期刊文献+
共找到102篇文章
< 1 2 6 >
每页显示 20 50 100
基于重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测食品中骆驼源性成分的方法建立及评价
1
作者 周臣清 张娟 +3 位作者 綦艳 赵玲 黄宝莹 杨纯佳 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第2期75-80,共6页
文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其... 文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其特异性和灵敏度,并用建立的RAA法与GB/T 38164标准方法分别对24份市售骆驼制品进行检测并比对结果。结果表明,本研究建立的RAA法特异性强,乳及乳制品检出限为1.0%,肉及肉制品检出限为0.1%,且2种方法对24份骆驼乳肉及其制品检测结果一致。因此,本研究开发的RAA方法具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,市场应用前景广阔。 展开更多
关键词 重组酶介导等温核酸技术 骆驼源性成分 细胞色素B基因 快速检测
在线阅读 下载PDF
依赖核酸序列的扩增技术在动物病原微生物检测中的应用 被引量:5
2
作者 马保华 李贺 +2 位作者 吕平 刘计亮 鄢志强 《动物医学进展》 CSCD 2007年第4期110-112,共3页
依赖核酸序列的扩增(NASBA)是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,特别适合扩增RNA。NASBA反应需要在反转录酶、噬菌体T7核糖核酸聚合酶、核糖核酸酶H和2条特别设计的寡核苷酸引物共同协作下完成... 依赖核酸序列的扩增(NASBA)是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,特别适合扩增RNA。NASBA反应需要在反转录酶、噬菌体T7核糖核酸聚合酶、核糖核酸酶H和2条特别设计的寡核苷酸引物共同协作下完成。反应在41℃进行,可在2 h内将模板RNA扩增109倍,比常规PCR法高103倍,不需特殊仪器,是一种快速?简便?特异的扩增技术。文章就NASBA技术的原理、特点及其在动物医学上的应用予以介绍。 展开更多
关键词 依赖核酸序列 病原微生物 应用
在线阅读 下载PDF
环介导等温扩增技术在真菌检测中的应用研究进展
3
作者 段吉燕 舒平 +1 位作者 郭启新 徐幸 《食品安全质量检测学报》 2025年第4期284-290,共7页
真菌是日常生活中较为常见的一种微生物,与我们的生活息息相关、有利有弊。其有害影响体现在多个方面,例如有些真菌会导致农作物病害而减产,误食毒蕈会引起食物中毒,威胁人们的生命安全,此外致病真菌还会引起真菌感染等疾病危害人们的... 真菌是日常生活中较为常见的一种微生物,与我们的生活息息相关、有利有弊。其有害影响体现在多个方面,例如有些真菌会导致农作物病害而减产,误食毒蕈会引起食物中毒,威胁人们的生命安全,此外致病真菌还会引起真菌感染等疾病危害人们的身体健康,因此能快速、准确地检测出病原真菌和识别出毒蕈是非常重要的。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近几年广泛使用的一种核酸扩增技术,该技术使用DNA聚合酶和特异性引物,在恒温条件下,短时间内高效率扩增核酸,相较于传统的分子生物学方法,该方法对仪器要求不高,具有快速、灵敏、简单等特点。目前LAMP已广泛应用于细菌、真菌和病毒等微生物的检测,本文对LAMP在真菌检测方面的应用进行总结,以期为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 环介导等温技术 真菌 核酸
在线阅读 下载PDF
沙门氏菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立 被引量:7
4
作者 雷质文 姜英辉 +5 位作者 王妍婷 赵丽青 张健 倪鑫 王建广 梁成珠 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第5期248-252,共5页
采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测体系,对沙门氏菌进行检测。采用沙门氏菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测沙门氏菌的NAS-BA检测法,并进行了特异... 采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测体系,对沙门氏菌进行检测。采用沙门氏菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测沙门氏菌的NAS-BA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为7.1×102cfu/ml,高于普通PCR方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 检测 依赖核酸序列恒温
在线阅读 下载PDF
溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立 被引量:2
5
作者 秦胜利 王建广 《青岛科技大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2012年第1期38-41,46,共5页
采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)检测体系,对溶藻弧菌进行检测。采用溶藻弧菌的hsp60基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测溶藻弧菌的NASBA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检... 采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)检测体系,对溶藻弧菌进行检测。采用溶藻弧菌的hsp60基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测溶藻弧菌的NASBA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为6.9×102 cfu.mL-1,高于普通PCR方法。溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法具有较高灵敏度和和良好特异性,并且对仪器要求更低,用普通恒温设备即可进行反应,具有广阔的推广前景。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 检测 依赖核酸序列恒温
在线阅读 下载PDF
核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用 被引量:1
6
作者 肖航 王小燕 +3 位作者 邓兆佳 廖文静 谢文菁 彭汉勇 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1-17,共17页
病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可... 病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可以在恒定温度下实现核酸扩增,可适应不同的应用场景.本文综合评述了等温扩增技术在病毒检测领域的最新进展,从病毒样本采集、核酸提取、等温扩增检测等几个方面分别进行阐述,探讨了酶辅助等温扩增技术、无酶等温扩增技术以及与多体系串联的级联扩增技术的原理、关键参数及其病毒检测应用,并对比了市场上相关试剂盒的特点.此外,讨论了当前核酸等温扩增技术在病原体检测应用中面临的一些难题,如提取效率、稳定性和成本等,提出了未来的发展方向,为进一步改善现场诊断效率提供了新的思路. 展开更多
关键词 等温技术 CRISPR检测 核酸 环境病毒 病毒提取
在线阅读 下载PDF
等温条件下序列特异性核酸扩增技术:NASBA 被引量:1
7
作者 刘敬忠 于力 孙燕 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1994年第2期27-29,共3页
介绍了一种能在等温条件下进行序列特异性核酸体外扩增的技术──NASBA(NucleicAcidSpecific-BasedAmplification)。该技术同时使用AMV反转录酶、T7RNA聚合酶及RNaseH,在... 介绍了一种能在等温条件下进行序列特异性核酸体外扩增的技术──NASBA(NucleicAcidSpecific-BasedAmplification)。该技术同时使用AMV反转录酶、T7RNA聚合酶及RNaseH,在同一个恒定温度下协同作用,使特异的核酸序列得以扩增至106~108倍。起始的模板可以是RNA,也可以是DNA,尤其适用于微量mRNA的特异性扩增。本文研究了各种因素对NASBA扩增效率的影响,找到了最适反应条件。并成功地从人脐带血总RNA中扩增了人T细胞受体γ链mRNA。 展开更多
关键词 核酸体外 序列 等温条件
在线阅读 下载PDF
纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增产物诊断侵袭性曲霉病 被引量:1
8
作者 吴文耀 华若伊 +5 位作者 杜丽 蒲清泉 严佳 杨蜜 何云燕 夏云 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第8期593-596,共4页
目的建立纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)产物,用于快速诊断侵袭性曲霉病(IA)。方法采用NASBA扩增曲霉菌属特异性18S rRNA保守序列,扩增产物与5'端经巯基化俢饰的特异... 目的建立纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)产物,用于快速诊断侵袭性曲霉病(IA)。方法采用NASBA扩增曲霉菌属特异性18S rRNA保守序列,扩增产物与5'端经巯基化俢饰的特异性纳米金探针进行液相杂交,用该法检测106例临床血液标本(14例确诊,32例拟诊,60例未感染IA),并与GM试验结果进行比较以评价该方法的准确性。结果纳米金探针只与曲霉菌属菌株的NASBA产物出现阳性杂交反应,而其他非曲霉菌均为阴性。NASBA-纳米金液相杂交法检测106例临床标本的敏感性和特异性分别为82.61%(38/46)、81.67%(49/60),ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.890。GM试验检测的敏感性和特异性分别为56.52%(26/46)和83.33%(50/60),AUCROC为0.723。结论 NASBA-纳米金液相杂交技术检测曲霉菌感染具有敏感性高、特异性强、操作简单的特点,适合实验室常规开展。 展开更多
关键词 核酸序列依赖 侵袭性曲霉病 曲霉菌 纳米金探针
在线阅读 下载PDF
解旋酶依赖性扩增技术研究进展 被引量:2
9
作者 刘迪 滕新栋 闫吉辉 《口岸卫生控制》 2022年第1期44-47,共4页
解旋酶依赖性扩增技术(helicase-dependent amplification,HDA)作为一种灵敏度高、特异性强、快速高效、便捷精准的核酸等温扩增技术,在病原体检测研究中得到广泛应用,有望应用于国境口岸现场病原体快速检测。本文着重介绍HDA技术的原... 解旋酶依赖性扩增技术(helicase-dependent amplification,HDA)作为一种灵敏度高、特异性强、快速高效、便捷精准的核酸等温扩增技术,在病原体检测研究中得到广泛应用,有望应用于国境口岸现场病原体快速检测。本文着重介绍HDA技术的原理、方法和优势,并探讨其在国境口岸重点关注病原体检测中的研究进展。 展开更多
关键词 解旋酶依赖性技术 等温 国境口岸
在线阅读 下载PDF
实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染 被引量:22
10
作者 顾伟鸣 杨阳 +1 位作者 吴磊 莫小辉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期271-272,共2页
目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣... 目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。结果结合细胞培养和PCR的实验结果作为"扩大金标准",得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=3.27,P>0.05)。结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 实时荧光核酸恒温检测技术 尿样检测
在线阅读 下载PDF
番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法 被引量:3
11
作者 封立平 尼秀媚 +3 位作者 魏晓棠 邵秀玲 吴兴海 厉艳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第4期1207-1212,共6页
目的建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16SrRNA特异性基因进行扩增,采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域,62℃恒温1h完成扩增。结果设计的引物与对照菌皱... 目的建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16SrRNA特异性基因进行扩增,采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域,62℃恒温1h完成扩增。结果设计的引物与对照菌皱纹假单胞菌、茄假单胞菌、丁香假单胞菌番茄致病变种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。这些对照菌在茄科蔬菜上易引起类似症状。结论 LAMP检测程序便捷,所需设备简单,其结果可以通过肉眼观察来判断,比常规PCR灵敏且能更早得到反应结果,因此该技术具有更大的优势。 展开更多
关键词 番茄溃疡病菌 环介导等温核酸技术 16SrRNA
在线阅读 下载PDF
核酸等温扩增技术检测动物源食品研究进展 被引量:4
12
作者 肖付刚 张尧轩 +2 位作者 谷蒙林 王德国 张国治 《粮食与油脂》 北大核心 2023年第12期22-28,共7页
综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点... 综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点和在动物源食品检测中的应用,并对几种主要核酸等温扩增检测技术的特点及应用进行比较。 展开更多
关键词 核酸等温技术 检测 动物源食品 梯型熔解温度等温技术
在线阅读 下载PDF
核酸恒温扩增技术的原理及其应用 被引量:12
13
作者 陈云芳 詹国辉 高渊 《西南林学院学报》 2010年第B06期30-32,40,共4页
介绍基于核酸恒温扩增技术原理的赖解旋酶恒温基因扩增技术、实时荧光核酸恒温扩增检测技术、环介导等温扩增技术和切口酶核酸恒温扩增技术的原理和特点;以及核酸恒温扩增技术在疾病诊断、流行病学监测、食品安全检测、动物病原物检测... 介绍基于核酸恒温扩增技术原理的赖解旋酶恒温基因扩增技术、实时荧光核酸恒温扩增检测技术、环介导等温扩增技术和切口酶核酸恒温扩增技术的原理和特点;以及核酸恒温扩增技术在疾病诊断、流行病学监测、食品安全检测、动物病原物检测等领域的应用情况,并对该技术在植物检疫领域的应用前景作出展望。 展开更多
关键词 核酸恒温技术 动植物检疫 原理
在线阅读 下载PDF
可视化核酸恒温扩增技术在日本血吸虫病筛查和诊断中的应用 被引量:1
14
作者 宋旭日 冯惊涛 +1 位作者 邢微微 喻鑫玲 《动物医学进展》 北大核心 2015年第12期52-55,共4页
日本血吸虫病的筛查和诊断在血吸虫病的防治中处于重要的地位,而核酸诊断是其潜在的优良检测方法。拟建立一套完整的"可视化日本血吸虫核酸恒温扩增检测试剂",用于基层血防单位对日本血吸虫病的筛查和诊断等工作。用腹壁拔毛... 日本血吸虫病的筛查和诊断在血吸虫病的防治中处于重要的地位,而核酸诊断是其潜在的优良检测方法。拟建立一套完整的"可视化日本血吸虫核酸恒温扩增检测试剂",用于基层血防单位对日本血吸虫病的筛查和诊断等工作。用腹壁拔毛贴片法给新西兰大白兔感染日本血吸虫,用多种核酸提取方法抽提其血清或血浆中的基因组DNA,并用"可视化日本血吸虫核酸恒温扩增检测试剂"对其进行检测。结果表明,该研究所设计的检测方法可以方便地检测到100条日本血吸虫尾蚴感染的新西兰大白兔,说明可视化核酸恒温扩增技术在日本血吸虫病的筛查和诊断中具有潜在的应用可能性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 核酸提取 核酸恒温技术 新西兰大白兔
在线阅读 下载PDF
核酸扩增技术在微生物检验上的评价 被引量:1
15
作者 刘恭植 潘志超 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期261-262,共2页
关键词 微生物检验 核酸技术 限制性 可能性
在线阅读 下载PDF
应用核酸扩增技术检测孕妇TORCH感染的研究分析 被引量:3
16
作者 刘广金 周永安 晋淑媛 《临床医药实践》 2002年第7期499-500,共2页
目的 :比较聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验方法在临床的诊断价值。方法 :应用聚合酶链式反应 (PCR)方法及酶联免疫吸附试验 (EL ISA)法 ,对孕妇 5 6人次进行了巨细胞病毒 (CMV)、风疹病毒 (RUV)、弓形体 (TOX)及单纯疱疹病毒 (HSV—... 目的 :比较聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验方法在临床的诊断价值。方法 :应用聚合酶链式反应 (PCR)方法及酶联免疫吸附试验 (EL ISA)法 ,对孕妇 5 6人次进行了巨细胞病毒 (CMV)、风疹病毒 (RUV)、弓形体 (TOX)及单纯疱疹病毒 (HSV— )血清 DNA和血清 Ig M的检测。结果 :PCR法 (CMV、RUV、TOX、HSV— )阳性检出率分别为 8.9%、7.1%、3.5 %、5 .5 % ;EL ISA方法 (CMV、RUV、TOX、HSV— )阳性检出率分别为 5 .5 %、3.5 %、1.8%、3.5 %。结论 :两种检测方法的阳性检出率 P<0 .0 展开更多
关键词 核酸技术 检测 孕妇 TORCH感染 巨细胞病毒 风疹病毒 弓形体 单纯疱疹病毒
在线阅读 下载PDF
SAT技术检测解脲脲原体和沙眼衣原体核酸在泌尿生殖道感染中的应用价值分析
17
作者 黄瑞清 邹迪 叶沛仪 《中国实用医药》 2025年第6期94-97,共4页
目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT技术)检测解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)核酸在泌尿生殖道感染患者中的应用价值,从而为疾病诊治提供可靠依据。方法 选择123例泌尿生殖道感染患者阴道分泌物拭子,通过SAT技术检测UU和CT。... 目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT技术)检测解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)核酸在泌尿生殖道感染患者中的应用价值,从而为疾病诊治提供可靠依据。方法 选择123例泌尿生殖道感染患者阴道分泌物拭子,通过SAT技术检测UU和CT。分析患者CT、UU阳性检出情况,对比不同性别、不同年龄段患者CT、UU阳性检出情况。结果 123例患者的UU阳性检出率为47.97%(59/123),CT阳性检出率为8.13%(10/123),CT+UU阳性检出率为4.88%(6/123)。52例男性患者中UU阳性检出率为30.77%,CT阳性检出率为5.77%,CT+UU阳性检出率为1.92%;71例女性患者中UU阳性检出率为60.56%,CT阳性检出率为9.86%,CT+UU阳性检出率为7.04%;女性患者的UU阳性检出率较男性高(P<0.05)。≤20岁患者的UU、CT阳性检出率最高,分别为72.73%、13.64%,其次为41~50岁患者,UU、CT阳性检出率分别为51.72%、10.34%,≥51岁患者的UU、CT阳性检出率最低,分别为28.57%、0。结论 泌尿生殖道感染患者UU阳性检出率较CT高,且CT感染往往伴有UU,建议相关可疑人员进行生物学检测。SAT技术取材方便,敏感度和特异度高,便于临床筛查,值得临床广泛应用。 展开更多
关键词 实时荧光核酸恒温检测技术 解脲脲原体 沙眼衣原体 核糖核酸 泌尿生殖道
在线阅读 下载PDF
核酸扩增技术在动物源性食品掺假中的研究进展 被引量:5
18
作者 孟晓帅 胡和智 +2 位作者 闫婷婷 李慧 李姗姗 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期298-305,共8页
核酸扩增技术是一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术,目前已广泛应用于传染病检测、生物勘测、食品安全检测、临床诊断和公共卫生监测等研究领域。其中,食品安全领域的问题日渐成为人们关注的焦点,尤其是动物源性食品掺假的... 核酸扩增技术是一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术,目前已广泛应用于传染病检测、生物勘测、食品安全检测、临床诊断和公共卫生监测等研究领域。其中,食品安全领域的问题日渐成为人们关注的焦点,尤其是动物源性食品掺假的现象屡禁不止。在过去的科学研究中,动物源性食品掺假的核酸扩增技术发展迅速,取得了很大进展。该文就核酸扩增技术中的凝胶电泳PCR、实时荧光定量PCR、数字液滴PCR、环介导等温扩增、交叉引物扩增、滚环扩增、重组酶聚合酶扩增等技术的原理及在动物源性食品掺假检测中的应用进行综述。讨论了各类核酸扩增技术的关键优势和局限性,简要介绍了现有的挑战和进一步的研究进展,旨在为动物源性食品掺假核酸扩增技术的发展指明方向。 展开更多
关键词 核酸技术 动物源性食品 掺假鉴别 聚合酶链式反应 恒温技术
在线阅读 下载PDF
基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术 被引量:3
19
作者 麻文建 郑磊 +2 位作者 张静 刘洋 朱天辉 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期25-33,共9页
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片... 为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序。根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2。利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875bp的条带,灵敏度达到30fg/μL,是常规PCR的1000倍。验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌。 展开更多
关键词 栗疫菌 随机多态性DNA技术 序列特异区域 巢式PCR 分子检测
在线阅读 下载PDF
用重组酶介导等温核酸扩增技术检测烟曲霉 被引量:5
20
作者 廖新辉 易浔飞 +1 位作者 崔智慧 兰小鹏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第3期214-218,共5页
目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术(RPA)方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化... 目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术(RPA)方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化条件为:引物长度:18-30 bp;产物长度:200-700 bp;扩增温度:37-42℃,最低在27℃也可实现扩增;扩增时间:15-40 min,15 min即可达到凝胶电泳可检测的产物量;只需简单的恒温加热设备。RPA和Taq PCR可检测到的最低DNA浓度均为100 ng/m L。RPA仅对烟曲霉有特异性扩增,对黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、中国红酵母均无交叉扩增反应。结论建立的针对烟曲霉ITS1-ITS2靶DNA序列的RPA检测方法,可以快速、特异、灵敏地鉴定和检测烟曲霉。 展开更多
关键词 重组酶介导等温核酸技术 转录间隔区1-2 烟曲霉
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 6 下一页 到第
使用帮助 返回顶部