介绍一种不加盖玻片的核酸原位杂交改良法

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作者 吴惠茜 邵建永 林汉良 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 1993年第2期156-158,共3页

核酸原位杂交程序中探针和靶基因的加热变性和杂交为整个程序中最重要的环节,目前国内外最常用的方法是在切片上滴加DNA探针溶液后用盖玻片复盖组织,并加胶泥或其他封固剂封闭玻片四周,变性杂交后需拆除盖玻片,这一操作过程易损坏组织... 核酸原位杂交程序中探针和靶基因的加热变性和杂交为整个程序中最重要的环节,目前国内外最常用的方法是在切片上滴加DNA探针溶液后用盖玻片复盖组织,并加胶泥或其他封固剂封闭玻片四周,变性杂交后需拆除盖玻片,这一操作过程易损坏组织切片或出现干片、脱片。作者针对上述情况,对传统的核酸原位杂交方法中的部分程序加以改良,采用不加盖玻片直接在蒸汽中变性方法,经多次实验证明此方法稳定、可靠、简便,结果满意。 展开更多

关键词 盖玻片 核酸原位杂交 改良法 脱片 组织切片 靶基因 DNA探针 热变性 操作过程 封闭

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肾综合征出血热病毒R22株感染人血管内皮细胞的核酸原位杂交研究

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作者 孟冀昌 古春雷 +2 位作者 姚磊 朱德钟 盛鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期505-508,共4页

用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株Ｍ片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针，对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交。杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂... 用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株Ｍ片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针，对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交。杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂交信号，而正常细胞和ＨＦＲＳ病毒感染细胞经ＲＮＡ酶处理组不出现杂交信号。结果表明ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ主要定位于血管内皮细胞的细胞浆中。 展开更多

关键词 核酸原位杂交 出血热病毒 内皮 肾综合征出血热

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鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备及其原位杂交的应用 被引量：3

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作者 王凤龙 葛金英 +1 位作者 郝先谱 刘月焕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期434-436,共3页

用限制酶HindⅢ和Ecorl双切鸡包涵体肝炎六邻体蛋白基因片段重组质粒 ,得到大小 6 36bp的基因片段 ,用地高辛标记制备DNA探针 ,其灵敏度为 0 .1～ 0 .3ng/ μL。用该探针对感染鸡包涵体肝炎病毒的雏鸡肝组织进行原位杂交 ,结果表明病毒... 用限制酶HindⅢ和Ecorl双切鸡包涵体肝炎六邻体蛋白基因片段重组质粒 ,得到大小 6 36bp的基因片段 ,用地高辛标记制备DNA探针 ,其灵敏度为 0 .1～ 0 .3ng/ μL。用该探针对感染鸡包涵体肝炎病毒的雏鸡肝组织进行原位杂交 ,结果表明病毒经口感染后 12h肝细胞内出现病毒的复制 ,3～ 7d时病毒复制明显 ,9～ 16d病毒复制减弱。原位杂交表明鸡包涵体肝炎病毒主要定位于核内 ,同时也可进入胞浆中。地高辛标记鸡包涵体肝炎病毒DNA探针对检测该病毒DNA的灵敏度高 ,特异性强 ,操作方便 ,该探针可用于本病的分子病理学研究和特异性诊断。 展开更多

关键词 鸡 包涵体肝炎 DNA探针 核酸原位杂交

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多个生物素标记的SARS冠状病毒cDNA探针在原位杂交中的应用

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作者 杨建法 潘登 +3 位作者 王松山 李文淑 周光德 赵景民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期371-372,共2页

关键词 核酸原位杂交 SARS CDNA

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广谱人乳头瘤病毒DNA探针对尖锐湿疣和假性湿疣的原位杂交检测

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作者 林汉良 吴惠茜 《中山医科大学学报》 CSCD 1994年第3期186-188,共3页

对用肉眼形态、组织学特征和人乳头瘤病毒核壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）来检测诊断为尖锐湿疣和假性湿疣的两组病例，用广谱人乳头瘤病毒ＤＮＡ探针，作核酸原位杂交检测，结果：尖锐湿疣组ＨＰＶ－ＤＮＡ检出率为３０／３３（９０．９％）... 对用肉眼形态、组织学特征和人乳头瘤病毒核壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）来检测诊断为尖锐湿疣和假性湿疣的两组病例，用广谱人乳头瘤病毒ＤＮＡ探针，作核酸原位杂交检测，结果：尖锐湿疣组ＨＰＶ－ＤＮＡ检出率为３０／３３（９０．９％），而假性湿疣组检出率仅为１／３８（２．６％）（Ｐ＜０．０００１），提示假性湿疣并非为ＨＰＶ感染引起，或ＨＰＶ感染的可能性很小。作者还对应用广谱人乳头瘤病毒ＤＮＡ原位杂交作为对疑为ＨＰＶ感染病变作病理学初筛检测的意义作了讨论。 展开更多

关键词 尖锐湿疣 假性湿疣 核酸原位杂交

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对虾WSSV人工感染螯虾及其检测 被引量：15

6

作者 莫照兰 雷质文 +2 位作者 杨冰 黄倢 张培军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期43-46,共4页

用对虾白斑综合症病毒(WSSV)人工感染淡水克氏原螯虾(Procambarusclarkii) ,感染组螯虾3～6d内全部死亡。核酸探针点杂交两次检测感染螯虾的鳃、胃、血淋巴 ,阳性检出率分别为92% (92% ) ,89 % (86 % ) ,81 % (75 % ) ,对照为11 % (3% )... 用对虾白斑综合症病毒(WSSV)人工感染淡水克氏原螯虾(Procambarusclarkii) ,感染组螯虾3～6d内全部死亡。核酸探针点杂交两次检测感染螯虾的鳃、胃、血淋巴 ,阳性检出率分别为92% (92% ) ,89 % (86 % ) ,81 % (75 % ) ,对照为11 % (3% ) ,5 % (5 % ) ,0(0) ;光镜下可观察到感染螯虾的胃、鳃组织的靶细胞核肿大、嗜酸性着染 ,电镜下病变组织细胞核可见形态大小与WSSV一致的病毒粒子 ;病毒核酸原位杂交两次检测感染螯虾的胃、鳃 ,阳性检出率均为100 % ,对照阳性检出率均为0。结果表明 :对虾WSSV可感染淡水克氏原螯虾 。 展开更多

关键词 WSSV 人工感染 克氏原螯虾 核酸探针点杂交 核酸原位杂交 检测 对虾病毒

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奶牛热应激与HSP70的表达 被引量：6

7

作者 郭同军 王加启 +3 位作者 王建平 卜登攀 魏宏阳 周凌云 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第9期83-86,共4页

HSP70是应激条件下所诱导出的最为显著的热休克蛋白之一,是应激综合反应的代表。作者简要地介绍了HSP70的分类、结构、生理功能,及在热应激条件下奶牛HSP70的转录、翻译及检测方法。

关键词 HSP70 免疫组织化学法 蛋白质斑迹法 酶联免疫吸附试验 核酸原位杂交技术

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端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白质在正常肺组织和正常人外周血淋巴细胞表达的研究 被引量：1

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作者 王孝养 张珍祥 +4 位作者 徐永健 熊维宁 方慧娟 丘小芬 李西融 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期112-115,共4页

用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10～ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数... 用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10～ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数肺泡上皮细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达。正常人外周血淋巴细胞中 TERT原位杂交阳性表达细胞数为 ( 17.2 6± 8.5 7) % ,免疫组织化学阳性细胞表达数为 ( 2 8.10± 16.78) %。提示 :1正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数肺泡上皮细胞和外周血淋巴细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达 ;2正常肺组织中上述细胞TERT m RNA和蛋白质的表达在生理状况下对于保证支气管上皮和肺泡上皮细胞再生 ,维持上皮组织的完整性可能起着重要的作用 ,同时有利于肺泡巨噬细胞发挥其肺内“卫士”功能 ;3淋巴细胞 展开更多

关键词 端粒酶 肺癌 核酸原位杂交 免疫染色 逆转录酶 mRNA

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脑胶质瘤中PDGF-B、PDGFR-β、PTEN和p16基因的表达 被引量：1

9

作者 何杰 甘怀勇 +2 位作者 汪万英 龚晓萌 姚敏 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期182-184,共3页

目的　探讨PDGF B、PDGFR -β与抑癌基因PTEN、p16在脑胶质瘤发生和进展中的作用。方法　应用核酸原位杂交方法检测125例胶质瘤切片中PDGFK B、PDGFR- β、PTEN和p16mRNA表达情况。结果　胶质瘤PDGF- B、PDGFR -β阳性表达率分别为47. ... 目的　探讨PDGF B、PDGFR -β与抑癌基因PTEN、p16在脑胶质瘤发生和进展中的作用。方法　应用核酸原位杂交方法检测125例胶质瘤切片中PDGFK B、PDGFR- β、PTEN和p16mRNA表达情况。结果　胶质瘤PDGF- B、PDGFR -β阳性表达率分别为47. 20%和49 .60%,并随着肿瘤级别升高而表达增加(P<0 05 )。PTEN、p16mRNA阳性表达率34. 96%和45. 53%。高级别胶质瘤中PTEN、p16mRNA表达率分别为27. 72%和38. 61%,低于低级别胶质瘤(68 .18%和77 .27%,P<0 .01)。结论　PDGF- B、PDGFR-βmRNA高表达和PTEN、p16mRNA失表达与胶质瘤进展有关。 展开更多

关键词 脑肿瘤 胶质瘤 血小板源生长因子 基因 PTEN 基因 p16 核酸原位杂交

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松质骨骨折愈合方式的实验研究 被引量：1

10

作者 陈永强 史定伟 +2 位作者 裘世静 戴克戎 朱乃硕 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第2期103-106,共4页

目的研究兔股骨髁间截骨后松质骨骨折愈合方式。方法采用成年新西兰兔30只。在兔股骨髁间作完全性截骨后，分别采用皮质骨和松质骨螺钉内固定。术后3d，1、2、3和6周截取标本进行光镜观察和核酸原位杂交分析。结果采用皮质骨螺钉固定时... 目的研究兔股骨髁间截骨后松质骨骨折愈合方式。方法采用成年新西兰兔30只。在兔股骨髁间作完全性截骨后，分别采用皮质骨和松质骨螺钉内固定。术后3d，1、2、3和6周截取标本进行光镜观察和核酸原位杂交分析。结果采用皮质骨螺钉固定时，其愈合方式主要通过编织骨修复骨小梁。采用松质骨螺钉固定，其愈合方式主要通过板层骨重建骨小梁。结论兔股骨髁间截骨后，松质骨骨折愈合存在着直接骨形成和间接骨形成两种愈合方式。 展开更多

关键词 松质骨骨折 骨折愈合 光镜观察 核酸原位杂交

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DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PDGF　mRNA表达的影响

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作者 张燕 李丰 +2 位作者 袁永辉 李文英 车东媛 《同济医科大学学报》 CSCD 北大核心 1996年第6期421-424,F003,共4页

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液... 利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度（ＯＤ）值。结果：ＨＥＣＣＭ组ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．４０、１．４９倍（Ｐ＜０．０１），分别是Ｎ组的１．８倍、１．７倍（Ｐ＜０．０１），ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组ＰＤＧＦ－Ａ、－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别为ＨＥＣＣＭ的０．７３倍、０．６５倍（Ｐ＜０．０１），与ＮＥＣＣＭ组相比，均无显著差异。提示ＤＤＰＨ在ＰＤＧＦ基因转录水平抑制ＨＥＣＣＭ诱导的ＰＡＳＭＣ的增殖。 展开更多

关键词 缺氧 平滑肌细胞 核酸原位杂交 生长因子

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泡球蚴感染过程中宿主CD_4^+细胞凋亡和凋亡相关基因转录水平的研究 被引量：19

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作者 李富荣 石佑恩 +2 位作者 史大中 DA Vuitton PS Craig 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期59-62,65,共5页

目的　为了探讨泡球蚴感染宿主CD+ 4 淋巴细胞缺失的机制 ,以及泡球蚴感染与宿主CD+ 4 淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因转录水平的相关性。方法　利用尼龙柱和补体法从泡球蚴感染 12周 ,2 5周和正常对照组BALB/c小鼠脾脏分离出纯CD+ 4 ,CD+ ... 目的　为了探讨泡球蚴感染宿主CD+ 4 淋巴细胞缺失的机制 ,以及泡球蚴感染与宿主CD+ 4 淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因转录水平的相关性。方法　利用尼龙柱和补体法从泡球蚴感染 12周 ,2 5周和正常对照组BALB/c小鼠脾脏分离出纯CD+ 4 ,CD+ 8细胞 ,在体外分别经EmAg ,anti-CD3 ,IL - 2 ,TNFα ,PWM刺激培养 16h ;Tunel和PI双染后 ,FCM分析凋亡细胞数 ;并用C -myc ,TGF - β ,bcl- 2cDNA探针检测感染 2 5周EmAg诱导CD+ 4 细胞的凋亡相关基因转录水平。结果　FCM分析 ,感染 12周组CD+ 4 ,CD+ 8细胞凋亡数同正常对照组无明显差别 (P >0 0 5 ) ,感染 2 5周组CD+ 4 细胞凋亡数较正常对照组显著增高 (P <0 0 1) ,也显著性高于同组CD+ 8细胞 (P <0 0 1)。CD+ 4 细胞内C -myc,TGF - βmRNA水平较正常对照组显著升高 (P <0 0 5 ) ,而bcl- 2mRNA水平则减弱 (P <0 0 5 )。结论　泡球蚴寄生宿主后期 ,可诱导宿主成熟T细胞中CD+ 4 细胞发生凋亡 ,使宿主处于免疫抑制状态。凋亡的形成与凋亡信号增加 ,抑制信号减弱所引起。 展开更多

关键词 泡球蚴感染 宿主 CD4^+ 细胞凋亡 凋亡相关基因 转录 T细胞亚群 核酸原位杂交

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免疫源性的ACTH受体及5-HT1A受体表达研究

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作者 孟云霄 纪祥瑞 +1 位作者 谢琰臣 魏志敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期492-496,共5页

目的:通过检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况,寻求神经免疫内分泌网络之间功能双向调节的形态学依据。方法:应用免疫组织化学及核酸分子原位杂交方法检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人100例淋巴结、脾脏及肠道淋... 目的:通过检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况,寻求神经免疫内分泌网络之间功能双向调节的形态学依据。方法:应用免疫组织化学及核酸分子原位杂交方法检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人100例淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中的表达。结果:免疫组织化学显示ACTHR、5HT1AR在各种淋巴组织中表达的阳性率为82.5%和86.3%,与原位杂交(阳性率为70%和75%)之间无统计学差异(χ2=1.907、0.570,均P>0.05)。结论:人的免疫活性细胞不但可以表达ACTHR、5HT1AR蛋白,还可以合成其mRNA,ACTH、5HT都可以通过免疫细胞膜上的ACTHR、5HT1AR发挥对免疫系统的调节作用。 展开更多

关键词 淋巴组织 神经免疫内分泌 促肾上腺皮质激素受体 5.羟色胺受体1A亚型 免疫组织化学 核酸分子原位杂交

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C-myc基因过度表达与妊娠滋养细胞疾病预后关系的探讨

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作者 漆秀梅 余志英 卢运萍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1997年第4期306-308,共3页

采用核酸分子杂交技术，以地高辛dig－11－dUTP标记的C－myc基因探针与54例妊娠滋养细胞疾病（GTD）石蜡包埋组织（其中葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌各18例）进行原位杂交，定性、半定量地测定了C－myc基因在GTD组织中的表达，结果提示：... 采用核酸分子杂交技术，以地高辛dig－11－dUTP标记的C－myc基因探针与54例妊娠滋养细胞疾病（GTD）石蜡包埋组织（其中葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌各18例）进行原位杂交，定性、半定量地测定了C－myc基因在GTD组织中的表达，结果提示：C－myc基因随着GTD病变的发展，其表达呈逐渐增高的趋势：C－myc基因与恶性滋养细胞肿瘤的临床分期及预后有关，即临床分期越晚，C－myc阳性表达率越高；年龄≥40岁、病程＞1年、前次妊娠为非葡萄胎、恶性程度高及有转移组的患者，其C－myc阳性表达率增高。 展开更多

关键词 妊娠滋养细胞疾病 妊娠滋养细胞肿瘤 C-MYC癌基因 核酸分子原位杂交

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全国第五届病理学术会议

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《医学研究生学报》 CAS 1990年第4期316-316,共1页

中华医学会病理学会第五届学术会议于1990年10月11日～14日在四川省成都市召开。大会共收到论文1000余篇,其中大会交流10篇,分组会交流269篇,反映了当前核酸原位分子杂交、免疫组化、形态计量等先进技术在病理学研究的新成果。大会作了... 中华医学会病理学会第五届学术会议于1990年10月11日～14日在四川省成都市召开。大会共收到论文1000余篇,其中大会交流10篇,分组会交流269篇,反映了当前核酸原位分子杂交、免疫组化、形态计量等先进技术在病理学研究的新成果。大会作了“核酸原位杂交在我国病理学上应用的概况”,“来自高转移癌系克隆DNA片段生物活性研究”,“胰腺癌和肝癌的癌基因表达”,“ 展开更多

关键词 病理学研究 学术会议 癌基因表达 核酸原位杂交 中华医学会 免疫学 生物活性 DNA 免疫细胞化学 专题报告

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遗传学

16

《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 1992年第1期1-4,共4页

用^(3)H标记的EBV DNA探针与以W片段转化的Rat-1细胞(W_(4))染色体进行核酸原位杂交,分析50个染色体分裂相。结果:1、8号染色体上银粒分布具显著性,对照组Rat-1细胞上基本无杂交银粒分布。表明EB病毒的BamHIW片段与1、8号染色体DNA有同... 用^(3)H标记的EBV DNA探针与以W片段转化的Rat-1细胞(W_(4))染色体进行核酸原位杂交,分析50个染色体分裂相。结果:1、8号染色体上银粒分布具显著性,对照组Rat-1细胞上基本无杂交银粒分布。表明EB病毒的BamHIW片段与1、8号染色体DNA有同源性。 展开更多

关键词 核酸原位杂交 遗传学 EBV DNA

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病理生理学

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《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 1993年第5期299-303,共5页

应用生物素标记cDNA探针、链霉亲和素-碱性磷酸酶检测系统对细胞涂片作核酸分子原位杂交,测定了人白血病细胞系J6-1、H1-Meg及9例急性白血病患者细胞的自分泌生长因子TGF-β TNF-α和癌基因v-sis、c-fms、N-ras的mRNA表达。

关键词 白血病 核酸分子原位杂交 TGF-Β 细胞涂片

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