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根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的优化 被引量：1
1
作者 王之杰 李明序 张万军 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1665-1671,共7页
为进一步提高根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化效率,本试验以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种‘中苜1号’为试验材料,通过筛选高效再生的植株,以筛选出的植株叶片为外植体,并通过调节培养基激素配比,在农杆菌侵染过程中添加谷氨酰胺... 为进一步提高根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化效率,本试验以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种‘中苜1号’为试验材料,通过筛选高效再生的植株,以筛选出的植株叶片为外植体,并通过调节培养基激素配比,在农杆菌侵染过程中添加谷氨酰胺、进行冷处理等措施优化苜蓿由农杆菌介导的遗传转化体系。试验结果表明:转化过程中以嫩叶作为外植体,菌液和重悬液中添加150μmol·L^(-1)乙酰丁香酮,侵染过程中使用300μmol·L^(-1)的谷氨酰胺将瞬时转化效率从32%提高至92%,转化效率提高到31%。研究紫花苜蓿的遗传转化体系可为紫花苜蓿高效遗传改良及基因功能研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 根癌农杆菌 遗传转化 体系优化
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根癌农杆菌介导彩色马蹄莲遗传转化体系的建立及优化
2
作者 李菲 曹永琼 +3 位作者 王纲 郭彦兵 李紫薇 吴红芝 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1692-1699,共8页
【目的】建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)遗传转化体系,为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】将不同外植体(茎基、叶、不定芽)和不同浓度噻苯隆(TDZ)(0.001、0... 【目的】建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)遗传转化体系,为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】将不同外植体(茎基、叶、不定芽)和不同浓度噻苯隆(TDZ)(0.001、0.002和0.005 g/L)进行正交试验筛选外植体和丛生芽增殖培养基;液氮冻融法将pCAM BIA2301和pBI121质粒转入农杆菌LBA4404感受态细胞。以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为农杆菌介导转化测定的报告基因,对彩色马蹄莲的丛生芽进行遗传转化,阳性苗经PCR扩增验证转化结果。通过不同硫酸卡那霉素(Kan)浓度(50、100和150 mg/L)、侵染时间(25、30和40 min)及共培养时间(2和3 d)3因素正交试验筛选最佳转化条件。【结果】外植体为不定芽的丛生芽诱导率极显著高于茎基和叶(P<0.01),当不定芽为外植体、TDZ浓度为0.002 mg/L时,丛生芽增殖倍数(5.12倍)显著高于0.001和0.005 mg/L TDZ处理(P<0.05),筛选出M6培养基+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+6.25 g/L琼脂为丛生芽增殖培养基;影响阳性频率因素排序为:侵染时间>Kan浓度>共培养时间。当Kan浓度为50 mg/L、侵染时间25 min及共培养时间为3 d为最优侵染条件,此时,GUS+丛生芽出芽频率和PCR阳性频率最高,分别为54.0%和15.27%。【结论】成功优化彩色马蹄莲遗传转化体系,最佳外植体为不定芽,转化体系最佳组合为Kan浓度为50 mg/L、侵染时间为25 min及共培养时间为3 d。 展开更多
关键词 彩色马蹄莲 根癌农杆菌 遗传转化 优化
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根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建 被引量：3
3
作者 陈凤 王坤 +3 位作者 银超 李德明 任楠 李俊星 《安徽农业科学》 CAS 2012年第16期8800-8805,共6页
[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并... [目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性。[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因(HygBr)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT),将带有HygBr的质粒pHGW-amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115.52,建立以HygBr为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系。利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS-PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达。[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性。 展开更多
关键词 泡盛曲霉 根癌农杆菌介导转化(ATMT) 潮霉素抗性基因 米黑根毛霉脂肪酶(RML)
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根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立 被引量：33
4
作者 黄天带 李哲 +3 位作者 孙爱花 周权男 华玉伟 黄华孙 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1691-1697,共7页
为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不... 为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。 展开更多
关键词 橡胶树 根癌农杆菌 花药愈伤组织 遗传转化 次生体胚发生
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根癌农杆菌介导苹果遗传转化研究进展 被引量：14
5
作者 秦玲 李明 +3 位作者 王永熙 韩礼星 黄贞光 赵改荣 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第4期135-140,共6页
论述和分析了影响苹果高效离体再生的主要因素 ,包括试验材料苹果的基因型、外植体生理状态、培养基类型、植物激素、Ag NO3、前期暗培养、抗生素等内外因子 ,以及影响根癌农杆菌介导苹果遗传转化的主要因素 ,包括苹果基因型、外植体生... 论述和分析了影响苹果高效离体再生的主要因素 ,包括试验材料苹果的基因型、外植体生理状态、培养基类型、植物激素、Ag NO3、前期暗培养、抗生素等内外因子 ,以及影响根癌农杆菌介导苹果遗传转化的主要因素 ,包括苹果基因型、外植体生理状态、菌株类型、菌液浓度、活化物质的应用、共培养、预培养、选择培养、培养基成分等内外因子。并对其研究现状。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 介导 苹果 遗传转化
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根癌农杆菌介导遗传转化稻曲病菌 被引量：20
6
作者 张震 杜新法 +5 位作者 柴荣耀 毛雪琴 邱海萍 王艳丽 王教瑜 孙国昌 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期440-442,共3页
利用根癌农杆菌介导转化系统，通过潮霉素抗性筛选转化子，对稻曲病菌分生孢子进行了转化。农杆菌经乙酰丁香酮预先诱导，转化效率大约为390-450个转化子／10^6个孢子。PCR检测绿色荧光蛋白基因和潮霉素基因表达盒，结果显示被测转化子... 利用根癌农杆菌介导转化系统，通过潮霉素抗性筛选转化子，对稻曲病菌分生孢子进行了转化。农杆菌经乙酰丁香酮预先诱导，转化效率大约为390-450个转化子／10^6个孢子。PCR检测绿色荧光蛋白基因和潮霉素基因表达盒，结果显示被测转化子基因组中均成功整合了目的基因片段。同时，在488nm下这些转化子都具有荧光。表明利用根癌农杆菌可以成功转化稻曲病菌。 展开更多
关键词 稻曲病菌 根癌农杆菌 遗传转化
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根癌农杆菌介导的水稻转化系统的优化及转反义Wx基因植株的获得 被引量：16
7
作者 于恒秀 刘巧泉 +4 位作者 陈秀花 陆美芳 王兴稳 王宗阳 顾铭洪 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期304-310,共7页
以具不同直链淀粉含量的籼粳稻品种为受体材料 ,试验了适宜于根癌农杆菌介导转化的水稻愈伤组织诱导培养基及其诱导培养的时间。结果表明 ,一种基于 MS基本培养基的商品培养基较适合作为籼粳稻幼胚愈伤组织的诱导培养基 ;对于籼型杂交... 以具不同直链淀粉含量的籼粳稻品种为受体材料 ,试验了适宜于根癌农杆菌介导转化的水稻愈伤组织诱导培养基及其诱导培养的时间。结果表明 ,一种基于 MS基本培养基的商品培养基较适合作为籼粳稻幼胚愈伤组织的诱导培养基 ;对于籼型杂交稻亲本协青早 B,转化前幼胚较适合的愈伤组织诱导培养天数为 8d左右。在此基础上 ,将反义蜡质 (Wx)基因分别导入上述受体亲本中 ,获得了一批转基因水稻植株。PCR和 Southern杂交分析表明反义 Wx基因已经整合进了转基因水稻的基因组中。遗传分析表明外源基因在转基因水稻后代中的分离符合 3∶ 展开更多
关键词 转化系统 水稻 根癌农杆菌 反义蜡质基因 直链淀粉含量
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根癌农杆菌介导麝香百合遗传转化体系的建立 被引量：11
8
作者 陈莉 马颖 +2 位作者 马锋旺 梁东 华智锐 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1335-1340,共6页
以麝香百合"white elegance"叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,研究了影响其转化的因素,建立了稳定而高效的麝香百合遗传转化体系。结果表明,以叶片为受体材料,外植体预培养有利于农杆菌的侵染;3 d的共培养,根癌农杆菌OD60... 以麝香百合"white elegance"叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,研究了影响其转化的因素,建立了稳定而高效的麝香百合遗传转化体系。结果表明,以叶片为受体材料,外植体预培养有利于农杆菌的侵染;3 d的共培养,根癌农杆菌OD600值为0.6左右、侵染10 min,能获得较高的转化率;50 mg.L-1的卡那霉素对叶片有很好的筛选效果。抗性植株经PCR检测,初步证明Mn-SOD基因已转入到麝香百合植株中。 展开更多
关键词 麝香百合 根癌农杆菌 遗传转化 MN-SOD PCR
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根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展 被引量：23
9
作者 黄亚丽 潘玮 +4 位作者 蒋细良 郭平 田云龙 李记鹏 朱昌雄 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期111-114,共4页
根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化是近年建立起来的一种新方法,该方法和以往的真菌转化体系相比具有转化方法简单、材料易得、效率高以及转化子中T-DNA单拷贝插入比例高等特点。就根癌农杆菌转化的丝状真菌种类、转化的具体过程以及影... 根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化是近年建立起来的一种新方法,该方法和以往的真菌转化体系相比具有转化方法简单、材料易得、效率高以及转化子中T-DNA单拷贝插入比例高等特点。就根癌农杆菌转化的丝状真菌种类、转化的具体过程以及影响转化效率的因素等方面进行了综述,并展望了该方法的应用前景。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 丝状真菌 遗传转化 T-DNA
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根癌农杆菌介导草莓遗传转化研究 被引量：21
10
作者 朱海生 潘东明 +2 位作者 林义章 张志忠 温庆放 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期36-40,35,共6页
利用带有内含子gus基因的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导"鬼露甘"草莓遗传转化的若干因素。结果表明:草莓叶片外植体对卡那霉素较为敏感,适宜的筛选浓度为20mg/L,可明显抑制非转化组织的生长;300mg/L的羧吩青霉素可有效抑菌... 利用带有内含子gus基因的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导"鬼露甘"草莓遗传转化的若干因素。结果表明:草莓叶片外植体对卡那霉素较为敏感,适宜的筛选浓度为20mg/L,可明显抑制非转化组织的生长;300mg/L的羧吩青霉素可有效抑菌,对外植体生长影响也较小;预培养2-4d有利于转化;共培养2-3d有利于提高转化频率并避免了农杆菌的过度生长;OD600nm值为0.4的菌液侵染10min效果最佳。再生植株经PCR检测初步证明gus基因已成功整合到草莓基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 草莓 遗传转化
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根癌农杆菌介导Ds转座因子的水稻遗传转化 被引量：25
11
作者 沈革志 张建军 +3 位作者 殷丽青 王新其 陈全庆 范昆华 《上海农业学报》 CSCD 1998年第4期7-12,共6页
以水稻品种中花11的幼胚、成熟胚和幼穗的愈伤组织为材料，经携带Ti质粒pDs－Bar1300的根癌农杆菌EHA105感染和共培养后，通过50mg／L和25mg／L潮霉素的二次筛选，结果表明34％幼胚愈伤组织、17％成熟胚愈伤组织和16．5％幼穗愈伤组织... 以水稻品种中花11的幼胚、成熟胚和幼穗的愈伤组织为材料，经携带Ti质粒pDs－Bar1300的根癌农杆菌EHA105感染和共培养后，通过50mg／L和25mg／L潮霉素的二次筛选，结果表明34％幼胚愈伤组织、17％成熟胚愈伤组织和16．5％幼穗愈伤组织表现潮霉素抗性。这些抗性愈伤组织转入分化和再生培养基培养，获得了14棵转基因植株。经Southern杂交分析，证明Ds和Bar基因都已整合进转基因植株的染色体组。对T1代植株的PPT抗性测定表明，外源Bar基因的分离符合孟德尔法则。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 遗传转化 Ds转座因子
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根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立 被引量：10
12
作者 杨迎青 杨媚 +3 位作者 李明海 李勇 贺晓霞 周而勋 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期617-622,共6页
为建立水稻纹枯病菌的T-DNA插入诱变转化系统,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1ⅠA)强致病力菌株GD118为转化的初始菌株,从预诱导时间、共培养时间、共培养时乙酰丁香酮的浓度、共培养温度和共培养时固体诱导培养基(SIM)的pH值等... 为建立水稻纹枯病菌的T-DNA插入诱变转化系统,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1ⅠA)强致病力菌株GD118为转化的初始菌株,从预诱导时间、共培养时间、共培养时乙酰丁香酮的浓度、共培养温度和共培养时固体诱导培养基(SIM)的pH值等5个方面对转化条件进行了优化,成功地建立了适合于水稻纹枯病菌根癌农杆菌介导转化(ATMT)的优化系统。这个优化系统的转化条件如下:以30μg/mL的潮霉素B作为转化子的筛选浓度,预诱导8h,共培养20h,共培养时固体诱导培养基上的乙酰丁香酮浓度为200μmol/L,共培养温度25℃,共培养时固体诱导培养基pH5.6～5.8。采用这个系统筛选到的转化子继代培养5代后,在含30μg/mL潮霉素B的PDA平板上仍表现明显的抗性。从得到的转化子中随机抽取10个,利用根据抗潮霉素hph基因设计的特异性引物进行PCR扩增,转化子均能扩增出500bp左右的预期条带;与此同时,以4个根癌农杆菌作为阳性对照,用根癌农杆菌Vir基因特异引物对转化子进行PCR扩增,以排除转化子受农杆菌污染所致的假阳性,结果表明:4个根癌农杆菌均能扩增出Vir基因条带(730bp),而10个转化子均未能扩增出相应条带。以上两个PCR扩增的实验结果清楚地表明,T-DNA已经插入到目标菌株GD118中。 展开更多
关键词 水稻纹枯病 立枯丝核菌 根癌农杆菌介导转化 T-DNA插入诱变 方法
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根癌农杆菌介导小麦成熟胚遗传转化影响因素的研究 被引量：10
13
作者 丁莉萍 陈泠 +4 位作者 李圣纯 李海东 汪越胜 杨广笑 何光源 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期761-766,共6页
为了进一步完善根癌农杆菌介导的小麦遗传转化体系,以小麦成熟胚为转化受体,研究了根癌农杆菌介导法转化小麦的主要影响因素,结果表明,以gus基因瞬时表达率、抗性愈伤组织获得率和分化率为转化指标,小麦成熟胚在预培养基CM4C1P上预培养1... 为了进一步完善根癌农杆菌介导的小麦遗传转化体系,以小麦成熟胚为转化受体,研究了根癌农杆菌介导法转化小麦的主要影响因素,结果表明,以gus基因瞬时表达率、抗性愈伤组织获得率和分化率为转化指标,小麦成熟胚在预培养基CM4C1P上预培养14 d后,用侵染培养液Ⅰ侵染3 h,再经干燥共培养方式处理3 d,是根癌农杆菌介导成熟胚转化的合适条件。在优化条件下,转化约30 d后GUS稳定表达的愈伤组织数占受体组织总数的15.83%;GUS稳定表达的抗选择剂G418的植株数占受体组织总数的0.28%。 展开更多
关键词 小麦 成熟胚 根癌农杆菌 遗传转化
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根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化 被引量：21
14
作者 刘小琳 王继峰 +4 位作者 胡晓艳 刘艳昆 熊军波 康俊梅 杨青川 《中国草地学报》 CSCD 2007年第2期102-106,共5页
以“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶和再生无菌苗的叶片为材料,建立了适用于农杆菌介导的转基因组织培养体系,并对MsNHX1基因进行转化。转化优化条件为:“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶、再生无菌苗叶片,用农杆菌菌液(A600=0.6)... 以“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶和再生无菌苗的叶片为材料,建立了适用于农杆菌介导的转基因组织培养体系,并对MsNHX1基因进行转化。转化优化条件为:“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶、再生无菌苗叶片,用农杆菌菌液(A600=0.6)侵染6min,然后在培养基上铺一层灭菌滤纸培养7d后清洗,建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 遗传转化 根癌农杆菌 MsNHX1基因
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根癌农杆菌介导的淡紫拟青霉遗传转化体系的建立 被引量：9
15
作者 王曦茁 朴春根 +4 位作者 李虹 汪来发 郭民伟 李永 刘晓莉 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第10期95-102,共8页
基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法,选择植物线虫生防真菌淡紫拟青霉的分生孢子为受体,建立以G418为筛选标记遗传转化体系。通过优化遗传转化条件,达到较高的转化效率:1000～2400个转化子·10-6分生孢子。对转化子进行PCR验证,表明T... 基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法,选择植物线虫生防真菌淡紫拟青霉的分生孢子为受体,建立以G418为筛选标记遗传转化体系。通过优化遗传转化条件,达到较高的转化效率:1000～2400个转化子·10-6分生孢子。对转化子进行PCR验证,表明T-DNA已整合到淡紫拟青霉的基因组中,表型测定发现转化子的遗传表现稳定。农杆菌介导淡紫拟青霉突变体库的建立,为进一步筛选对植物线虫致病性高的突变体、了解淡紫拟青霉的侵染过程和侵染机制提供基础,对培育更优良的植物线虫生防菌株,开发高效生防制剂等具有重要的意义。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 淡紫拟青霉 G-418 遗传转化
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根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化 被引量：22
16
作者 王丹 朱常香 +1 位作者 郑成超 温孚江 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第1期23-27,共5页
利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料 ,对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间和共培养时间等进行了研究。结果表明 :⑴卡那霉素Km浓度以 15～ 2 5mg/l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更合适 ;⑵羧苄青霉素 (Cb)... 利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料 ,对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间和共培养时间等进行了研究。结果表明 :⑴卡那霉素Km浓度以 15～ 2 5mg/l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更合适 ;⑵羧苄青霉素 (Cb)比头孢霉素Cefo更适合用于农杆菌介导的马铃薯叶圆片的遗传转化 ;⑶外植体预培养时间 4d ,共培养时间 3d为最好 ;⑷菌液浓度以OD60 0 =0 .5左右最好。上述条件的优化大大提高了马铃薯遗传转化效率。 展开更多
关键词 马铃薯 根癌农杆菌 转化 抗生素 遗传
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根癌农杆菌介导的水稻遗传转化体系的研究 被引量：9
17
作者 张燕红 赵志强 +3 位作者 吴泽新 袁杰 布哈丽且木 王奉斌 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1457-1462,共6页
【目的】对新疆推广种植的水稻品种进行组织培养,探索适合新疆水稻品种的遗传转化条件,为新疆水稻的遗传改良工作奠定基础。【方法】以新疆3个水稻品种成熟胚诱导的良好胚性愈伤组织为受体,以SiPEBP为目的基因,应用农杆菌介导法对水稻... 【目的】对新疆推广种植的水稻品种进行组织培养,探索适合新疆水稻品种的遗传转化条件,为新疆水稻的遗传改良工作奠定基础。【方法】以新疆3个水稻品种成熟胚诱导的良好胚性愈伤组织为受体,以SiPEBP为目的基因,应用农杆菌介导法对水稻进行遗传转化,同时以抗性愈伤率为依据,对影响转化的愈伤诱导率、农杆菌侵染浓度、时间和共培时间进行优化研究。【结果】在NB培养基中添加2 mg/L的2,4-D的愈伤诱导率高;相比25℃、暗培养,28℃、持续光照培养可使诱导率提高到100%,且缩短了诱导周期;在OD6 0 0值为0.3的农杆菌菌液浓度,侵染愈伤30 min,共培养2 d,同时添加一张无菌滤纸,有利于提高转化效率;通过培养条件的优化,3个水稻品种的抗性愈伤率均达到40%以上。【结论】新疆水稻农杆菌转化的几个主要因素,建立了农杆菌转化体系。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 遗传转化 胚性愈伤组织
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提高根癌农杆菌介导的香石竹遗传转化效率的研究 被引量：11
18
作者 林荣呈 陈龙清 +1 位作者 包满珠 孙振元 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2003年第2期123-128,共6页
以无菌苗叶片为外植体,在根癌农杆菌介导下建立并优化了香石竹5个品种的遗传转化体系。预培养2d可明显提高转化率;香石竹品种间在转化上存在差异;培养基中添加20μmol的AgNO3抑制不定芽的分化。转化植株在含25mg·L-1卡那霉素的生... 以无菌苗叶片为外植体,在根癌农杆菌介导下建立并优化了香石竹5个品种的遗传转化体系。预培养2d可明显提高转化率;香石竹品种间在转化上存在差异;培养基中添加20μmol的AgNO3抑制不定芽的分化。转化植株在含25mg·L-1卡那霉素的生根培养基上培养,生根率为72 1%,GUS检测结果55%的转化植株呈蓝色,PCR扩增表明阳性率为32 2%,Southern杂交证实外源基因已整合到植物基因组中。 展开更多
关键词 香石竹 根癌农杆菌 遗传转化 GUS
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根癌农杆菌介导花生高效遗传转化体系的优化 被引量：13
19
作者 邱金梅 温世杰 +1 位作者 刘海燕 梁炫强 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期208-211,共4页
本文研究表面活性剂(MES,methyl ester sulfonate)、真空渗入法和二次侵染对提高花生转化效率的影响,建立了一种农杆菌介导的花生快速高效遗传转化体系。该体系以带子叶的胚轴为外植体,在OD600为0.7的菌液中,加入150mg/L的MES,40kPa真... 本文研究表面活性剂(MES,methyl ester sulfonate)、真空渗入法和二次侵染对提高花生转化效率的影响,建立了一种农杆菌介导的花生快速高效遗传转化体系。该体系以带子叶的胚轴为外植体,在OD600为0.7的菌液中,加入150mg/L的MES,40kPa真空处理10min,共培养3d后进行二次侵染。采用该体系可显著提高遗传转化率,GUS基因阳性表达率最高,达73.3%。 展开更多
关键词 花生 根癌农杆菌介导 遗传转化
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根癌农杆菌介导的葡萄遗传转化体系的优化 被引量：10
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作者 董志刚 马小河 +5 位作者 王国平 赵旗峰 李晓梅 谭伟 王敏 唐晓萍 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1169-1174,共6页
以梅鹿辄葡萄离体叶片为转化材料,对根癌农杆菌介导的遗传转化过程中涉及的几个主要影响因素：抗菌素羧苄青霉素（Carb）的浓度、乙酰丁香酮（AS）的浓度、农杆菌菌液的浓度及卡那霉素筛选压进行优化。结果表明,抗菌素羧苄青霉素在浓度3... 以梅鹿辄葡萄离体叶片为转化材料,对根癌农杆菌介导的遗传转化过程中涉及的几个主要影响因素：抗菌素羧苄青霉素（Carb）的浓度、乙酰丁香酮（AS）的浓度、农杆菌菌液的浓度及卡那霉素筛选压进行优化。结果表明,抗菌素羧苄青霉素在浓度300mg·L^-1下即可有效去除农杆菌,且对胚性愈伤组织的分化的影响不大;乙酰丁香酮（AS）的最适浓度为50μm·L^-1;农杆菌菌液的浓度控制在OD6000.5～0.7时转化率最高;卡那霉素的筛选浓度控制在100mg·L^-1。利用优化的农杆菌介导法进行转化,对再生苗进行PCR检测,结果显示,外源基因已导入了葡萄基因组中。本研究优化了农杆菌介导的葡萄遗传转化影响因素,并获得了转基因植株。 展开更多
关键词 葡萄 根癌农杆菌 遗传转化 npt-Ⅱ基因
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