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猪圆环病毒3型Rep蛋白的原核表达及酶活性分析
被引量：
1
1
作者
韩阳
关帅印
+3 位作者
李振
周赛赛
袁红根
宋云峰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期2061-2071,共11页
Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep...
Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep蛋白关键活性位点。结果表明,Rep蛋白在体外具有核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性。当蛋白浓度为1.6μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为1.0 mmol·L^(-1),37℃反应75 min时其ATPase活性达到最佳。当蛋白浓度为7μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为12.5 mmol·L^(-1),37℃反应60 min时其解旋酶活性达到最佳。Y89为Rep蛋白核酸内切酶活性的关键位点,K173、D210、N250为ATPase活性和解旋酶活性的关键位点。本研究建立了PCV3 Rep蛋白酶活性分析的方法,初步揭示了该蛋白的主要功能位点,为Rep蛋白的功能研究以及基于Rep蛋白活性的抗病毒药物研究奠定了基础。
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关键词
猪圆环病毒3
REP蛋白
核酸内切酶活性
ATPASE
活性
解旋
酶
活性
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职称材料
TSA可能通过抑制APE1BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性
2
作者
张志敏
杨镇洲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期413-416,共4页
目的探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响。方法给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 ...
目的探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响。方法给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 BER功能,应用CCK-8方法检测细胞增殖率,AP内切酶活性实验检测APE1 BER功能,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,immunoblot检测γ-H2AX表达水平。结果 TSA联合顺铂处理A549细胞明显增强顺铂的细胞增殖抑制,并促进顺铂诱导的细胞凋亡;随着TSA浓度的升高APE1内切酶活性逐渐减弱,TSA联合顺铂促进顺铂诱导的γ-H2AX表达;利用inhibitorⅢ抑制APE1内切酶活性,促进顺铂诱导细胞增殖抑制和凋亡水平。结论TSA可能通过抑制APE1BER功能增强顺铂诱导的细胞毒性反应。
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关键词
TSA
顺铂
AP
核酸内切酶活性
DNA损伤
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职称材料
Rrp44和SMG6在mRNA降解中的研究进展
3
作者
董强
王敏
+1 位作者
毕岩君
汪瑾
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第23期10885-10885,10916,共2页
介绍了有关Rrp44和SMG6核酸内切酶活性在mRNA中的最新研究进展,包括Rrp44与SMG6的内切酶活性在mRNA降解中的作用,以及它们的PIN结构域与核酸内切酶活性。
关键词
MRNA降解
Rrp44
SMG6
核酸
外
切
酶
活性
核酸内切酶活性
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职称材料
题名
猪圆环病毒3型Rep蛋白的原核表达及酶活性分析
被引量：
1
1
作者
韩阳
关帅印
李振
周赛赛
袁红根
宋云峰
机构
华中农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期2061-2071,共11页
基金
国家自然科学基金项目(31972658)。
文摘
Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep蛋白关键活性位点。结果表明,Rep蛋白在体外具有核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性。当蛋白浓度为1.6μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为1.0 mmol·L^(-1),37℃反应75 min时其ATPase活性达到最佳。当蛋白浓度为7μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为12.5 mmol·L^(-1),37℃反应60 min时其解旋酶活性达到最佳。Y89为Rep蛋白核酸内切酶活性的关键位点,K173、D210、N250为ATPase活性和解旋酶活性的关键位点。本研究建立了PCV3 Rep蛋白酶活性分析的方法,初步揭示了该蛋白的主要功能位点,为Rep蛋白的功能研究以及基于Rep蛋白活性的抗病毒药物研究奠定了基础。
关键词
猪圆环病毒3
REP蛋白
核酸内切酶活性
ATPASE
活性
解旋
酶
活性
Keywords
porcine circovirus type 3
Rep
endonuclease activity
ATPase activity
helicase activity
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
TSA可能通过抑制APE1BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性
2
作者
张志敏
杨镇洲
机构
第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期413-416,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(81272499)~~
文摘
目的探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响。方法给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 BER功能,应用CCK-8方法检测细胞增殖率,AP内切酶活性实验检测APE1 BER功能,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,immunoblot检测γ-H2AX表达水平。结果 TSA联合顺铂处理A549细胞明显增强顺铂的细胞增殖抑制,并促进顺铂诱导的细胞凋亡;随着TSA浓度的升高APE1内切酶活性逐渐减弱,TSA联合顺铂促进顺铂诱导的γ-H2AX表达;利用inhibitorⅢ抑制APE1内切酶活性,促进顺铂诱导细胞增殖抑制和凋亡水平。结论TSA可能通过抑制APE1BER功能增强顺铂诱导的细胞毒性反应。
关键词
TSA
顺铂
AP
核酸内切酶活性
DNA损伤
Keywords
trichostatin
cisplatin
AP endonuclease
DNA damage
分类号
R73-361 [医药卫生—肿瘤]
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
Rrp44和SMG6在mRNA降解中的研究进展
3
作者
董强
王敏
毕岩君
汪瑾
机构
南京农业大学生命科学实验中心
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第23期10885-10885,10916,共2页
文摘
介绍了有关Rrp44和SMG6核酸内切酶活性在mRNA中的最新研究进展,包括Rrp44与SMG6的内切酶活性在mRNA降解中的作用,以及它们的PIN结构域与核酸内切酶活性。
关键词
MRNA降解
Rrp44
SMG6
核酸
外
切
酶
活性
核酸内切酶活性
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒3型Rep蛋白的原核表达及酶活性分析
韩阳
关帅印
李振
周赛赛
袁红根
宋云峰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TSA可能通过抑制APE1BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性
张志敏
杨镇洲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
Rrp44和SMG6在mRNA降解中的研究进展
董强
王敏
毕岩君
汪瑾
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
0
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职称材料
已选择
0
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