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题名利用框内缺失法构建变异链球菌srtA基因缺失株
被引量：2
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作者
陈璇
刘海霞
彭显
邹玲
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机构
口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙体牙髓病科
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出处
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期588-592,共5页
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基金
国家自然科学基金(81570974)
四川省科技计划项目基金(2015JY0260)~~
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文摘
目的利用框内缺失法,通过IFDC2基因盒及融合聚合酶链反应(PCR)、同源重组技术构建变异链球菌UA159菌株srt A基因缺失株。方法 PCR扩增变异链球菌UA159菌株srt A基因上下游同源片段及IFDC2基因盒,将这些片段连接、转化入UA159,替换srt A基因同源片段,筛选、鉴定红霉素抗性克隆;PCR扩增、连接UA159 srt A基因上下游同源片段,将连接片段转化入前述红霉素抗性克隆中替换IFDC2同源片段,筛选、鉴定抗苯丙氨酸类似物p-chloro-phenylalanine(p-Cl-Phe)克隆。结果 PCR、琼脂糖凝胶电泳及DNA测序结果均证明srt A基因编码区被完全删除,上下游片段无缝连接,成功构建UA159 srt A基因缺失株。结论本研究成功构建了无标记的变异链球菌UA159 srt A基因缺失株,为进一步研究该基因在生物膜中的作用及其调控机制奠定了基础。
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关键词
变异链球菌
srtA基因缺失
框内缺失法
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Keywords
Streptococcus mutans
srtA-deletion mutant
in-frame deletion system
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分类号
R780.2
[医药卫生—口腔医学]
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题名31-去甲氧基-他克莫司的突变生物合成
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作者
方志锴
吴声栋
江红
严凌斌
连云阳
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机构
福建省微生物研究所福建省新药(微生物)筛选重点实验室
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出处
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期652-657,共6页
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基金
福建省公益类科研院所专项(No.2014R1009-5)
福建省化药技术重大研发平台(No.2014Y2001)
+1 种基金
福州市生物制药行业技术创新中心(No.2016-PT-36)
福建省微生物分析检测技术公共服务平台建设(No.2013Y2003)
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文摘
目的通过突变生物合成获得31-去甲氧基-他克莫司。方法针对大环内酯类免疫抑制剂他克莫司的聚酮链起始底物4,5-二羟基-1-烯-环己酸(DHCHC)合成酶fkbO基因,构建基因敲除载体pFIM412-fkbO并对他克莫司产生菌Streptomyces sp.FCZ-0311 fkbO基因进行框内缺失。结果获得突变株Streptomyces sp.OD14-1,经摇瓶发酵和产物HPLC分析,该突变株完全丧失了合成他克莫司的能力。在OD14-1摇瓶发酵36h后添加DHCHC类似物反式-4-羟基环己烷羧酸,发酵6d后经HPLC-MS检测发现分子量为773的他克莫司衍生物31-去甲氧基-他克莫司。结论构建了可用于他克莫司突变生物合成的基因工程菌Streptomyces sp.OD14-1,并通过外源物质的添加获得31-去甲氧基-他克莫司。
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关键词
突变生物合成
他克莫司
fkbO
框内缺失
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Keywords
Mutational biosynthesis
Tacrolimus
fkbO
In-frame deletion
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分类号
R978.1
[医药卫生—药品]
Q93
[生物学—微生物学]
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