000倍稀释的阳性血清,敏感性较高。重复性试验结果显示,该方法批内、批间试验的变异系数分别为3.6%~6.9%、2.3%~8.5%,均小于10%,重复性较好。利用本实验建立的MVV间接ELISA方法和商品化MVV抗体ELISA试剂盒对69份绵羊临床样品检测,结果显示,本实验建立的ELISA方法检测出31份阳性样品,38份阴性样品;商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出37份阳性样品,32份阴性样品。二者的阳性符合率为83.7%,阴性符合率为100%,总符合率为91.3%。本研究首次基于MVV rCA-TM建立了MVV间接ELISA检测方法,且该方法能够分别识别CA蛋白抗体和TM蛋白抗体,不仅减少了因为血清转换而导致血清抗体检测不准确的影响,还扩大了检测范围,为内蒙地区绵羊梅迪-维斯纳病的诊断及净化提供了检测手段。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 间接ELISA方法 原核表达 融合蛋白
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IL-2和绵羊梅迪-维斯纳病病毒核心蛋白Gag核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答 被引量:6
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作者 丁忠庆 沈荣显 +2 位作者 相文华 赵丽荣 赵立平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期204-207,共4页
构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒(MVV)核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL-2联合免疫小鼠,为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVV gag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5.0中,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,并经酶... 构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒(MVV)核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL-2联合免疫小鼠,为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVV gag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5.0中,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,并经酶切以及测序鉴定。分别用阳性质粒pcDNA5.0-Gag、空载体pcDNA5.0及pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2共免疫BALB/C小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体以及IFN-γ和IL-4水平,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果表明pcDNA5.0-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IFN-γ、IL-4水平高于pcDNA5.0-Gag免疫组,与空载体pcDNA5.0对照组相比有显著差异(P<0.01)。且pcDNA5.0-Gag单独免疫组及与IL-2联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数均高于空载体pcDNA5.0对照组。因此,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,用其联合免疫BALB/C小鼠所诱导的免疫反应以特异性细胞免疫应答为主,同时可产生体液免疫,且IL-2发挥了免疫佐剂的作用,为进一步将其用于MVV的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊梅迪-维斯病毒 GAG基因 IL-2 核酸疫苗
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梅迪—维斯纳病毒 被引量:2
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作者 夏炉明 陈琦 +2 位作者 卢军 李维功 孙泉云 《上海畜牧兽医通讯》 2012年第5期58-59,共2页
梅迪-维斯纳病毒能引起绵羊的慢病毒感染,目前国内针对该病毒的研究较少,本文就梅迪-维斯纳病毒的基本特征进行简要介绍,重点对梅迪-维斯纳病毒的基因组结构、基因编码产物以及表达调控作一综述。
关键词 梅迪-维斯纳病毒 基因组结构 编码产物 表达调控
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羊慢病毒及其抗性基因研究进展 被引量:6
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作者 管峰 石国庆 +1 位作者 赵进 王一民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1204-1210,共7页
羊慢病毒也称小反刍动物慢病毒,主要包括绵羊梅迪–维斯纳病毒和山羊关节炎–脑炎病毒,二者主要感染绵羊和山羊,目前该病在世界范围内流行并给养羊业带来很大的经济损失。研究表明,不同绵羊品种对慢病毒易感性存在差异,这种差异表明易... 羊慢病毒也称小反刍动物慢病毒,主要包括绵羊梅迪–维斯纳病毒和山羊关节炎–脑炎病毒,二者主要感染绵羊和山羊,目前该病在世界范围内流行并给养羊业带来很大的经济损失。研究表明,不同绵羊品种对慢病毒易感性存在差异,这种差异表明易感性不同的绵羊可能存在遗传多样性的差异。全基因组关联分析发现绵羊跨膜蛋白TMEM154(Transmembrane protein 154)基因中的一个点突变E35K与抗病力高度相关,可以作为绵羊抗病选育的分子标记。文章详述了绵羊TMEM154基因E35K突变对抗病力的影响和当前慢病毒抗病基因研究概况,包括锌指家族、趋化因子受体CCR5、三重基序蛋白TRIM5α、载脂蛋白B m RNA剪辑酶催化多肽样蛋白3、多能发育相关基因2和4,并简要介绍了羊慢病毒特征和我国羊慢病毒病的流行状况,以期为我国绵羊养殖业和抗病选育提供参考。 展开更多
关键词 羊慢病毒 梅迪-维斯纳病毒(MVV) TMEM154基因 突变 抗病性
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小反刍动物慢病毒通用PCR检测方法的建立与初步评价 被引量:3
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作者 杨义琴 吴建勇 +4 位作者 古努尔.吐尔逊 李建军 杨学云 贾斌 王登峰 《草食家畜》 2018年第2期13-19,共7页
为建立通用的小反刍动物慢病毒(山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒)病原学检测技术方法,本研究对Gen Bank公布的31株小反刍动物慢病毒前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150 bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物;通过全... 为建立通用的小反刍动物慢病毒(山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒)病原学检测技术方法,本研究对Gen Bank公布的31株小反刍动物慢病毒前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150 bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物;通过全基因合成方法获得该序列作为PCR反应的阳性对照模板,以此建立了小反刍动物慢病毒PCR检测方法,研究结果初步证实其可用于山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒野毒株RNA和前病毒DNA的检测,说明该方法有望用于我国小反刍动物慢病毒病的检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 小反刍动物慢病毒 梅迪-维斯纳病毒 山羊关节炎-脑炎病毒 聚合酶链式反应 检测方法
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