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核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果 被引量：4
1
作者 王立朋 何云燕 +1 位作者 夏云 王慧娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期1583-1586,共4页
目的建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法。方法以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉菌的孢子配制菌液,提取RNA后,采用核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)联合分子信标(molecular beacon,MB... 目的建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法。方法以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉菌的孢子配制菌液,提取RNA后,采用核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)联合分子信标(molecular beacon,MB)技术进行荧光检测,并对该方法进行灵敏度和特异性分析。结果扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与标本中霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-10.7x+81.6,r=0.988)。将含有梯度数量霉菌孢子的标本提取总RNA后进行检测,可建立相应标准曲线。该方法的灵敏度可达到1个孢子;对照菌株(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌)与曲霉菌提取总RNA经扩增后的产物进行电泳分析,发现仅曲霉菌出现特异性条带。结论 NASBA结合分子信标检测曲霉菌具有灵敏度高、特异性强的特点,具有潜在利用价值,有望成为曲霉菌感染的临床诊断方法。 展开更多
关键词 核酸序列依赖扩增 分子信标 曲霉菌 诊断
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核酸序列依赖扩增技术检测隐球菌的方法建立和评价 被引量：4
2
作者 杨蜜 夏云 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期833-837,共5页
目的:建立核酸序列依赖扩增技术(NASBA)检测隐球菌RNA的方法,提高隐球菌感染诊断的准确性。方法:设计一对具有隐球菌属特异性的引物,构建NASBA扩增隐球菌RNA的方法并评价该方法的灵敏度和特异性。按欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌... 目的:建立核酸序列依赖扩增技术(NASBA)检测隐球菌RNA的方法,提高隐球菌感染诊断的准确性。方法:设计一对具有隐球菌属特异性的引物,构建NASBA扩增隐球菌RNA的方法并评价该方法的灵敏度和特异性。按欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组和美国变态反应和感染病研究院真菌病研究组(EORTC/MSG)2008年修订的侵袭性真菌病定义标准收集隐球菌感染的阳性病例和排除隐球菌感染的阴性病例,分别应用隐球菌荚膜多糖抗原检测(胶体金法)、PCR及本研究建立的NASBA方法进行检测。应用配对诊断试验设计、McNemar检验分别对3种方法进行比较以评价其诊断效能。结果:NASBA产物电泳结果显示仅新型隐球菌RNA扩增产物出现了特异性条带,而其他对照菌(烟曲霉、串珠镰刀菌、金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、近平滑念珠菌)均没有出现电泳条带;NASBA结合电泳检测结果表明该方法灵敏度可达10 cfu/mL。NASBA、荚膜多糖抗原胶体金法及PCR灵敏度分别是87.5%(95%CI=66.53%~96.71%)、100%(95%CI=82.83%~100%)、66.67%(95%CI=44.69%~83.57%),特异性分别是94.59%(95%CI=80.47%~99.06%)、81.08%(95%CI=64.29%~91.44%)、78.37%(95%CI=61.34%~81.58%)。结论:应用NASBA检测隐球菌RNA具有快速、准确高、操作简便的优点。并且整个实验过程无须特殊仪器,适合在普通的临床实验室开展,有望成为新的隐球菌感染的常规诊断方法。 展开更多
关键词 核酸序列依赖扩增技术 隐球菌病 荚膜多糖抗原 聚合酶链式反应技术
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依赖于核酸序列恒温扩增技术快速检测副溶血性弧菌方法的建立 被引量：9
3
作者 倪鑫 王志聪 +5 位作者 雷质文 梁成珠 汪东风 姜英辉 王建广 祝素贞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期882-886,共5页
为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法。特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副... 为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法。特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副溶血性弧菌的最小检出量为5.1×102 cfu/mL,高于普通PCR方法,而且与其他种属的菌无任何交叉反应。此外,本研究将副溶血弧菌扩增产物采用通用型核酸扩增物快速检测板进行检测,实现了特异性强的快速副溶血弧菌的检测。该方法对仪器要求低,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖于核酸序列恒温扩增
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核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)概述 被引量：6
4
作者 张英英 谢鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第z1期105-106,共2页
　　随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍... 　　随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐.本文就NASBA方法作一综述.…… 展开更多
关键词 NASBA 核酸序列依赖性扩增 扩增技术 检测探针 分子灯塔 扩增反应 RNA 实时定量 携带污染 敏感性
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基于核酸序列依赖性扩增反应比色法检测沙门氏菌 被引量：2
5
作者 史杨 尹斌成 叶邦策 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第5期-,共6页
本文以食源性致病菌中危害居于前列的沙门氏菌侵袭蛋白A基因作为检测靶标,通过改进传统的核酸序列依赖性扩增反应,开发了针对长链DNA的纳米金比色检测方法。本方法利用限制性内切酶和连接酶将T7启动子和终止子序列连接至靶标序列上,形... 本文以食源性致病菌中危害居于前列的沙门氏菌侵袭蛋白A基因作为检测靶标,通过改进传统的核酸序列依赖性扩增反应,开发了针对长链DNA的纳米金比色检测方法。本方法利用限制性内切酶和连接酶将T7启动子和终止子序列连接至靶标序列上,形成小型环状双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下,转录出大量单链RNA序列进行NASBA反应,反应终产物能够促发纳米金探针发生交联聚集,溶液颜色从红色变成蓝色,从而实现对沙门氏菌的定量分析。 展开更多
关键词 沙门氏菌 invA基因 核酸序列依赖性扩增 纳米金 比色反应
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基于核酸序列依赖性扩增技术的玉米转基因成分Bar的鉴定 被引量：3
6
作者 栾鑫超 张冰琦 +3 位作者 孙笠原 于丽莉 侯殿雅 徐亚维 《种子》 北大核心 2020年第5期88-91,共4页
为了开发高灵敏度、高特异性且易于普及的玉米转抗草丁膦抗性Bialaphos resistance(Bar)基因的鉴定方法,采用核酸序列依赖性扩增(Nucleic Acid Sequence-based Amplification,NASBA)技术,根据转基因成分Bar基因的mRNA序列,设计合成Bar... 为了开发高灵敏度、高特异性且易于普及的玉米转抗草丁膦抗性Bialaphos resistance(Bar)基因的鉴定方法,采用核酸序列依赖性扩增(Nucleic Acid Sequence-based Amplification,NASBA)技术,根据转基因成分Bar基因的mRNA序列,设计合成Bar基因的检测特异引物和探针,通过优化NASBA扩增反应程序和产物检测体系,开发不依赖核酸扩增仪的转基因成分Bar的分子检测试剂盒,短时间内对转基因成分Bar进行高灵敏度筛查。结果表明,检测特异性好且灵敏度高,其灵敏度可达6 fg,样本检测也说明试剂盒具有较高灵敏度和特异性,且适合基层部门和采样现场对Bar转基因成分的早期鉴定。 展开更多
关键词 玉米 转基因 抗草丁膦抗性 核酸序列依赖性扩增
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依赖核酸序列的扩增技术在动物病原微生物检测中的应用 被引量：5
7
作者 马保华 李贺 +2 位作者 吕平 刘计亮 鄢志强 《动物医学进展》 CSCD 2007年第4期110-112,共3页
依赖核酸序列的扩增(NASBA)是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,特别适合扩增RNA。NASBA反应需要在反转录酶、噬菌体T7核糖核酸聚合酶、核糖核酸酶H和2条特别设计的寡核苷酸引物共同协作下完成... 依赖核酸序列的扩增(NASBA)是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,特别适合扩增RNA。NASBA反应需要在反转录酶、噬菌体T7核糖核酸聚合酶、核糖核酸酶H和2条特别设计的寡核苷酸引物共同协作下完成。反应在41℃进行,可在2 h内将模板RNA扩增109倍,比常规PCR法高103倍,不需特殊仪器,是一种快速?简便?特异的扩增技术。文章就NASBA技术的原理、特点及其在动物医学上的应用予以介绍。 展开更多
关键词 依赖核酸序列的扩增 病原微生物 应用
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狂犬病病毒核酸诊断技术研究进展 被引量：2
8
作者 路静 伊正君 付玉荣 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第12期1310-1315,共6页
狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患烈性传染病,发病后死亡率几乎为100%。近年来,我国狂犬病的发病率呈上升趋势,急需一种快速、简便、经济、准确、易于推广的实验室诊断方法。文中从基于PCR方法的核酸诊断技术、依赖核酸序列扩增技术... 狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患烈性传染病,发病后死亡率几乎为100%。近年来,我国狂犬病的发病率呈上升趋势,急需一种快速、简便、经济、准确、易于推广的实验室诊断方法。文中从基于PCR方法的核酸诊断技术、依赖核酸序列扩增技术、环介等温扩增技术、基因芯片技术等方面对目前国内外狂犬病病毒核酸诊断技术作一综述,并分析各种方法的优点和缺点,为狂犬病的临床快速诊断提供参考依据,以更好地预防和控制狂犬病。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核酸诊断 依赖核酸序列扩增技术 环介等温扩增技术 基因芯片技术
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NASBA方法制备HIV/SHIV RNA定量测定标准品及其应用
9
作者 丛喆 刘秀英 +3 位作者 侯丽波 蒋虹 陈志伟 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第8期39-43,共5页
目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段，扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释，测定定量曲线、标准曲线，测定该标准品的稳定性和重复性... 目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段，扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释，测定定量曲线、标准曲线，测定该标准品的稳定性和重复性。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCRKit，该标准品可精确定量到2．033×10 copies／μL。结论外标准品RS．NASBA纯度高，稳定性好，可用于定量测定SIV／SHIV RNA拷贝数。 展开更多
关键词 依赖核酸序列的扩增技术 病毒载量 实时荧光定量RT-PCR
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猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：2
10
作者 杨平东 张明璀 曹立廷 《中国动物检疫》 CAS 2018年第7期78-81,共4页
本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。... 本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。 展开更多
关键词 核酸序列依赖性扩增技术 环介导等温扩增技术 反转录巢式PCR 猪瘟病毒 快速检测
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