桑花叶型萎缩病相关病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法 被引量：1

1

作者 孙勋勋 杨宏宇 +1 位作者 周轶楠 刘吉平 《广东农业科学》 CAS 2019年第8期111-117,共7页

【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus,MMDaV)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以MMDaV保守的外壳蛋白基因为靶基因,设计特异引物,构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒,建立阳性质粒的标准曲线,... 【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus,MMDaV)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以MMDaV保守的外壳蛋白基因为靶基因,设计特异引物,构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒,建立阳性质粒的标准曲线,并对MMDaV特异引物的灵敏性和特异性进行检测,并使用建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法检测广东、广西、海南、重庆、陕西和江西6个省区的桑病叶样品。【结果】构建的标准曲线具有良好的扩增效率(97.88%),设计的特异引物可特异的检测到MMDaV,最低的质粒检测浓度为8 copies/μL,是普通PCR灵敏度的24倍,并且MMDaV实时荧光定量PCR检测方法对6个省区的桑病叶样品均有良好的检测结果,检测的Cq值在9.69~26.17之间。【结论】建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法具有高效率、特异性好和灵敏度高等特性,可被应用于寄主体内MMDaV的定量检测。 展开更多

关键词 桑树 双生病毒 桑花叶型萎缩病 桑花叶型萎缩病相关病毒 实时荧光定量PCR

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桑花叶型萎缩病相关病毒的 IMSA-LAMP检测方法获得新进展

2

作者 刘吉平 《蚕学通讯》 2022年第4期51-51,共1页

桑病毒病是桑树常见的病害,一旦暴发会影响桑树的产量和桑叶的品质,其中又以桑花叶型萎缩病的影响最大。虽然对桑花叶型萎缩病的研究最为广泛,但对该病害早期病症的预知检测,以及引发桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry mosaic dwarf asso... 桑病毒病是桑树常见的病害,一旦暴发会影响桑树的产量和桑叶的品质,其中又以桑花叶型萎缩病的影响最大。虽然对桑花叶型萎缩病的研究最为广泛,但对该病害早期病症的预知检测,以及引发桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry mosaic dwarf associated virus,MMDaV)的鉴别与研究则鲜见报道。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 病毒病 桑树 桑叶

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桑花叶型萎缩病病原研究初报 被引量：13

3

作者 卢全有 夏志松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期249-251,共3页

通过往返双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Return-PAGE)和垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)检测,发现从桑花叶型萎缩病的病叶组织中提取的总核酸中存在环状小分子RNA,即类病毒RNA。根据桑花叶型萎缩病的症状和发生规律以及植物类病毒病的定... 通过往返双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Return-PAGE)和垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)检测,发现从桑花叶型萎缩病的病叶组织中提取的总核酸中存在环状小分子RNA,即类病毒RNA。根据桑花叶型萎缩病的症状和发生规律以及植物类病毒病的定义,认为这种环状小分子RNA可能是引起桑花叶型萎缩病的病原。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 往返双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 类病毒

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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测 被引量：2

4

作者 卢全有 吴祖建 +1 位作者 夏志松 谢联辉 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期218-225,共8页

桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模... 桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模板,采用RT-PCR获得编码该病毒外壳蛋白C端38 k D的核苷酸序列片段,暂命名为CP38。将CP38连接到原核表达载体构建重组表达载体p GEX-4T-CP38,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经1 mmol/L IPTG诱导,使融合蛋白GST-CP38高效表达。通过SDS-PAGE胶回收原核表达的融合蛋白,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MMLRa V的多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶2 048,Western blot检测其能够与MMLRa V发生特异性反应。用制备的抗血清对感病桑树叶片粗汁液煮沸后离心获得的上清液进行间接ELISA检测,MMLRa V的检出率达到84%,可以应用于大田病样的检测。 展开更多

关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 酶联免疫吸附试验间接法

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桑树花叶型萎缩病病株叶片组织中类似类病毒小分子RNA的检测与分析 被引量：3

5

作者 卢全有 夏志松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1017-1021,共5页

为了能有效检测桑树中的类似类病毒小分子RNA(mscRNA),给解明mscRNA与桑树花叶型萎缩病发生的关系提供依据,以来自不同蚕区和不同季节发病桑园中的桑树花叶型萎缩病病株叶片为材料,采用LiCl法和DEAE纤维素柱层析法分别提取病叶组织中的m... 为了能有效检测桑树中的类似类病毒小分子RNA(mscRNA),给解明mscRNA与桑树花叶型萎缩病发生的关系提供依据,以来自不同蚕区和不同季节发病桑园中的桑树花叶型萎缩病病株叶片为材料,采用LiCl法和DEAE纤维素柱层析法分别提取病叶组织中的mscRNA,然后利用往返聚丙烯酰胺凝胶电泳(Return-PAGE)进行检测鉴定,并对mscRNA在2mol/LLiCl溶液中的溶解性及该检测方法的灵敏度进行分析。结果显示:采用LiCl法和DEAE纤维素柱层析法都可以有效地提取阳性材料中含有的mscRNA;在溶解及不溶于2mol/LLiCl的阳性材料RNA样品中均含有丰富的mscRNA,mscRNA在LiCl溶液中的溶解性与已知类病毒的溶解性有很大的差异;当提取的病桑叶片组织总RNA量为480ng时,通过Return-PAGE可以检测到mscRNA,当总RNA量≤96ng时,已检测不到其中含有的mscRNA;在36株发病植株的叶片总RNA样品中,有7个样品检测出含有mscRNA,检出率约19%,在一些病症明显的植株样品中未检测出mscRNA,而在一些病症较轻的植株样品中却检测出mscRNA。检测结果提示:mscRNA与桑树花叶型萎缩病症的表现没有表现出明显的关联。 展开更多

关键词 桑树花叶型萎缩病 类似类病毒小分子RNA 溶解性 往返聚丙烯酰胺凝胶电泳

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切割桑花叶萎缩类病毒的12串联体核酶基因克隆与转录载体构建 被引量：1

6

作者 孔卫青 杨金宏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期638-642,共5页

通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并... 通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并将其连接于载体pMD18T-SP6。在SP6 RNA聚合酶的作用下对线性化的重组质粒进行体外转录,体外自切割反应显示转录的多体自切割核酶可以通过内部的顺式切割释放出核酶分子。同时,将该12串联体核酶基因导入双元质粒pBI121中,获得重组植物转录载体pBI121-12MRz,为进一步培育抗桑花叶型萎缩病的转基因桑树奠定了基础。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 类病毒 12串联体核酶基因 转录载体 切割活性

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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗体的制备及利用 被引量：1

7

作者 孔卫青 凌君 杨金宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1077-1082,共6页

对桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗原性较好的核心结构域进行克隆和序列多样性分析,结果表明50个克隆中有19个克隆株,CP16为优势株。构建重组表达载体pET-28a-SUMO-CP16,成功在大肠杆菌Rosetta中诱导表达该蛋白,利用亲和层析纯化重组蛋... 对桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗原性较好的核心结构域进行克隆和序列多样性分析,结果表明50个克隆中有19个克隆株,CP16为优势株。构建重组表达载体pET-28a-SUMO-CP16,成功在大肠杆菌Rosetta中诱导表达该蛋白,利用亲和层析纯化重组蛋白并制备多克隆抗体。经Western杂交和ID-ELISA检测合格的抗体偶联Tosylactivated磁珠,用于桑花叶卷叶病相关病毒的纯化。经qPCR技术检测显示,纯化后的病毒样本中的背景RNA得到极大的减少,获得了高纯度的病毒样品。 展开更多

关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 外壳蛋白 多克隆抗体 免疫磁珠 定量PCR

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桑花叶型萎缩病夏季嫁接的传染性试验 被引量：4

8

作者 夏志松 卢全有 《中国蚕业》 2004年第2期22-22,共1页

桑花叶型萎缩病又名萎缩病、癃桑、瘌头皮桑、惊桑,是一种危害十分严重的桑树全株性病害,分布于浙江、江苏、安徽、四川等省蚕区.在春末夏初和秋期22～28℃气温下发生病害,夏季高温(30℃)时出现高温隐症,同一枝条有间歇发病的现象,即春... 桑花叶型萎缩病又名萎缩病、癃桑、瘌头皮桑、惊桑,是一种危害十分严重的桑树全株性病害,分布于浙江、江苏、安徽、四川等省蚕区.在春末夏初和秋期22～28℃气温下发生病害,夏季高温(30℃)时出现高温隐症,同一枝条有间歇发病的现象,即春末夏初表现病症后,夏季生长部分生长正常秋季又出现病症. 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 夏季 嫁接 传染性 癃桑 瘌头皮桑 温度

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桑花叶型萎缩病的研究现状与展望 被引量：5

9

作者 夏志松 卢全有 《中国蚕业》 2005年第2期12-14,共3页

桑花叶型萎缩病是危害十分严重的种苗传染性桑树病害,在我国浙江、安徽、江苏、湖南、湖北、河南、四川、重庆、广东、广西等省(市)均有发生为害,浙江省的湖州、嘉兴地区受害特别严重.发病面积约占全国桑园总面积的15%,桑树株发病率在20... 桑花叶型萎缩病是危害十分严重的种苗传染性桑树病害,在我国浙江、安徽、江苏、湖南、湖北、河南、四川、重庆、广东、广西等省(市)均有发生为害,浙江省的湖州、嘉兴地区受害特别严重.发病面积约占全国桑园总面积的15%,桑树株发病率在20%～30%左右,发病严重的桑园可达到60%～80%,个别田块甚至高达90%以上.该病导致桑树生长不良,桑叶产量大幅度减产,桑叶质量下降,影响蚕茧产量和质量,严重制约我国蚕桑生产的发展. 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 研究现状 展望 桑树病害 发生为害 嘉兴地区 生长不良 桑叶产量 桑叶质量 蚕茧产量 蚕桑生产 传染性 浙江省 发病率 大幅度 面积 桑园 种苗 田块 减产

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利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒

10

作者 苏秀 陈莎 +2 位作者 朱诚棋 周湘 马良进 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期576-582,共7页

植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似... 植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似感染桑花叶卷叶病(原称桑花叶型萎缩病)的桑树叶片为材料提取总RNA,构建sRNA文库并进行深度测序,对测序得到的总sRNA进行组装后,比对鉴定出桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V),并分别得到占MMLRa V 2个组分全基因组14.19%和21.86%的核酸序列。进一步以感病桑叶组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得部分MMLRa V基因组序列,经Sanger测序确定采集的感病桑树叶片中只存在MMLRa V。通过生物信息学方法分析表明,MMLRa V来源siRNA在基因组中的长度分布、5'端碱基偏好性及热点区分布等具有明显特点。研究结果显示,利用siRNA深度测序技术鉴定桑树病毒是非常高效的手段。 展开更多

关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 深度测序 小干扰RNA 生物信息学分析

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分子生物技术检测桑花叶型萎缩病原 被引量：7

11

作者 费建明 白锡川 +3 位作者 于峰 赵航 王文兵 蒯元璋 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第2期115-118,共4页

根据多年对桑花叶型萎缩病的追踪研究,分离获得了病桑组织类似类病毒的小分子RNA,对其部分序列进行解析,并以之作为病原物的分子标志物,用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、点杂交和Northern-blot等分子生物技术方法检测症状明显的病株,取得了... 根据多年对桑花叶型萎缩病的追踪研究,分离获得了病桑组织类似类病毒的小分子RNA,对其部分序列进行解析,并以之作为病原物的分子标志物,用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、点杂交和Northern-blot等分子生物技术方法检测症状明显的病株,取得了比较理想的结果。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 类病毒 检测 分子生物学

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如何防治桑花叶型萎缩病? 被引量：2

12

作者 乐波灵 《广西蚕业》 2004年第2期53-53,共1页

关键词 防治 桑花叶型 萎缩病 发病规律

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如何防治桑花叶型萎缩病?

13

作者 乐波灵 《广西蚕业》 2004年第4期51-51,共1页

关键词 桑花叶型萎缩病 叶面 病株 株叶 桑园 寄生 诊断 地蚕 线状 病毒

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抗桑花叶萎缩病的桑品种筛选与应用

14

作者 蒯元璋 王文兵 +3 位作者 费建明 白锡川 李玉峰 柳丽萍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期820-823,共4页

桑花叶萎缩病是桑树的一种类病毒病害,栽植抗病桑品种是最经济有效的病害防控策略。在桑花叶萎缩病发病严重的桑园内筛选出凤尾芽变、大中华2个对病害抵抗力较强、产量性状优的桑品种,并将这2个抗病品种的接穗用冠接法嫁接浙江省湖州市... 桑花叶萎缩病是桑树的一种类病毒病害,栽植抗病桑品种是最经济有效的病害防控策略。在桑花叶萎缩病发病严重的桑园内筛选出凤尾芽变、大中华2个对病害抵抗力较强、产量性状优的桑品种,并将这2个抗病品种的接穗用冠接法嫁接浙江省湖州市病区桑园的发病桑树。其中,凤尾芽变接穗的嫁接成活率为76.5%,病树康复率达100%;大中华接穗的嫁接成活率为52.9%,病树康复率为88.89%。此外,嫁接成活后的病树均生长良好。初步认为,筛选抗病力较强的桑品种用于桑花叶萎缩病发病桑树的嫁接改造,是快速有效防控病害的技术途径之一。 展开更多

关键词 桑花叶萎缩病 类病毒 抗病品种 凤尾芽变 大中华 嫁接复壮

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桑树花叶型萎缩病

15

作者 马宇欣 李世访 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期63-63,共1页

桑树花叶型萎缩病（mulberry mosaic dwarf disease,MMDD）是一种困扰桑树生产长达半个多世纪以上的重要病害,其病原长时间众说纷纭,没有定论。感病桑树植株矮小,叶片呈现黄绿相间的花叶,叶缘卷曲,叶脉上有突起等症状,严重影响桑蚕产业... 桑树花叶型萎缩病（mulberry mosaic dwarf disease,MMDD）是一种困扰桑树生产长达半个多世纪以上的重要病害,其病原长时间众说纷纭,没有定论。感病桑树植株矮小,叶片呈现黄绿相间的花叶,叶缘卷曲,叶脉上有突起等症状,严重影响桑蚕产业的发展。 展开更多

关键词 花叶型 萎缩病 桑蚕产业 病毒病害 叶缘 DWARF 陕西省安康市 mosaic 封面照片 研究方法

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两种桑树病毒的形态观察与检测 被引量：3

16

作者 孙勋勋 周轶楠 +3 位作者 黄吉雷 易辉玉 田铃 刘吉平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期252-258,共7页

桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,... 桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,一种为双联体形态病毒,长(27.84±1.71)nm,宽(17.05±1.13)nm,形态特征与双生病毒属的病毒形态特征一致;另一种为球状体病毒(80~100 nm),形态特征与番茄斑萎病毒属的病毒形态特征一致;桑叶切片观察,发现同一桑叶材料中存在这两种病毒。通过高通量测序发现其存在桑花叶型萎缩病相关病毒Mulberry mosaic dwarf associated virus(MMDaV)和桑脉带相关病毒Mulberry vein banding associated virus(MVBaV)。设计上述病毒的特异引物,对158份桑病叶进行PCR检测,MMDaV的检出率为93.04%;而MVBaV为60.13%,同时检出率为57.59%。结果表明,MMDaV和MVBaV在桑病叶中普遍存在,且同时存在。本研究首次在桑树病叶中同时观察并检测到MMDaV和MVBaV,二者在桑皱缩状和花叶状的桑叶中存在混合感染的现象,研究结果将为今后深入研究桑病毒病及防控奠定了基础。 展开更多

关键词 桑树病毒病 桑花叶型萎缩病相关病毒 桑脉带相关病毒 形态特征 PCR检测

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桑树病毒与病毒病的研究进展(Ⅱ) 被引量：7

17

作者 蒯元璋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期278-284,共7页

业已明确的桑树病毒病有10种。在前文报道部分桑树真病毒及病害的研究进展之后,再重点介绍桑花叶萎缩类病毒及病害的研究进展,包括病原物提取、基因组序列分析、寄主范围、致病特征、诊断方法和病害控制等,为桑花叶萎缩类病毒的深入研... 业已明确的桑树病毒病有10种。在前文报道部分桑树真病毒及病害的研究进展之后,再重点介绍桑花叶萎缩类病毒及病害的研究进展,包括病原物提取、基因组序列分析、寄主范围、致病特征、诊断方法和病害控制等,为桑花叶萎缩类病毒的深入研究以及病害的有效防治提供参考。 展开更多

关键词 桑树病毒病 桑花叶萎缩类病毒 基因组序列分析 二级结构 防治方法

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桑树萎缩病的防治 被引量：1

18

作者 王太兴 《蚕桑茶叶通讯》 2009年第6期15-16,共2页

关键词 桑黄化型萎缩病 桑树 桑花叶型萎缩病 防治 病毒性病害 猫耳朵

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出现桑树萎缩病用什么药防治?

19

作者 白雪 《广西蚕业》 2007年第A02期33-33,共1页

桑树萎缩病分桑花叶型萎缩病、桑萎缩型萎缩病和桑黄化型萎缩病，症状分别为：①花叶型：叶片皱缩并向上卷缩，叶间有浅绿色斑块，叶背的叶脉上有瘤状突起。②萎缩型：叶片变小、变黄，有时半张叶片变圆，细叶脉常全变褐色，无瘤状突起... 桑树萎缩病分桑花叶型萎缩病、桑萎缩型萎缩病和桑黄化型萎缩病，症状分别为：①花叶型：叶片皱缩并向上卷缩，叶间有浅绿色斑块，叶背的叶脉上有瘤状突起。②萎缩型：叶片变小、变黄，有时半张叶片变圆，细叶脉常全变褐色，无瘤状突起。③黄化型：叶片显著变黄，叶尖向下卷，叶背的叶脉无瘤状突起。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 桑树 桑黄化型萎缩病 防治 叶片 浅绿色 叶脉 缩型

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桑植原体ltrA基因序列分析及在桑萎缩病早期检测诊断中的初步应用

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作者 刘吉平 《蚕学通讯》 2020年第4期56-56,共1页

桑花叶型萎缩病是目前最为典型的、最重要的桑树病害之一。近半个多世纪来,桑花叶型萎缩病在中国江浙和两广等大部分蚕区均有发生,发病桑园的植株发病率高达80%,给桑树的健康生长和桑叶的优质高产带来严重威胁,病害一旦暴发会造成生产... 桑花叶型萎缩病是目前最为典型的、最重要的桑树病害之一。近半个多世纪来,桑花叶型萎缩病在中国江浙和两广等大部分蚕区均有发生,发病桑园的植株发病率高达80%,给桑树的健康生长和桑叶的优质高产带来严重威胁,病害一旦暴发会造成生产上的巨大经济损失。桑植原体CandidatusPhytoplasma asteris MD是目前已报道的桑花叶型萎缩病潜在的病原之一,蚕桑生产上由桑植原体引起的相关病害大多通过发病后的病症来判断,可应用的早期检测手段较少。因此,亟需研究探索出一种适用范围广、简单、快速和准确的检测桑植原体的方法,以便做好桑花叶型萎缩病的发生预警、防控及带毒桑树苗木的检疫。 展开更多

关键词 桑花叶型萎缩病 桑树病害 蚕桑生产 蚕区 原体 检测诊断 早期检测 桑植

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