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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测 被引量:2
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作者 卢全有 吴祖建 +1 位作者 夏志松 谢联辉 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期218-225,共8页
桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模... 桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模板,采用RT-PCR获得编码该病毒外壳蛋白C端38 k D的核苷酸序列片段,暂命名为CP38。将CP38连接到原核表达载体构建重组表达载体p GEX-4T-CP38,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经1 mmol/L IPTG诱导,使融合蛋白GST-CP38高效表达。通过SDS-PAGE胶回收原核表达的融合蛋白,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MMLRa V的多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶2 048,Western blot检测其能够与MMLRa V发生特异性反应。用制备的抗血清对感病桑树叶片粗汁液煮沸后离心获得的上清液进行间接ELISA检测,MMLRa V的检出率达到84%,可以应用于大田病样的检测。 展开更多
关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 酶联免疫吸附试验间接法
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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗体的制备及利用 被引量:1
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作者 孔卫青 凌君 杨金宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1077-1082,共6页
对桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗原性较好的核心结构域进行克隆和序列多样性分析,结果表明50个克隆中有19个克隆株,CP16为优势株。构建重组表达载体pET-28a-SUMO-CP16,成功在大肠杆菌Rosetta中诱导表达该蛋白,利用亲和层析纯化重组蛋... 对桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗原性较好的核心结构域进行克隆和序列多样性分析,结果表明50个克隆中有19个克隆株,CP16为优势株。构建重组表达载体pET-28a-SUMO-CP16,成功在大肠杆菌Rosetta中诱导表达该蛋白,利用亲和层析纯化重组蛋白并制备多克隆抗体。经Western杂交和ID-ELISA检测合格的抗体偶联Tosylactivated磁珠,用于桑花叶卷叶病相关病毒的纯化。经qPCR技术检测显示,纯化后的病毒样本中的背景RNA得到极大的减少,获得了高纯度的病毒样品。 展开更多
关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 外壳蛋白 多克隆抗体 免疫磁珠 定量PCR
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利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒
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作者 苏秀 陈莎 +2 位作者 朱诚棋 周湘 马良进 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期576-582,共7页
植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似... 植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似感染桑花叶卷叶病(原称桑花叶型萎缩病)的桑树叶片为材料提取总RNA,构建sRNA文库并进行深度测序,对测序得到的总sRNA进行组装后,比对鉴定出桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V),并分别得到占MMLRa V 2个组分全基因组14.19%和21.86%的核酸序列。进一步以感病桑叶组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得部分MMLRa V基因组序列,经Sanger测序确定采集的感病桑树叶片中只存在MMLRa V。通过生物信息学方法分析表明,MMLRa V来源siRNA在基因组中的长度分布、5'端碱基偏好性及热点区分布等具有明显特点。研究结果显示,利用siRNA深度测序技术鉴定桑树病毒是非常高效的手段。 展开更多
关键词 桑花叶卷叶病相关病毒 深度测序 小干扰RNA 生物信息学分析
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桑花叶型萎缩病相关病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法 被引量:1
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作者 孙勋勋 杨宏宇 +1 位作者 周轶楠 刘吉平 《广东农业科学》 CAS 2019年第8期111-117,共7页
【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus,MMDaV)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以MMDaV保守的外壳蛋白基因为靶基因,设计特异引物,构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒,建立阳性质粒的标准曲线,... 【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus,MMDaV)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以MMDaV保守的外壳蛋白基因为靶基因,设计特异引物,构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒,建立阳性质粒的标准曲线,并对MMDaV特异引物的灵敏性和特异性进行检测,并使用建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法检测广东、广西、海南、重庆、陕西和江西6个省区的桑病叶样品。【结果】构建的标准曲线具有良好的扩增效率(97.88%),设计的特异引物可特异的检测到MMDaV,最低的质粒检测浓度为8 copies/μL,是普通PCR灵敏度的24倍,并且MMDaV实时荧光定量PCR检测方法对6个省区的桑病叶样品均有良好的检测结果,检测的Cq值在9.69~26.17之间。【结论】建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法具有高效率、特异性好和灵敏度高等特性,可被应用于寄主体内MMDaV的定量检测。 展开更多
关键词 桑树 双生病毒 桑花型萎缩 桑花型萎缩相关病毒 实时荧光定量PCR
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抗桑花叶萎缩病的桑品种筛选与应用
5
作者 蒯元璋 王文兵 +3 位作者 费建明 白锡川 李玉峰 柳丽萍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期820-823,共4页
桑花叶萎缩病是桑树的一种类病毒病害,栽植抗病桑品种是最经济有效的病害防控策略。在桑花叶萎缩病发病严重的桑园内筛选出凤尾芽变、大中华2个对病害抵抗力较强、产量性状优的桑品种,并将这2个抗病品种的接穗用冠接法嫁接浙江省湖州市... 桑花叶萎缩病是桑树的一种类病毒病害,栽植抗病桑品种是最经济有效的病害防控策略。在桑花叶萎缩病发病严重的桑园内筛选出凤尾芽变、大中华2个对病害抵抗力较强、产量性状优的桑品种,并将这2个抗病品种的接穗用冠接法嫁接浙江省湖州市病区桑园的发病桑树。其中,凤尾芽变接穗的嫁接成活率为76.5%,病树康复率达100%;大中华接穗的嫁接成活率为52.9%,病树康复率为88.89%。此外,嫁接成活后的病树均生长良好。初步认为,筛选抗病力较强的桑品种用于桑花叶萎缩病发病桑树的嫁接改造,是快速有效防控病害的技术途径之一。 展开更多
关键词 桑花萎缩 病毒 品种 凤尾芽变 大中华 嫁接复壮
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如何防治桑花叶型萎缩病?
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作者 乐波灵 《广西蚕业》 2004年第4期51-51,共1页
关键词 桑花型萎缩 桑园 寄生 诊断 地蚕 线状 病毒
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桑树病毒与病毒病的研究进展(Ⅱ) 被引量:6
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作者 蒯元璋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期278-284,共7页
业已明确的桑树病毒病有10种。在前文报道部分桑树真病毒及病害的研究进展之后,再重点介绍桑花叶萎缩类病毒及病害的研究进展,包括病原物提取、基因组序列分析、寄主范围、致病特征、诊断方法和病害控制等,为桑花叶萎缩类病毒的深入研... 业已明确的桑树病毒病有10种。在前文报道部分桑树真病毒及病害的研究进展之后,再重点介绍桑花叶萎缩类病毒及病害的研究进展,包括病原物提取、基因组序列分析、寄主范围、致病特征、诊断方法和病害控制等,为桑花叶萎缩类病毒的深入研究以及病害的有效防治提供参考。 展开更多
关键词 桑树病毒 桑花萎缩类病毒 基因组序列分析 二级结构 防治方法
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两种桑树病毒的形态观察与检测 被引量:3
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作者 孙勋勋 周轶楠 +3 位作者 黄吉雷 易辉玉 田铃 刘吉平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期252-258,共7页
桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,... 桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,一种为双联体形态病毒,长(27.84±1.71)nm,宽(17.05±1.13)nm,形态特征与双生病毒属的病毒形态特征一致;另一种为球状体病毒(80~100 nm),形态特征与番茄斑萎病毒属的病毒形态特征一致;桑叶切片观察,发现同一桑叶材料中存在这两种病毒。通过高通量测序发现其存在桑花叶型萎缩病相关病毒Mulberry mosaic dwarf associated virus(MMDaV)和桑脉带相关病毒Mulberry vein banding associated virus(MVBaV)。设计上述病毒的特异引物,对158份桑病叶进行PCR检测,MMDaV的检出率为93.04%;而MVBaV为60.13%,同时检出率为57.59%。结果表明,MMDaV和MVBaV在桑病叶中普遍存在,且同时存在。本研究首次在桑树病叶中同时观察并检测到MMDaV和MVBaV,二者在桑皱缩状和花叶状的桑叶中存在混合感染的现象,研究结果将为今后深入研究桑病毒病及防控奠定了基础。 展开更多
关键词 桑树病毒 桑花型萎缩相关病毒 桑脉带相关病毒 形态特征 PCR检测
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