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基于新型核酸适配体-荧光分子检测探针的石斑鱼虹彩病毒病快速诊断 被引量：11
1
作者 李鹏飞 余庆 +6 位作者 李菲 覃仙玲 董德信 陈宪云 牙韩争 柯珂 秦启伟 《广西科学》 CAS 2018年第1期63-67,共5页
【目的】石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是引起华南沿海地区重要海水养殖鱼类石斑鱼(Epinephelus tauvina)发生病毒性鱼病的主要病毒性病原之一,其引起的鱼病具有发病迅速、死亡率高、流行面广等特点,严重威胁华南... 【目的】石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是引起华南沿海地区重要海水养殖鱼类石斑鱼(Epinephelus tauvina)发生病毒性鱼病的主要病毒性病原之一,其引起的鱼病具有发病迅速、死亡率高、流行面广等特点,严重威胁华南地区石斑鱼养殖业的健康可持续发展。着力发展操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的SGIV快速检测技术,对于及早发现、确定病原,进而有的放矢地制定治疗方案来控制病原扩散、降低损失至关重要。【方法】基于核酸适配体(Q2)就SGIV病的快速检测诊断技术进行系统研究,开发出一种新型的核酸适配体-荧光分子检测探针(Aptamer Q2-based fluorescent molecular probe,Q2-AFMP),并对Q2-AFMP检测SGIV感染的特异性、灵敏性和稳定性进行分析。【结果】Q2-AFMP可以特异性检测SGIV感染,且其灵敏性和稳定性均比较高。【结论】本研究中基于核酸适配体构建的新型高特异性荧光分子探针(Q2-AFMP)有望实现对海水养殖中石斑鱼虹彩病毒病的快速诊断、实时监控和有效预防。 展开更多
关键词 石斑鱼虹彩病毒 核酸适配体-荧光分子探针 高特异性和灵敏性 快速诊断
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基于核酸适配体功能化石墨纳米颗粒荧光探针的17β-雌二醇快速检测方法 被引量：5
2
作者 朴云仙 祁小丽 +4 位作者 王湘 康博泉 史玉玺 胡慧 杨悦锁 《吉林大学学报（地球科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1137-1144,共8页
为构建一种能够简单、快速、特异性检测复杂环境水体中雌激素污染的方法,利用石墨纳米颗粒作为荧光淬灭剂、核酸适配体作为识别元素、1-芘丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯作为异型双功能交联剂,构建了一种新型纳米荧光探针;并探究了构建荧光探... 为构建一种能够简单、快速、特异性检测复杂环境水体中雌激素污染的方法,利用石墨纳米颗粒作为荧光淬灭剂、核酸适配体作为识别元素、1-芘丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯作为异型双功能交联剂,构建了一种新型纳米荧光探针;并探究了构建荧光探针时核酸适配体初始投加量和荧光探针投加量对雌二醇检测的影响及最佳实验条件下检测雌二醇的效果和特异性。实验结果表明:核酸适配体能成功修饰在石墨纳米颗粒表面形成的稳定荧光探针;构建荧光探针时核酸适配体的最佳初始投加量为1.0μmol/L;检测雌二醇时,荧光探针的最佳投加量为4μg/mL;最佳实验条件下,相对荧光强度与雌二醇的质量浓度在50~800ng/mL范围内成正比,最低检测限为34.5ng/mL,且该荧光探针能实现对雌二醇的简单、快速、特异性检测。 展开更多
关键词 石墨纳米颗粒 核酸适配体 17Β-雌二醇 探针 快速检测
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核酸适配体荧光探针在生化分析和生物成像中的研究进展 被引量：13
3
作者 黄子珂 刘超 +4 位作者 付强强 李进 邹建梅 谢斯滔 邱丽萍 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期28-39,共12页
核酸适配体是指通过体外筛选技术从核酸文库中筛选出来,能够高特异性、高亲和力识别靶标物的寡核苷酸序列,具有靶标类型广泛、合成简单、相对分子质量小、化学稳定性高、易于进行生物化学修饰等优点。核酸适配体能够通过折叠成特定的二... 核酸适配体是指通过体外筛选技术从核酸文库中筛选出来,能够高特异性、高亲和力识别靶标物的寡核苷酸序列,具有靶标类型广泛、合成简单、相对分子质量小、化学稳定性高、易于进行生物化学修饰等优点。核酸适配体能够通过折叠成特定的二维或三维构型与靶标物特异性结合,加上合适的信号转导机制,为重要靶标物的研究提供理想的分子识别与分子检测探针。荧光检测技术具有高灵敏、高分辨率、易于实现多元分析等优点。将核酸适配体的分子识别特性与荧光优异的光学检测性能相结合,在生命科学研究领域有着广泛的应用空间。本文主要综述了核酸适配体荧光探针常见的分子设计和信号响应方式,及其在细胞成像、亚细胞成像中的应用研究,并对核酸适配体探针目前面临的一些挑战进行了讨论,最后对其未来的发展方向进行了展望。 展开更多
关键词 核酸适配体 荧光探针 生化分析 生物成像
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基于核酸适配体的比率荧光探针定量检测血浆外泌体 被引量：1
4
作者 柴亚茹 高孜博 +1 位作者 丁丽华 吴拥军 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2022年第6期767-773,共7页
目的:建立一种新型比率荧光探针法用于定量检测血浆中外泌体。方法:将Cy5荧光探针标记的CD63核酸适配体固定到链霉亲和素磁珠(MNPs)上,得到MNPs-Apt,加入SYBR GreenⅠ(SGⅠ)核酸染料构建比率荧光免疫磁珠(MNPs-Apt-SGⅠ)。当外泌体存在... 目的:建立一种新型比率荧光探针法用于定量检测血浆中外泌体。方法:将Cy5荧光探针标记的CD63核酸适配体固定到链霉亲和素磁珠(MNPs)上,得到MNPs-Apt,加入SYBR GreenⅠ(SGⅠ)核酸染料构建比率荧光免疫磁珠(MNPs-Apt-SGⅠ)。当外泌体存在时,CD63核酸适配体捕获外泌体而发生结构改变,SGⅠ探针从双链中释放,免疫磁珠上的SGⅠ荧光强度大幅减弱,而Cy5荧光探针的荧光恒定,根据两种荧光探针被激发的荧光信号比值变化[Δ(F_(C)/F_(S))]对外泌体进行定量检测。结果:外泌体浓度在8.0×10^(4)~1.0×10^(7)个/μL范围内,Δ(F_(C)/F_(S))与外泌体浓度呈良好的线性关系。该方法灵敏度高,选择性好,检出限为4.0×10^(4)个/μL。此外,所建立的方法成功地应用于血浆外泌体的检测。结论:构建的比率荧光探针法具有快速、灵敏、准确度高、特异性强等优点,可用于血浆样品外泌体的定量检测。 展开更多
关键词 比率荧光探针 免疫磁珠 外泌体 核酸适配体 定量检测
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核酸适配体荧光分子开关的啶虫脒测定 被引量：1
5
作者 杨丽敏 李明明 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2022年第3期50-53,共4页
针对茶叶中农药残留超标问题,应用“双链-复合物法”设计构建适配体荧光分子开关。该分子开关因啶虫脒的存在与否形成荧光信号的开与关。荧光信号强度与啶虫脒浓度对数值在2.5~500μg/mL范围内呈现良好的线性相关性(R^(2)=0.98),可实现... 针对茶叶中农药残留超标问题,应用“双链-复合物法”设计构建适配体荧光分子开关。该分子开关因啶虫脒的存在与否形成荧光信号的开与关。荧光信号强度与啶虫脒浓度对数值在2.5~500μg/mL范围内呈现良好的线性相关性(R^(2)=0.98),可实现啶虫脒的定量测定。茶叶中啶虫脒检测结果显示,测量值与理论值接近,回收率可达100.95%,进一步验证了该方法的准确性和实际应用可行性。 展开更多
关键词 核酸适配体 荧光分子开关 啶虫脒
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闭锁连接蛋白-1 核酸适配体的筛选与初步应用
6
作者 李玉娟 张瀚文 +2 位作者 刘珊 王佳平 李勇枝 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第8期870-877,共8页
基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了9条APTZO-1与ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-18>APTZO-12>APTZO... 基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了9条APTZO-1与ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-18>APTZO-12>APTZO-17>APTZO-113>APTZO-11>APTZO-15>APTZO-115>APTZO-112>APTZO-14.采用Cy5荧光基团标记APTZO-18(Cy5-APTZO-18),证实了其能对人结直肠腺癌细胞(Caco-2)与人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)的ZO-1进行荧光定位与半定量分析,且与基于ZO-1抗体法的免疫荧光与蛋白印迹实验结果基本相似.本研究首次筛选到了ZO-1的系列核酸适配体,有望为ZO-1的荧光标记与半定量分析提供一种新型的、特异性高的工具分子. 展开更多
关键词 闭锁连接蛋白-1 配体指数富集系统进化 核酸适配体 荧光标记 半定量分析
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利用核酸适配体修饰氧化石墨烯复合物的17β-雌二醇检测机理 被引量：1
7
作者 朴云仙 胡慧 +3 位作者 姚兰 张彧 梁丽娜 刘再冉 《吉林大学学报（地球科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1189-1196,共8页
为了提高复杂环境水体中雌激素污染的检测性能,通过直接吸附法将核酸适配体固定在氧化石墨烯表面,合成出核酸适配体修饰氧化石墨烯复合物,并将其应用于17β-雌二醇水体污染的高灵敏和特异性均相检测。采用紫外可见分光光谱分析核酸适配... 为了提高复杂环境水体中雌激素污染的检测性能,通过直接吸附法将核酸适配体固定在氧化石墨烯表面,合成出核酸适配体修饰氧化石墨烯复合物,并将其应用于17β-雌二醇水体污染的高灵敏和特异性均相检测。采用紫外可见分光光谱分析核酸适配体修饰氧化石墨烯复合物,发现该复合物在250nm处有较宽的肩峰,证明核酸适配体成功固定在氧化石墨烯表面。通过荧光分光光度计分析核酸适配体修饰氧化石墨烯复合物与目标物17β-雌二醇反应前后的荧光强度变化,发现荧光强度由峰值110增加到峰值450,表明该复合物可以成功用于对17β-雌二醇的检测,并且荧光强度与17β-雌二醇的质量浓度在10~100μg/L范围内呈正比,最低检出限为6.2μg/L。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 核酸适配体 17Β-雌二醇 荧光检测 荧光共振能量转移
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利用核酸适配体的竞争置换作用检测溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) 被引量：2
8
作者 林筱钧 彭英林 +5 位作者 鄢庆枇 江兴龙 周建传 汤学敏 范云庭 郑江 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期215-223,共9页
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是水产养殖中致病性较强的一种条件致病菌,为更灵敏、高效地对其进行检测,研发出一种基于核酸适配体竞争置换作用的检测方法。首先设计并制备出磁珠-核酸适配体-荧光报告探针的检测复合物(MAP检测复合物)... 溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是水产养殖中致病性较强的一种条件致病菌,为更灵敏、高效地对其进行检测,研发出一种基于核酸适配体竞争置换作用的检测方法。首先设计并制备出磁珠-核酸适配体-荧光报告探针的检测复合物(MAP检测复合物),然后利用溶藻弧菌与其核酸适配体有较好的亲和特异性,在对样品进行检测时,样品中的溶藻弧菌就会竞争MAP检测复合物中的核酸适配体,从而置换出与该核酸适配体结合的荧光报告探针,再通过检测置换出的报告探针的荧光强度来表征溶藻弧菌的浓度,从而实现对溶藻弧菌的定量检测。结果表明,该方法对溶藻弧菌的检测限可达到1CFU/mL,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、大肠杆菌(Escherichia coli)等水产养殖中的常见致病微生物没有交叉反应,并在1~20、20~100和100~1000 CFU/mL范围内都表现出较好的线性关系。另外还对MAP检测复合物的制备条件进行了优化,较为理想的制备条件为:100nmol/L核酸适配体与100nmol/L荧光报告探针按体积比1︰1混合结合30 min,制备出50 nmol/L的核酸适配体-荧光报告探针复合物,然后该复合物再与25μg/mL的磁珠按体积比1︰1混合结合60 min,制备出相应的MAP检测复合物。利用核酸适配体的竞争置换作用检测溶藻弧菌有较好的灵敏度和特异性,展现了较好的应用前景。 展开更多
关键词 核酸适配体 溶藻弧菌 竞争置换作用 荧光报告探针 磁珠
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基于核酸适配体功能化氧化石墨烯荧光传感器检测氯胺酮及去甲氯胺酮
9
作者 韦丽霞 刘波 +8 位作者 杨小圆 张茜 兰艺凤 张潮 贾娟 张丹 尉志文 贠克明 陈哲 《法医学杂志》 2025年第4期326-339,共14页
目的利用能同时识别氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的核酸适配体,构建核酸适配体羧基化氧化石墨烯(carboxylated graphene oxide,CGO)荧光传感器,实现氯胺酮及去甲氯胺酮的高灵敏、高特异性检测。方法采用氧化石墨烯-指数富集配体系统进化... 目的利用能同时识别氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的核酸适配体,构建核酸适配体羧基化氧化石墨烯(carboxylated graphene oxide,CGO)荧光传感器,实现氯胺酮及去甲氯胺酮的高灵敏、高特异性检测。方法采用氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术(graphene oxide-systematic evolution of ligand by exponential enrichment,GO-SELEX)结合分子对接技术筛选出能同时识别氯胺酮及去甲氯胺酮的特异性核酸适配体。将适配体标记Cy5荧光并通过化学偶联反应与CGO结合,构建核酸适配体功能化CGO荧光传感器。通过优化CGO质量浓度、核酸适配体浓度、反应温度及孵育时间等检测条件,利用加入靶标前后的荧光强度变化比率实现目标物的定量分析。通过检测传感器在空白血液、尿液中荧光强度随孵育时间的变化,评估其与传统物理吸附CGO荧光传感器在生物检材中的稳定性;通过空白血液、尿液加标回收实验,比较其与HPLC-MS/MS的检测性能。结果筛选得到特异性核酸适配体A5,并与CGO化学偶联构建荧光传感器。在优化条件下,该荧光传感器对氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,检出限(limit of de⁃tection,LOD)为0.86 ng/mL;对去甲氯胺酮的线性检测范围为1.0~5.0 ng/mL,LOD为0.70 ng/mL。与物理吸附构建的CGO荧光传感器相比,本传感器在血液、尿液中表现出更高的生物稳定性。空白血液、尿液中氯胺酮及去甲氯胺酮的加标回收率为81.50%~110.03%,表现出与HPLC-MS/MS相当的检测性能。结论核酸适配体筛选方法可为毒(药)物原体及其代谢物的适配体筛选提供新的思路,所构建的核酸适配体功能化CGO荧光传感器可为氯胺酮及去甲氯胺酮的高效、可靠检测提供新方法。 展开更多
关键词 法医学 毒物分析 氯胺酮 去甲氯胺酮 氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术 核酸适配体 化学偶联 荧光传感器
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前列腺癌EpCAM特异性分子探针的构建及其在体MR成像研究
10
作者 仲津漫 丁健科 +2 位作者 刘朵朵 陈欣 杨全新 《放射学实践》 CSCD 北大核心 2023年第2期188-193,共6页
目的:利用金磁纳米微粒偶联核酸适配体构建前列腺癌EpCAM特异性分子探针Ep1-GoldMag,探讨其对EpCAM阳性前列腺癌的亲和性及其在体MR成像能力。方法:将金磁纳米微粒偶联前列腺癌EpCAM核酸适配体制备分子探针Ep1-GoldMag。采用免疫荧光实... 目的:利用金磁纳米微粒偶联核酸适配体构建前列腺癌EpCAM特异性分子探针Ep1-GoldMag,探讨其对EpCAM阳性前列腺癌的亲和性及其在体MR成像能力。方法:将金磁纳米微粒偶联前列腺癌EpCAM核酸适配体制备分子探针Ep1-GoldMag。采用免疫荧光实验检测Ep1-GoldMag靶向EpCAM阳性前列腺癌组织细胞的能力;构建前列腺癌EpCAM荷瘤裸鼠模型,采用免疫组化检测裸鼠肿瘤及其重要脏器组织的EpCAM表达情况。将Ep1-GoldMag注入裸鼠体内,在注射后不同时间点行MRI扫描,比较注射前后各时间点的肿瘤T_(2)WI信号强度,探讨分子探针在体MR成像的可行性。结果:成功制备Ep1-GoldMag,并证实其能特异性识别EpCAM阳性前列腺癌组织细胞。对裸鼠注射Ep1-GoldMag前后行MRI扫描,结果显示注入1 h后,肿瘤T_(2)WI信号明显减低,6 h后T_(2)WI信号持续减低,12 h后T_(2)WI信号略升高,但与注射前相比仍呈低信号,而对照组注射前后T_(2)WI信号强度未见减低,实验组与对照组组间以及实验组内部注射前后各时间点的信号差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究制备的分子探针Ep1-GoldMag具有良好的EpCAM前列腺癌组织细胞特异性,并能在MR上特异性成像。 展开更多
关键词 前列腺癌 核酸适配体 磁共振成像 金磁纳米微粒 分子探针
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