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BRD7的亚细胞定位及其假定核输出信号序列的分离与鉴定 被引量:3
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作者 周鸣 徐晓杰 +5 位作者 彭聪 何佳瑾 彭淑平 李小玲 卢建红 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期373-378,共6页
BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细... BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细点状或条梭状分布,3株细胞中没有明显的细胞类型差异.通过对BRD7编码蛋白氨基酸序列进行比对分析,发现了1个具有亮氨酸富集特征的假定核输出信号序列pNES,该区域具有类似核输出信号特征序列“Lx(2,3)[LIVFM]x(2,3)Lx[LI]”(X代表任意氨基酸)的结构;通过功能分析,发现它不具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其亚细胞定位或胞浆胞核分布比例不受细霉素B(leptomycinB)干预的影响,说明这个pNES不具核输出信号结构域的功能,不是BRD7的核输出信号. 展开更多
关键词 BRD7 转录因子 亚细胞定位 核输出信号
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BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定 被引量:1
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作者 周鸣 郭驰 +7 位作者 李夏雨 何佳瑾 徐晓杰 王贺冉 唐珂 曹利 李小玲 李桂源 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期634-639,共6页
目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,... 目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,初步确定BRD7核输出信号序列所在的区域;进一步通过氨基酸序列的比对分析,确定该序列中氨基酸的含量特征及核输出信号潜在的位置。结果:BRD7的B7C1(219-450)具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其核输出功能在核输出信号阻滞剂Leptomycin B(LMB)的诱导下受到阻滞。该区段疏水氨基酸残基含量比较丰富,但没有发现具有典型亮氨酸聚集特征的核输出信号。结论:初步确定了BRD7核输出信号序列所在的区域为aa219-450。 展开更多
关键词 BRD7 核输出信号 亚细胞定位
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BS69的亚细胞定位及其核输出信号序列的分析鉴定 被引量:1
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作者 张超 于波 +3 位作者 邵勇 杨虹 张伟 万峻 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2145-2149,共5页
目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把B... 目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把BS69不同亚型片段的cDNA插入到真核表达载体pcDNA3.1上,转染Cos7细胞,用免疫荧光染色方法确定其亚细胞定位,用Western blotting方法验证不同亚型BS69在细胞中的功能。结果:在BS69亚型2上面发现1段富含亮氨酸的基因序列,与核输出信号序列极为相似。免疫荧光染色方法显示BS69亚型2定位于细胞浆中,而BS69亚型1和2个亚型共同序列编码的蛋白质则定位于细胞核中。BS69亚型2参与了EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barrvirus latent membrane protein1,LMP1)介导的信号转导途径。结论:BS69不同亚型具有不同的亚细胞定位,因此具有不同的生物学功能,其中核蛋白是转录调控因子,细胞浆蛋白则可能参与鼻咽癌发生发展的调控。 展开更多
关键词 腺病毒EIA相关蛋白BS69 核输出信号序列 亚细胞定位 转录因子
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突变A53Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析
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作者 王颖 钱进军 +4 位作者 赵康仁 马瑞 徐敏芳 熊御云 高静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期618-620,共3页
目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,... 目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,酶切、PCR鉴定重组质粒pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES。重组质粒通过Lipofactamine2000转染SH-SY5H细胞,免疫荧光法鉴定瞬转细胞。结果:真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES构建成功,NLS、NES能介导突变基因A53T-SNCA翻译的α-synuclein蛋白在核内表达或胞质表达。结论:基因A53T-SNCA翻译的突变α-synuclein蛋白核内高表达或胞质高表达可能是家族性帕金森氏病发病机制中关键因素之一。 展开更多
关键词 pRK5 输入信号 核输出信号
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昆虫中的核输出现象
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作者 吴一弘 陈国庆 +1 位作者 王文凯 冯国忠 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1095-1106,共12页
核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白... 核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白以利于病毒的组装及复制。本文主要介绍真核细胞中核输出的基本机制、蚊子和果蝇等模式昆虫中核输出通路;简述核输出机制在昆虫胚胎发育及免疫等生理活动及信号通路中的影响,以及与昆虫相关的病毒蛋白对昆虫等宿主核输出机制的利用和破坏情况。 展开更多
关键词 昆虫 孔复合体 质转运 核输出信号 输出受体
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Caspase-3细胞定位信号的检测与分析 被引量:1
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作者 卢智勇 卢智刚 曾昭淳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期543-548,共6页
Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一... Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一系列含caspase-3不同区段的截短突变体,与GFP融合表达,观察它们在细胞中的定位,以鉴定caspase-3分子中所含的核输出信号(nuclear export signal,NES)和核定位信号NLS(nuclear localization signal,NLS).结果发现,caspase-3分子中不存在明显的NLS,但存在一个明显的NES,该NES定位在caspase-3小亚基的C端,包括220-245位氨基酸残基. 展开更多
关键词 胱天蛋白酶3 核输出信号 定位信号
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