目的通过慢病毒转染过表达NFIC基因,研究NFIC在cAMP信号通路促进根尖牙乳头干细胞(SCAPs)分化中的作用。方法采用酶消化法培养SCAPs,将SCAPs分别于普通矿化诱导液(对照组)、cAMP信号通路激动剂(Forskolin组)、转染空病毒载体协同Forskol...目的通过慢病毒转染过表达NFIC基因,研究NFIC在cAMP信号通路促进根尖牙乳头干细胞(SCAPs)分化中的作用。方法采用酶消化法培养SCAPs,将SCAPs分别于普通矿化诱导液(对照组)、cAMP信号通路激动剂(Forskolin组)、转染空病毒载体协同Forskolin(Forskolin+LV-empty组)、转染过表达NFIC慢病毒协同Forskolin(Forskolin+ovNFIC组)的矿化诱导液中培养。矿化诱导10 d后茜素红染色检测各组矿化结节形成情况,QPCR法检测7 d Runt相关基因2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)mRNA的表达。结果 Forskolin作用SCAPs后矿化结节形成增多,相关矿化基因表达增高,而Forskolin+ov-NFIC组矿化结节进一步增多,矿化基因表达进一步上调。结论转录因子NFIC能够促进cAMP信号通路介导的SCAPs分化。展开更多
目的·从人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)中提取外泌体并进行鉴定。方法·使用改良组织块法培养hSCAPs并检测干细胞表面标志物CD105、CD45、CD44、CD31、CD34、CD29的表达情况。体外诱导hSC...目的·从人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)中提取外泌体并进行鉴定。方法·使用改良组织块法培养hSCAPs并检测干细胞表面标志物CD105、CD45、CD44、CD31、CD34、CD29的表达情况。体外诱导hSCAPs向成骨细胞和脂肪细胞分化以检测其多向分化能力。使用梯度离心方法从hSCAPs培养上清中分离出外泌体。通过粒径分析确定外泌体粒径大小,透射电镜观察外泌体形态特征,Western blotting进行外泌体特异性抗原分子CD81、CD9、CD63和TSG101的鉴定。结果·在hSCAPs中检测到间充质干细胞表面抗原标志物CD105、CD44和CD29表达呈强阳性,而造血干细胞标志物CD45、CD31和CD34呈阴性。hSCAPs能够向成骨细胞和脂肪细胞分化。从hSCAPs的上清中分离出来的囊泡样物质,其外形为圆形囊泡并且具有完整的膜结构,粒径为30～100 nm,而且表达外泌体特性蛋白CD81、CD9、CD63和TSG101。结论·成功地从hSCAPs中分离出囊泡样物质,并鉴定其为外泌体。展开更多
文摘目的通过慢病毒转染过表达NFIC基因,研究NFIC在cAMP信号通路促进根尖牙乳头干细胞(SCAPs)分化中的作用。方法采用酶消化法培养SCAPs,将SCAPs分别于普通矿化诱导液(对照组)、cAMP信号通路激动剂(Forskolin组)、转染空病毒载体协同Forskolin(Forskolin+LV-empty组)、转染过表达NFIC慢病毒协同Forskolin(Forskolin+ovNFIC组)的矿化诱导液中培养。矿化诱导10 d后茜素红染色检测各组矿化结节形成情况,QPCR法检测7 d Runt相关基因2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)mRNA的表达。结果 Forskolin作用SCAPs后矿化结节形成增多,相关矿化基因表达增高,而Forskolin+ov-NFIC组矿化结节进一步增多,矿化基因表达进一步上调。结论转录因子NFIC能够促进cAMP信号通路介导的SCAPs分化。
文摘目的·从人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)中提取外泌体并进行鉴定。方法·使用改良组织块法培养hSCAPs并检测干细胞表面标志物CD105、CD45、CD44、CD31、CD34、CD29的表达情况。体外诱导hSCAPs向成骨细胞和脂肪细胞分化以检测其多向分化能力。使用梯度离心方法从hSCAPs培养上清中分离出外泌体。通过粒径分析确定外泌体粒径大小,透射电镜观察外泌体形态特征,Western blotting进行外泌体特异性抗原分子CD81、CD9、CD63和TSG101的鉴定。结果·在hSCAPs中检测到间充质干细胞表面抗原标志物CD105、CD44和CD29表达呈强阳性,而造血干细胞标志物CD45、CD31和CD34呈阴性。hSCAPs能够向成骨细胞和脂肪细胞分化。从hSCAPs的上清中分离出来的囊泡样物质,其外形为圆形囊泡并且具有完整的膜结构,粒径为30～100 nm,而且表达外泌体特性蛋白CD81、CD9、CD63和TSG101。结论·成功地从hSCAPs中分离出囊泡样物质,并鉴定其为外泌体。
